杨婉
- 作品数：8 被引量：26H指数：4
- 供职机构：安徽医科大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省科技厅年度重点项目安徽高校省级自然科学研究基金更多>>
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- 吗啡预处理对H9c2心肌细胞缺氧/复氧时microRNA表达的影响被引量：10
- 2015年
- 目的探讨吗啡预处理(morphine preconditioning,MPC)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia reoxygenation,H/R)时microRNA(miRNA)表达的影响,为明确其机制提供参考。方法培养H9c2心肌细胞,随机分为3组(n=4):1正常对照组(CON):H9c2心肌细胞置于DMEM/F12细胞培养液常规培养;2缺氧/复氧组(H/R):对心肌细胞行缺氧5h/复氧1h处理;3吗啡预处理组(MPC+H/R):在H/R前,应用1μmol·L^(-1)吗啡预处理10 min。处理结束后,采用CCK-8法检测细胞增殖、化学比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡、Western blot法检测细胞内Fas蛋白表达、荧光定量RT-PCR法检测细胞miRNA表达水平。结果与CON组比,H/R组细胞活力降低,LDH活性升高,细胞凋亡率增加,Fas蛋白水平升高(P<0.01);MPC可明显提高细胞活力,降低LDH活性,抑制细胞凋亡,降低Fas蛋白水平(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,与CON组相比,H/R组miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216和let-7e-5p表达明显下调,而MPC能明显地抑制H/R对这些miRNA表达的下调作用(P<0.01)。结论吗啡预处理减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤可能与调控miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216和let7e-5p等miRNA表达有关。
- 韩正怡何淑芳程洁许士进杨婉张野
- 关键词：吗啡预处理H9C2心肌细胞FAS
- 缺氧预处理诱导大鼠心肌细胞差异表达microRNA的芯片筛选与生物信息学分析
- 目的筛选缺氧预处理(hypoxia preconditioning,HPC)诱导成年大鼠心肌细胞差异表达的microRNA(miRNA),并预测分析miRNA调控的靶基因与功能。方法体外分离培养成年大鼠心室肌细胞,分为对...
- 何淑芳朱海娟程洁许士进杨婉张野
- 关键词：心肌细胞成年大鼠缺氧预处理MICRORNA
- 文献传递
- 多柔比星对心肌细胞的损伤作用及对microRNA的影响被引量：2
- 2017年
- 目的探讨多柔比星对原代乳鼠心肌细胞的损伤作用及其对微小RNA(miRNA)表达的影响。方法原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为6组:对照组,不同浓度多柔比星(0.125、0.25、0.5、1、2μmol/L)处理组。对照组细胞正常培养,处理组细胞使用终浓度分别为0.125、0.25、0.5、1、2μmol/L的多柔比星处理24 h。倒置显微镜下观察心肌细胞搏动频率,CCK-8法检测细胞活力,微板法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,荧光定量RT-PCR(qRTPCR)法检测心肌细胞miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-6216和miR-30e-5p表达水平。结果与对照组相比,多柔比星减慢心肌细胞搏动频率,降低细胞活力,升高LDH活性(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与对照组相比,多柔比星1μmol/L处理组心肌细胞miR-133b-5p、miR-6216和miR-30e-5p表达显著上调,miR-133a-5p表达显著下调。结论多柔比星对原代乳鼠心肌细胞具有损伤作用,其机制可能与调控miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-6216和miR-30e-5p等miRNA表达有关。
- 杨婉金世云许士进张野何淑芳
- 关键词：多柔比星心肌毒性乳鼠心肌细胞微小RNA
- p38MAPK信号通路在吗啡预处理减轻心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用：离体实验被引量：3
- 2016年
- 目的。探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路在吗啡预处理减轻心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法成年雄性SD大鼠，体重200～230g，6～7周龄，尾静脉注射盐酸多柔比星2mg／kg，1次，周，连续6周，制备大鼠慢性心力衰竭模型。第8周末取成功制备慢性心力衰竭模型的大鼠30只，采用随机数字表法分为5组（n=6）：假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I／R组）、吗啡预处理组（MPC组）、p38MAPK抑制剂SB203580＋吗啡预处理组（SBM组）和SB203580对照组（SB组）。采用Langendorff离体心脏灌注及结扎左冠状动脉前降支30min，再灌注120min制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。MPC组平衡后灌注含1μmol／L吗啡的K-H液5min，间隔5min，共3个循环，随后制备心肌缺血再灌注损伤模型。SBM组于吗啡预处理前10min灌注含5Ixmol／LSB203580的K-H液至缺血5min，共45min；SB组不实施吗啡预处理，仅于缺血前40min至缺血5min持续灌注含5μmol／LSB203580的K—H液。于心脏稳定灌注15min、再灌注5和10min时收集冠脉流出液，采用化学比色法检测LDH活性。再灌注10min时Sham组、I／R组和MPC组采用Western blot法检测心肌磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）的表达水平；再灌注120min时，测量缺血危险区体积（AAR）、左心室与右心室总体积（LV＋RV）、梗死区体积（IS）及IS／AAR比值。结果与Sham组比较，其余各组再灌注时冠脉流出液LDH活性升高，IS和IS／AAR比值增大，I／R组和MPC组心肌p-p38MAPK表达上调（P〈0．05）；与I／R组比较，MPC组再灌注时冠脉流出液LDH活性降低，心肌p-p38MAPK表达上调，IS和IS／AAR比值减小（P〈0．05），SBM组和SB组冠脉流出液LDH活性、IS和IS／AAR比值差异无统计学意义（P〉0．05）；与MPC组比较，SBM组再灌注时冠脉流出液LDH活性升高，IS和IS／AAR比值增大（P〈0．05）。结论吗啡预处理�
- 杨婉金世云许士进张野何淑芳
- 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶类心力衰竭心肌再灌注损伤吗啡
- 缺氧预处理诱导大鼠心肌细胞差异表达microRNA的芯片筛选与生物信息学分析被引量：4
- 2015年
- 目的筛选缺氧预处理(hypoxia preconditioning,HPC)诱导成年大鼠心肌细胞差异表达的microRNA(miRNA),并预测分析miRNA调控的靶基因与功能。方法体外分离培养成年大鼠心室肌细胞,分为对照组(CON)和缺氧预处理组(HPC),CON组细胞正常培养,HPC组细胞经历10 min缺氧和30 min再给氧,提取心肌细胞总RNA,行miRNA芯片筛选,qRT-PCR验证芯片结果。利用软件预测差异表达miRNA调控的靶基因,分析靶基因富集的基因功能(gene ontology,GO)和信号通路(pathway)。结果与CON组相比,HPC可诱导大鼠心肌细胞miRNA表达谱发生明显改变,共有12个miRNA上调,14个miRNA下调(P<0.01,FDR<0.05);选择其中荧光信号值>500的7个miRNA,用于生物信息学分析。qRT-PCR检测miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216水平,变化趋势与芯片结果一致。生物信息学分析显示差异表达miRNA所调控的靶基因功能明显富集于27个GO和6条信号通路。结论 HPC可诱导成年大鼠心肌细胞miRNA表达谱明显改变,这些差异表达miRNA可能通过调控靶基因参与HPC介导的心肌细胞保护作用。
- 何淑芳朱海娟程洁许士进杨婉张野
- 关键词：心肌细胞成年大鼠缺氧预处理MICRORNA
- Fas/caspase-8/3和ERK信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用被引量：5
- 2018年
- 目的评价Fas/caspase-8/3和细胞外信号调节激酶(extracellular signaling-regulated kinase,ERK)信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的作用。方法培养H9c2心肌细胞,随机分为4组(n=3):(1)正常对照组:H9c2细胞置于DMEM/F12细胞培养液中培养;(2)H/R组:将H9c2细胞进行5 h缺氧和1 h复氧处理;(3)Fas siRNA组(H/R+Fas-siRNA):H9c2细胞转染Fas siRNA 24 h后进行H/R损伤;(4)siRNA阴性对照组(H/R+siRNA-NC):H9c2细胞转染Fas siRNA-NC 24 h后进行H/R损伤。处理结束后,采用CCK-8法检测细胞活力;微量酶标法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性;AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;荧光定量RT-PCR法检测细胞Fas mRNA表达水平;Western blot法检测细胞内Fas、caspase-8/3、ERK和GSK-3β蛋白表达。结果与对照组相比,H/R组细胞活力降低,LDH活性和细胞凋亡增加,Fas mRNA及蛋白水平升高,cleaved caspase-8/3、p-ERK、p-GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组相比,H/R+FassiRNA组细胞活力明显提高,LDH活性和细胞凋亡率降低,Fas mRNA及蛋白表达水平降低,cleaved caspase-8/3蛋白表达降低,p-ERK、p-GSK-3β蛋白表达增高(P<0.05),而H/R+siRNA-NC组上述指标差异无统计学意义。结论 Fas/caspase-8/3和ERK信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞H/R损伤中发挥着重要作用。
- 潘永露何淑芳韩正怡窦梦云杨婉程洁陈志武张野
- 关键词：FAS细胞外信号调节激酶心肌细胞
- ERK信号蛋白在吗啡预处理减轻大鼠全心缺血/再灌注损伤中的作用被引量：5
- 2018年
- 目的探讨细胞外信号调节激酶(extracellular signaling-regulated kinase,ERK)在吗啡预处理减轻大鼠全心缺血/再灌注损伤中的作用。方法健康成年♂SD大鼠,采用随机数字表法分为6组(n=10):对照组(control,CON)、缺血/再灌注组(ischemia/reperfusion,I/R)、缺血预处理组(ischemia preconditioning,IPC)、吗啡1μmol·L^(-1)预处理组(morphine preconditioning,MPC)、MPC+ERK抑制剂PD98059组(MPD)、ERK抑制剂PD98059对照组(PD)。利用Langendorff灌流系统对各组大鼠离体心脏在进行相应处理后,化学比色法检测基线、再灌注5、10 min时冠脉流出液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性;同时利用充水球囊置入左心室持续监测左心室发展压(left ventricular developed pressure,LVDP)。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色测量梗死区(infarct size,IS)、缺血危险区(area at risk,AAR)体积及IS/AAR比值;Western blot检测心肌组织ERK磷酸化水平。结果与I/R组比较,MPC组IS和IS/AAR减小,再灌注5、10 min时LDH活性降低,再灌注结束时LVDP升高,心肌组织磷酸化ERK(p-ERK)相对表达量增加;ERK抑制剂PD98059阻断MPC的保护作用,增加心肌梗死面积,升高再灌注5、10 min时LDH活性,降低再灌注末LVDP,此外,PD98059抑制MPC诱导的ERK磷酸化。结论吗啡预处理可能通过诱导ERK磷酸化水平升高而减轻大鼠全心缺血/再灌注损伤。
- 黄俊杨婉金世云产进中刘中张野何淑芳
- 关键词：细胞外信号调节激酶吗啡预处理阿片
- 吗啡预处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧时miR-133b-5p与Fas表达的影响被引量：1
- 2015年
- 目的 评价吗啡预处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧时微小RNA-133b-5p（miR-133b-5p）与Fas表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠心室肌细胞,接种于24孔板或60 mm培养皿培养,采用随机数字表法分为3组（n=24）：对照组（C组）、缺氧复氧组（H/R组）和吗啡预处理组（MPC组）.C组细胞正常培养,H/R和MPC组细胞缺氧90 min后复氧,MPC组于缺氧前采用含lμmol/L吗啡的无血清DMEM培养10 min,再换为无吗啡培养液培养30 min.于复氧120 min时采用MTT法测定心肌细胞活力,检测培养液乳酸脱氢酶（LDH）活性,采用Hoechst 33234染色法检测心肌细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率;实时定量PCR法检测miR-133b-5p与Fas mRNA的表达,Western blot法检测Fas蛋白的表达.结果 与C组比较,H/R组心肌细胞活力降低,培养液LDH活性和细胞凋亡率升高,miR-133b-5p表达下调,Fas mRNA及蛋白表达上调（P＜0.05）;与H/R组比较,MPC组心肌细胞活力升高,培养液LDH活性和细胞凋亡率降低,miR-133b-5p表达上调,Fas mRNA及蛋白表达下调（P＜0.05）.结论 吗啡预处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的机制与上调miR-133b-5p表达,下调Fas表达有关.
- 何淑芳朱海娟程洁许士进韩正怡杨婉张野
- 关键词：吗啡细胞低氧微RNASCD95
