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高低剂量伪狂犬病弱毒疫苗临床免疫效果的比较: 引言猪的伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(PRV)引起的一种危害严重的传染病,疫苗接种是防控该病的主要手段。一般而言,疫苗诱导免疫反应的强弱与其抗原剂量有关。现阶段猪的伪狂犬病疫苗生产厂家主要有国内、国外厂家,其生产的伪狂犬病疫...; 杨倩杨红杰周双海; 文献传递

猪圆环病毒2型减少猪肺泡巨噬细胞中伪狂犬病疫苗载量和CD80-CD86基因转录被引量：1: 2016年; 【目的】探明猪圆环病毒2型(PCV2)干扰伪狂犬病疫苗(PRV)免疫效果的可能机制。【方法】用PCV2与PRV在体外分别单接种和共接种仔猪肺泡巨噬细胞(AM),在接种后不同时间用荧光定量PCR技术检测PRV载量与共刺激分子CD80-CD86mRNA水平的动态变化。【结果】PRV组上清中PRV载量在接种后都显著(P<0.05)高于PCV2+PRV组。与对照组相比,在接种后48h内,PRV组CD80mRNA水平在接种后增加并在48h时达到显著水平,而PCV2组与PCV2+PRV组的CD80 mRNA水平都显著减少;在接种后48h内,CD86mRNA水平在PRV组都显著增加,在PCV2+PRV组则都显著减少,但在PCV2组仅在接种后48h显著减少。【结论】PCV2能够减少猪AM中PRV载量与CD80-CD86基因转录,这可能是PCV2抑制PRV免疫效果的机制之一。; 杨倩周维依于红欣周双海; 关键词：猪圆环病毒2型伪狂犬病疫苗肺泡巨噬细胞

猪瘟疫苗病毒荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2: 2017年; 【目的】建立一种检测猪瘟疫苗病毒(HCLV)含量的荧光定量PCR方法。【方法】用RT-PCR方法扩增HCLV基因200bp片段,构建含有该基因片段的重组质粒,对此重组质粒进行系列稀释后作为SYBR GreenⅠ荧光定量PCR模板,绘制定量检测HCLV的标准曲线。【结果】在(6.4×107~6.4×102)copies/μL模板浓度范围内,荧光定量PCR的扩增效率为92.2%,标准曲线的决定系数为0.9997。该方法的精确灵敏度为640copies/μL,重复性试验的变异系数小于2%,对牛病毒性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等的检测结果均为阴性。临床检测结果显示,不同商品猪瘟疫苗之间的病毒载量存在明显差异。【结论】建立了1种具有良好特异性与敏感性的HCLV荧光定量PCR检测方法。; 李满刘鑫宇杨倩于红欣周双海; 关键词：荧光定量PCR

嵌合猪圆环病毒的构建被引量：3: 2016年; 【目的】为了构建猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)的嵌合病毒,并为PCV2疫苗研究奠定基础。【方法】以PCV1基因组为骨架,将其衣壳基因替换为PCV2衣壳基因,来构建嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)DNA克隆,将PCV1-2DNA克隆转染PK-15细胞以获得拯救病毒PCV1-2,并测定PCV1-2在PK-15细胞中的增殖特性。【结果】酶切和序列测定显示成功构建出PCV1-2DNA克隆;免疫荧光试验和PCR检测显示成功获得拯救病毒PCV1-2,其效价达到106.0 TCID50/mL以上;一步生长曲线显示PCV1-2在PK-15细胞中的增殖特性与其亲本病毒近似。【结论】成功构建了1种具有较高体外增殖能力的嵌合猪圆环病毒。; 邵小雪杨倩孟凡伟于红欣周双海

高低效价伪狂犬病疫苗免疫效果的比较被引量：1: 2021年; 伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的一种危害养猪业的重要疫病,PRV-gE基因缺失疫苗接种是其有效预防措施,疫苗免疫虽能阻止临床发病,但难以完全阻止野毒感染。2010年以来,猪的伪狂犬病在国内出现了明显反弹,部分猪场的PRV野毒感染率明显上升,疫苗效价不足可能是其重要原因之一。现有多种猪伪狂犬病商品疫苗,不同商品疫苗标识的每头份剂量之间存在明显差异。; 方伟杨倩杨红杰任国鑫李焕荣张永红周双海; 关键词：伪狂犬病疫苗效价野毒感染临床发病 PRV 免疫效果

猪细环病毒2型荧光定量PCR检测方法的优化被引量：2: 2016年; 【目的】优化1种猪细环病毒2型(TTSu V2)的荧光定量PCR检测方法。【方法】对原有引物进行调整设计,以原有重组质粒为模板来重新进行检测TTSu V2 DNA的SYBR Green I real-time PCR扩增。【结果】新的TTSu V2 SYBR Green I荧光定量PCR的扩增效率为99.3%,标准曲线的决定系数为0.998,可准确检测的最低核酸模板浓度为50 copies/μL。与原方法相比较,新方法在熔解曲线、特异性、重复性方面都非常接近,但在扩增曲线方面得到明显改善,其可准确定量检测的灵敏度提高了至少10倍以上,临床检测数据也更加准确可靠。【结论】建立了一种新的准确灵敏度更高的定量检测TTSu V2的荧光定量PCR方法。; 王园杨倩滕飞于红欣周双海; 关键词：SYBR I 荧光定量PCR

猪细环病毒1型衣壳蛋白的原核表达及鉴定被引量：1: 2015年; 为了制备猪细环病毒1型(TTSuV1)抗体,并为建立TTSuV1免疫学检测方法奠定基础。用PCR技术扩增TTSuV1衣壳蛋白(Cap)基因片段,与载体pET-32a定向连接,构建重组原核表达质粒pET-32a-Cap,转化入大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导重组阳性菌表达,SDS-PAGE研究融合蛋白表达情况。对重组融合蛋白进行纯化、复性后,免疫BALB/c小鼠4次来制备鼠抗TTSuV1-Cap蛋白抗体。分别以鼠抗TTSuV1-Cap蛋白抗体和TTSuV1猪阳性血清为一抗,对重组融合蛋白进行免疫印迹检测。结果显示,成功表达了TTSuV1Cap截短体融合蛋白,表达产物以包涵体形式存在,重组蛋白可与鼠抗TTSuV1-Cap蛋白抗体及TTSuV1猪阳性血清发生特异性结合,表明表达的TTSuV1-Cap融合蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。; 王俊陈丙生杨倩于红欣刘芊麟周双海; 关键词：衣壳蛋白原核表达

猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用被引量：11: 2015年; 为了建立一种定量检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的实时荧光定量PCR方法,用RT-PCR扩增TGEV的M基因片段,构建含有TGEV M基因片段的重组质粒。用系列稀释后的重组质粒为模板,基于SYBR GreenⅠ来进行检测TGEV的实时荧光定量PCR扩增。结果显示,扩增效率为103.0%,相邻扩增曲线之间间距均匀,所有产物的熔解曲线具有单一整齐的峰,标准曲线具有优良的线性关系,最低可准确检测63copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于3%。用建立的PCR对3种常见猪源RNA病毒的检测结果均为阴性,对65份临床样品的检出率高于常规PCR。结果表明,建立了一种灵敏度高、特异性强、重复性好的检测TGEV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,可用于TGEV的定量检测和猪传染性胃肠炎的早期快速诊断。; 张雪杨倩于红欣王俊孟凡伟周双海; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒 SYBR 荧光定量PCR 早期快速诊断

伪狂犬病病毒野毒感染快速检测方法的比较: 2016年; 【目的】对猪群伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染的快速检测方法进行比较。【方法】采集肥育猪的血清和扁桃体,用ELISA方法检测血清中PRV-gE蛋白抗体,用常规PCR方法和荧光定量PCR方法检测血清与扁桃体中的PRV-gE基因,比较分析猪群PRV野毒感染情况。【结果】结果显示,荧光定量PCR方法对血清与扁桃体中的PRV-gE基因的检出率均高于常规PCR方法,gE基因在扁桃体中的检出率高于血清,而gE蛋白抗体检出率高于gE基因检出率。【结论】PRV-gE蛋白抗体检测敏感性高于gE基因检测,荧光定量PCR对gE基因的检测敏感性高于常规PCR,gE基因在扁桃体中的检测敏感性高于血清,为猪群PRV野毒感染快速检测方法的选用提供了试验依据。; 杨红杰李雪明于红欣邹战明杨倩周双海; 关键词：伪狂犬病病毒野毒感染血清扁桃体

猪细环病毒2型感染与断奶后多系统衰竭综合征的相关性分析: 2018年; 【目的】分析猪细环病毒2型(TTSuV2)感染与猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的发生是否存在临床相关性。【方法】采集35头临床疑似PMWS病猪和35头同群健康猪的血清,用综合诊断方法来确认PMWS病猪与猪圆环病毒2型(PCV2)亚临床感染猪,用荧光定量PCR方法检测PCV2与TTSuV2载量,对2种病毒载量分别进行差异分析,并对二者进行相关性分析。【结果】经综合诊断确认,有24头PMWS病猪和27头PCV2亚临床感染猪,前者血清中PCV2载量与TTSuV2载量都极显著(P<0.01)高于后者,且TTSuV2载量与PCV2载量之间存在极显著(P<0.01)相关。【结论】PMWS与TTSuV2感染在临床上存在一定相关。; 王园胡胜云杨倩杨倩刘鑫宇周双海; 关键词：断奶后多系统衰竭综合征病毒载量

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杨倩

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