曾鸣
- 作品数：13 被引量：18H指数：3
- 供职机构：四川大学华西第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金四川省杰出青年学科带头人基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文学农业科学更多>>
- DNA损伤修复因子WDR70的生物学功能及其在人卵巢癌中的突变研究被引量：2
- 2016年
- 目的在细胞水平上分析新发现的DNA损伤修复因子WDR70的生物学功能,确定WDR70基因在人卵巢癌中的突变发生情况,以验证该基因的功能丢失是否与卵巢癌关联。方法在人细胞中用siRNA干扰WDR70基因表达,或用慢病毒和质粒过表达WDR70的野生型和突变体,通过免疫印迹和免疫荧光等方法研究该基因在DNA损伤后的亚细胞定位和DNA损伤信号通路中的作用;此外,抽提1例正常卵巢组织和16例卵巢癌标本的mRNA进行半定量RT-PCR扩增,对这些标本中的WDR70基因进行测序分析。结果 WDR70基因沉默和过表达其突变体导致同源重组功能蛋白——DNA复制蛋白A(RPA32)磷酸化修饰水平降低和重组酶——重组蛋白A(RAD51)向DNA损伤位点招募的能力减低;WDR70的功能障碍还导致染色体的断裂增多;同时,卵巢癌样本中发现多例WDR70突变型别。结论在体外系统中,WDR70参与DNA损伤修复过程,沉默或过表达其突变体将导致同源重组修复缺陷和染色体结构的不稳定;在卵巢癌基因组中,WDR70基因频繁出现突变,可能导致相应的DNA修复缺陷和基因组不稳定性的发生。因此,WDR70是一个潜在的卵巢癌抗癌基因。
- 郭莲娣王丹杨帆梁语珈杨雪琴覃意扬任来峰曾鸣唐子执王小军王思刘聪楼江燕陈杰
- 关键词：卵巢癌
- RPA32蛋白原核表达、多克隆抗体制备及初步鉴定
- 2012年
- 目的原核表达人RPA32蛋白并制备其多克隆抗体,为后续RPA32的功能研究奠定基础。方法以人cDNA文库为模板,构建原核表达质粒PET41a-RPA32,转化受体菌E.coli BL21,经IPTG诱导表达,采用GST亲和纯化方法获得GST-RPA32融合蛋白,将该融合蛋白免疫家兔制备RPA32多抗血清,最后采用Western blot检测其在多种肝细胞株中的特异性。结果在受体菌E.coli BL21中成功诱导表达GST-RPA32融合蛋白,免疫家兔后获得高效价RPA32抗血清,Western blot检测证实该血清能够识别多种肝细胞株中的RPA32及CPT作用后出现的RPA32磷酸化条带。结论成功制备兔抗人RPA32多克隆抗体,为RPA32在DNA损伤中的功能研究奠定了基础。
- 左斌王欢王海斌曾鸣任来峰李莎郭莲娣李明远
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- DNA损伤应答靶向抑制剂对卵巢癌细胞的化疗增敏作用被引量：3
- 2016年
- 目的观察DNA损伤应答抑制剂及其联合常规化疗药物(顺铂等)在卵巢癌耐药细胞株OVCAR-8中的作用,研究其化疗致敏效应。方法利用针对DNA损伤应答关键信号蛋白质的抑制剂,与顺铂等连用处理卵巢癌细胞,分析这些药物处理方式对卵巢癌细胞的杀伤能力。MTT法检测不同药物作用后OVCAR-8的增殖抑制情况;免疫荧光法检测OVCAR-8中磷酸化组蛋白2A变体(γH2AX)和p53结合蛋白1(53BP1)的表达,观察二者在DNA损伤位点的募集和形成灶点的能力。结果毛细血管扩张共济失调突变蛋白(ATM)/ATM和Rad 3相关蛋白(ATR)抑制剂与顺铂联用能抑制损伤修复机制的活化,明显减弱OVCAR-8细胞的增殖活力(P<0.01),促进其凋亡;在羟基脲和Wortmannin联合处理时,OVCAR-8细胞的ATR转导信号(如γH2AX)减弱,细胞生存率明显降低(P<0.05);多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)抑制剂与顺铂联合处理OVCAR-8细胞未发现明显的增敏作用(P>0.05)。结论适当的DNA损伤应答抑制剂有潜力提高常规化疗药物的抗肿瘤效果,以达到快速清除肿瘤细胞和防止产生耐药性的效果。
- 蔡思源唐子执曾鸣王小军楼江燕刘聪陈杰
- 关键词：卵巢肿瘤顺铂耐药抑制剂
- 脱氧核糖鸟苷酸对染色质松弛程度的调控作用
- 2024年
- 真核生物的染色质结构在基因转录、DNA修复等生物学过程中发生动态变化,其松弛程度和组蛋白修饰受到多种机制的严密调控.在研究DNA修复机制的过程中,发现敲除S期抑制基因(Spd1)可以逆转多种DNA损伤应答(DDR)突变体的表型缺陷,该遗传相互作用涉及到DDR的多个信号转导通路.Spd1的主要功能是抑制脱氧核糖核苷酸(dNTP)的生物合成,这说明敲除Spd1可以通过改变dNTP库的水平或组分来影响DNA损伤应答.进一步分析发现,Spd1缺陷促进染色质松弛,导致突变菌株的染色质对微球菌核酸酶的敏感,由此说明dNTP水平的增高可以促进染色质的紧密程度.最后,通过利用可以转运外源dNTP的FY2317菌株,制备原生质体,利用半离体的体系证明过量的dNTP,特别是脱氧核糖鸟苷酸(dGTP)可以模拟Spd1缺失菌株的表型,显著提高染色质的松弛程度.综上所述,研究发现了一种新的调控染色质松弛程度的遗传机制,可以影响DNA损伤修复的应答.
- 李英杰王小军刘聪曾鸣郭莲娣
- 关键词：DNA复制
- DNA双链断裂修复的选择性调控机制
- 2014年
- 在各种DNA损伤中,DNA双链断裂(double-strand break,DSB)是最为严重的一种,快速准确地修复DSB对维持基因组稳定性起着至关重要的作用。真核生物细胞通过一系列复杂的信号转导途径激活对DSB的修复,其中最为重要的是同源重组和非同源末端连接机制。最近的研究表明,这两种方式在DSB修复的早期是相互竞争的关系,其选择在很大程度上受到53BP1及同源蛋白质的调控。将讨论53BP1作为DSB修复途径的核心因子,在染色质水平整合BRCA1、Ct IP等修复因子和多种组蛋白修饰构成的信号途径,介导同源重组和非同源末端连接通路选择的分子机制。
- 唐子执刘聪曾鸣
- 关键词：DNA双链断裂同源重组
- HCV NS3/4A基因外来表达对Huh7细胞凋亡及DNA损伤应答的影响被引量：8
- 2014年
- NS3/4A是丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)编码的丝氨酸蛋白酶复合体,是病毒完成自身复制周期的必要成分。该研究为调查NS3/4A对细胞凋亡及DNA损伤应答(DNA-damage response,DDR)的影响,在Huh7细胞中表达了外来NS3/4A基因。通过DAPI染色和MTT分析显示,外来表达NS3/4A显著诱导细胞的凋亡和增殖活力的下降。免疫荧光检测结果表明,NS3/4A可明显增加细胞内源性DNA双链断裂(double strand breaks,DSBs)损伤(γH2AX灶点升高);而进一步用X-ray诱导细胞外源性DSBs损伤后,外来表达NS3/4A的细胞显示出明显的DSBs损伤修复缺陷(减缓的γH2AX灶点消退)。免疫印迹法检测结果显示,NS3/4A可抑制喜树碱(Camptothecin,CPT)诱导的ATM第1 981位丝氨酸的磷酸化(pATM1 981)。以上结果提示,NS3/4A基因外来表达可引起细胞DNA损伤,抑制ATM介导的DSBs损伤修复信号,诱导细胞凋亡通路的活化。
- 任来峰唐子执吴惠文许宁刘刚曾鸣郭莲娣
- 关键词：DNA损伤丙型肝炎病毒DNA双链断裂非结构蛋白3
- 组蛋白H2B单泛素化用于鉴定同源重组修复缺陷的用途
- 本发明涉及一种基于组蛋白H2B单泛素化用于检测同源重组修复缺陷的用途，具体涉及一种基于组蛋白H2B单泛素化水平检测同源重组修复缺陷的试剂盒及其用途。所述用途是利用检测组蛋白H2B单泛素化的水平来检测具有同源重组修复缺陷，...
- 曾鸣陈杰王思张臣良唐子执王小军刘聪任来峰
- 文献传递
- CRL4泛素化酶在卵巢癌中的功能和突变研究被引量：1
- 2017年
- 目的研究泛素化酶CRL4蛋白复合体家族成员CRL4-WD40重复序列结构域蛋白70(WDR70)在卵巢癌细胞中的DNA修复功能,以及卵巢癌组织中该泛素化酶基因的突变规律。方法利用免疫荧光方法,检测CRL4骨架蛋白DDB1及WDR70基因特异性沉默的卵巢癌细胞与其对应的对照组细胞在化疗药物或放射线照射诱导产生DNA双链断裂后,组蛋白H2AX(γH2AX)及单链DNA结合蛋白32(RPA32)磷酸化灶点显示的差异;BrdU标记和染色实验检测WDR70基因对DNA复制是否存在影响,同时利用免疫组化染色检测卵巢癌组织临床病理标本及正常卵巢组织标本中的WDR70和组蛋白H2B单泛素化(uH2B)染色差异,以阐明CRL4的DNA损伤应答特征,RT-PCR测定卵巢癌组织中WDR70的基因表达水平,并采用DNA测序确定WDR70突变位点。结果免疫荧光染色结果显示,CRL4-WDR70的不同蛋白亚基(DDB1、WDR70)在细胞周期检验点激活和uH2B介导的DNA末端回切过程中起着不同的作用:DDB1参与以上两个机制的调控,而WDR70只促进末端回切、RPA32在DNA断裂点的招募和同源重组修复。BrdU标记和染色结果显示WDR70基因对DNA复制并不存在影响。免疫组化结果显示,卵巢癌组织临床病理标本及正常卵巢组织标本中的WDR70和uH2B表达存在差异。RT-PCR结果显示WDR70基因的全长、5′和3′转录本水平在50%的卵巢癌组织中水平减低,出现多处外显子突变位点。结论 CRL4在DNA修复过程中具有促进H2B单泛素化、促进DNA末端回切和激活细胞周期检验点等多种重要功能,是维持基因组稳定性、遏阻卵巢癌发生的重要抗癌机制。
- 唐子执王海斌曾鸣刘聪李德华
- 关键词：卵巢癌
- Mre11多克隆抗体的制备及初步鉴定
- 2013年
- 目的原核表达人Mre11蛋白,并制备出Mre11蛋白的多克隆抗体,为研究Mre11蛋白功能奠定基础。方法以人cDNA文库为模板,构建出原核表达质粒PET41a-Mre11,然后转化受体菌E.coli BL21,再经IPTG诱导表达,通过采用GST亲和纯化获得GST-融合蛋白,将该融合蛋白免疫兔以制备出Mre11多抗血清,最后采用western-blot及免疫荧光等方法检测其在细胞中的特异性。结果在受体菌E.coli BL21中成功诱导表达出了GST-Mre11融合蛋白,免疫新西兰大白兔后获得了高效价的Mre11蛋白抗血清,IP、western-blot及免疫荧光等多种方法检测证实该抗血清能够特异性识别293T和U2OS细胞株中Mre11蛋白,并能够正确清楚检测293T和U2OS细胞株中的Mre11表达情况,具有良好的特异性和高效性。结论成功制备出了兔抗人Mre11蛋白的多克隆抗体,为深入研究Mre11蛋白在DNA损伤中的功能奠定了基础。
- 张付平王蕾郭莲娣王海斌任来峰曾鸣刘鳐马蕾
- 关键词：多克隆抗体原核表达
- 乙型肝炎病毒抑制肝细胞免疫检查点PD-1配体基因表达的研究被引量：1
- 2017年
- 目的在细胞水平上分析乙型肝炎病毒(HBV)复制及其编码的X基因(HBx)表达对细胞基因表达谱的影响,特别是免疫相关基因表达水平的变化。方法通过慢病毒和pcDNA瞬时转染过表达HBx基因,利用RNA-Seq和RT-qPCR等方法检测免疫相关基因的表达水平,并在HBV复制细胞系中进行验证。结果 HBV复制和HBx表达可以剂量依赖性抑制免疫检查点程序性死亡分子1(PD-1)配体基因(PD-L1/CD274)的表达,而HBx基因的H-box突变体的表达失去该抑制效应。结论HBV/HBx具有抑制PD-L1/CD274基因表达的能力,在病毒感染的急性期解除抗原特异性T细胞激活的检查点,活化细胞毒性T细胞,这可能导致T细胞对高度复制的细胞进行攻击和清除,帮助病毒进入较低复制状态,达到病毒-宿主的平衡状态并奠定HBV慢性感染的基础。
- 郭莲娣王丹唐子执曾鸣王小军刘聪李友伟
- 关键词：HBX
