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于红欣: 作品数：22 被引量：70H指数：6; 供职机构：北京农学院动物科学技术学院更多>>; 发文基金：北京市属高等学校高层次人才引进与培养计划国家自然科学基金北京市科技计划项目更多>>; 相关领域：农业科学理学更多>>

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猪细环病毒2型荧光定量PCR检测方法的优化被引量：2: 2016年; 【目的】优化1种猪细环病毒2型(TTSu V2)的荧光定量PCR检测方法。【方法】对原有引物进行调整设计,以原有重组质粒为模板来重新进行检测TTSu V2 DNA的SYBR Green I real-time PCR扩增。【结果】新的TTSu V2 SYBR Green I荧光定量PCR的扩增效率为99.3%,标准曲线的决定系数为0.998,可准确检测的最低核酸模板浓度为50 copies/μL。与原方法相比较,新方法在熔解曲线、特异性、重复性方面都非常接近,但在扩增曲线方面得到明显改善,其可准确定量检测的灵敏度提高了至少10倍以上,临床检测数据也更加准确可靠。【结论】建立了一种新的准确灵敏度更高的定量检测TTSu V2的荧光定量PCR方法。; 王园杨倩滕飞于红欣周双海; 关键词：SYBR I 荧光定量PCR

伪狂犬病病毒gE基因荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5: 2015年; 伪狂犬病病毒(PRV)野毒有gE基因,而其疫苗毒株无gE基因,这为检测有无PRV野毒感染提供参考。用PCR方法扩增PRV的gE基因片段,构建含有PRV gE基因片段的重组质粒。以系列稀释后的重组质粒作为模板,应用SYBR GreenⅠ来进行检测PRV gE基因的实时荧光定量PCR扩增。结果显示:在(6.9×107~6.9×101)copies/μL范围内,相邻扩增曲线之间间距均匀,所有产物具有单一整齐的熔解曲线峰,标准曲线具有优良的线性关系。该方法最低可准确检测69copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于2%,对PRV-gE基因缺失疫苗毒株和常见猪源DNA病毒的检测结果均为阴性,对临床样品的检出率高于常规PCR方法。研究结果表明,建立了1种特异性强、灵敏度高、重复性好的检测PRV gE基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,可用于PRV野毒感染的定量检测。; 李雪明于红欣杨红杰王俊王俊; 关键词：伪狂犬病病毒 GE基因荧光定量PCR

猪细环病毒1型衣壳蛋白的原核表达及鉴定被引量：1: 2015年; 为了制备猪细环病毒1型(TTSuV1)抗体,并为建立TTSuV1免疫学检测方法奠定基础。用PCR技术扩增TTSuV1衣壳蛋白(Cap)基因片段,与载体pET-32a定向连接,构建重组原核表达质粒pET-32a-Cap,转化入大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导重组阳性菌表达,SDS-PAGE研究融合蛋白表达情况。对重组融合蛋白进行纯化、复性后,免疫BALB/c小鼠4次来制备鼠抗TTSuV1-Cap蛋白抗体。分别以鼠抗TTSuV1-Cap蛋白抗体和TTSuV1猪阳性血清为一抗,对重组融合蛋白进行免疫印迹检测。结果显示,成功表达了TTSuV1Cap截短体融合蛋白,表达产物以包涵体形式存在,重组蛋白可与鼠抗TTSuV1-Cap蛋白抗体及TTSuV1猪阳性血清发生特异性结合,表明表达的TTSuV1-Cap融合蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。; 王俊陈丙生杨倩于红欣刘芊麟周双海; 关键词：衣壳蛋白原核表达

猪细环病毒1型感染与猪繁殖与呼吸综合征的相关性分析: 引言由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是当前危害全球养猪业的主要疫病。猪细环病毒1型(TTSuV1)的临床感染普遍存在,有资料报道TTSuV1单独感染可引起一定的病理变化,可促进猪...; 于红欣陈天慧周双海; 文献传递

嵌合猪圆环病毒的构建被引量：3: 2016年; 【目的】为了构建猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)的嵌合病毒,并为PCV2疫苗研究奠定基础。【方法】以PCV1基因组为骨架,将其衣壳基因替换为PCV2衣壳基因,来构建嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)DNA克隆,将PCV1-2DNA克隆转染PK-15细胞以获得拯救病毒PCV1-2,并测定PCV1-2在PK-15细胞中的增殖特性。【结果】酶切和序列测定显示成功构建出PCV1-2DNA克隆;免疫荧光试验和PCR检测显示成功获得拯救病毒PCV1-2,其效价达到106.0 TCID50/mL以上;一步生长曲线显示PCV1-2在PK-15细胞中的增殖特性与其亲本病毒近似。【结论】成功构建了1种具有较高体外增殖能力的嵌合猪圆环病毒。; 邵小雪杨倩孟凡伟于红欣周双海

猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量PCR检测方法的建立被引量：8: 2016年; 【目的】建立一种定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的荧光定量PCR方法。【方法】用RTPCR方法扩增PRRSV的N基因片段,构建含有N基因片段的重组质粒,以不同浓度的PRRSV-N基因重组质粒作为模板来进行检测PRRSV的SYBR Green I荧光定量PCR扩增。【结果】PRRSV SYBR Green I荧光定量PCR的扩增效率为98.2%,标准曲线的决定系数为0.9995,可准确检测的最低核酸模板浓度为60copies/μL,重复性试验的变异系数小于3%,对3种常见的猪源RNA病毒的检测结果全为阴性。临床检测显示,PRRS病猪的血清中PRRSV载量极显著(P<0.01)高于PRRSV亚临床感染猪。【结论】建立了一种可用于PRRSV定量检测与PRRS早期快速诊断的特异性强、灵敏度高、重复性好的PRRSV SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。; 单晶晶陈天慧于红欣王立娇周双海; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 SYBR I 荧光定量PCR

猪圆环病毒1型real-time PCR检测方法的建立被引量：6: 2014年; 为了建立一种定量检测猪圆环病毒1型(PCV1)的实时荧光定量PCR方法,根据PCV1基因序列设计了1对特异性引物,并构建含有PCV1基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板建立了定量检测PCV1的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,并绘制标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,该方法的标准曲线的决定系数为0.999,显示出优良的线性关系;最低可准确检测320copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于2%;该方法对PCV2、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒等的检测结果均为阴性;对临床样品的检出率高于常规PCR方法。结果表明,建立的real-time PCR特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于PCV1的检测与定量分析。; 于红欣王立娇孟凡伟王俊周双海; 关键词：猪圆环病毒1型 SYBR REAL-TIME PCR

猪细环病毒1型real-time PCR检测方法的建立被引量：4: 2014年; 参考猪细环病毒1型(TTSuV 1)基因非编码区保守序列设计了1对特异性引物,构建含有TTSuV 1基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板建立了定量检测TTSuV 1的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,并绘制标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,该方法标准曲线的决定系数为0.999 5,表明具有优良的线性关系;最低可精确检测63copies/μL的核酸模板;重复性试验的变异系数小于2%;对TTSuV 2、猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒等均检测不到荧光信号。对临床样品的检出率高于常规PCR方法。结果表明,建立的real-time PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于TTSuV 1的检测与定量分析。; 王俊单晶晶孟凡伟于红欣黎阳周双海; 关键词：实时定量PCR SYBR

伪狂犬病病毒gE基因荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用: 为建立一种快速检测伪狂犬病病毒(PRV)野毒的荧光定量PCR方法.根据PRV-gE基因序列设计1对特异性引物,构建含有PRV-gE基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板来建立定量检测PRV-gE的SYBR G...; 于红欣李雪明杨红杰王俊周双海; 关键词：伪狂犬病病毒 GE基因荧光定量聚合酶链反应; 文献传递

黑龙江某猪场暴发猪细小病毒性流产的PCR诊断: 2013年; 猪细小病毒（Porcine parvovirus，PPV）是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一，主要是导致母猪发生流产、死胎、胎儿木乃伊化。PPV引起的母猪繁殖障碍一直受到人们的重视，但仍然可见该病发生的报道。现就黑龙江省安达市某规模化猪场母猪群暴发流产现象进行探讨。; 张泽财周玉龙许云龙于红欣王建赵文静李中凯朴范泽; 关键词：PCR诊断母猪繁殖障碍猪细小病毒流产现象

于红欣

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