刘丽辉
- 作品数：34 被引量：68H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学冶金工程更多>>
- 猕猴间充质干细胞的培养及生物学特性研究被引量：3
- 2005年
- 本研究的目的是分离、培养猕猴的骨髓间充质干细胞(MSC),分析其表型及生物学特性。从猕猴股骨抽取骨髓,分离单个核细胞,24小时后去除非贴壁细胞,当贴壁细胞生长到80%融合时进行传代,传至5代后用流式细胞术检测细胞表型,在不同条件下诱导其多向分化,用特异性染色鉴定,用RTPCR法检测MSC表达的细胞因子mRNA。结果表明:贴壁生长的猕猴MSC主要为典型的成纤维细胞样形态,在对数生长期细胞的倍增时间约31-40小时,可以连续传代、成功扩增。第5代猕猴MSC细胞高表达Flk1、CD29、CD105和CD166,低表达造血细胞标记CD34、CD45和CD33。在不同诱导分化条件下,猕猴的MSC可以分化为成骨细胞及脂肪细胞。用RTPCR法检测,猕猴的MSC高表达IL-6、TGF-β,弱表达TNF-α,而I-L2、FasL和IFN-γ未被检出。结论:猕猴的MSC可以成功分离、培养,其生物学特性与人的MSC相似。
- 刘丽辉孙昭孙琪云黄雅静满秋红郭梅赵春华艾辉胜
- 关键词：猕猴间充质干细胞细胞培养干细胞生物学
- 阿米福汀在血液系统疾病中的应用
- 阿米福汀是放化疗保护剂的代表性药物，除此之外，目前还发现一些其他作用提示可应用于血液系统疾病的治疗。本文介绍了阿米福汀作用机制，浅谈了阿米福汀在血液系统疾病中的临床应用。
- 胡文青刘丽辉陈虎
- 关键词：骨髓增生异常综合征白血病造血干细胞移植骨髓瘤
- 文献传递
- 猕猴非清髓单倍相合造血干细胞移植模型的建立被引量：4
- 2005年
- 为了研究用非清髓预处理是否能建立猕猴单倍相合造血干细胞移植模型,采用健康、单倍相合的亲代猕猴为供者,子代为受者。受体用氟达拉滨+环磷酰胺+全身照射+兔抗人胸腺细胞球蛋白作非清髓性预处理;用环胞菌素A、霉酚酸酯、鼠抗人CD25单克隆抗体作为移植物抗宿主病(GVHD)预防方案;第0天输注供者动员后的外周血造血干细胞;定期监测造血恢复、造血嵌合水平和GVHD发生等情况。结果表明:4例猕猴用非清髓性预处理后,移植后8天内造血均能恢复,早期均有供者造血干细胞植入;例3、例4植入成功,在移植后12、14天出现Ⅱ-Ⅲ度GVHD;例1在移植后7天低比例供者植入,最后出现移植排斥;例2在移植后7天供者成分占50%,后因肾衰早期死亡。结论:用非清髓性预处理可以跨越单倍相合猕猴的MHC屏障,成功建立了单倍相合造血干细胞移植的模型,为进一步实验研究奠定了基础。
- 刘丽辉孙琪云胡锴勋范传波黄雅静边莉肖秀斌姚波郭梅余长林艾辉胜
- 关键词：猕猴造血干细胞移植
- 猕猴造血嵌合体检测方法的建立与应用被引量：1
- 2005年
- 在受体内检测到供体细胞嵌合是判断动物移植模型成功建立的关键。为了研究猕猴移植模型中的造血细胞嵌合状态,本研究利用多聚酶链反应(PCR)扩增猕猴Y特异性序列,建立检测性别不同供受者猕猴移植模型嵌合体的方法;用体外雄性、雌性DNA混合稀释实验研究该方法的敏感性;用染色体分析法验证该方法的准确性,并对1例异基因外周血造血干细胞移植的猕猴和1例间充质干细胞(MSC)异体输注的猕猴进行嵌合监测。结果表明:雄性猕猴DNA扩增产物长度为176bp,雌性无扩增产物,敏感性达0.05%(雄性/雌性DNA比例)。对异基因外周血造血干细胞移植的猕猴,用Y特异性序列分析法和性别染色体检测法于移植后7及14天均检测到雄性供者嵌合。输注非亲缘雄性MSC的雌性猕猴,输注后1小时的外周血和30天的骨髓用本方法检出雄性供体嵌合,结果性别染色体检测未发现雄性供体嵌合。结论:采用PCR法扩增猕猴Y特异性序列检测猕猴移植模型嵌合体方法简便,样本需要量少,敏感性高。该法可用于猕猴各种异体器官移植和细胞输注实验的嵌合状态评价。
- 孙琪云刘丽辉胡锴勋范传波黄雅静边莉郭梅艾辉胜
- 关键词：猕猴嵌合体
- 骨髓间充质干细胞静脉输注对猕猴细胞免疫功能的影响被引量：1
- 2011年
- 目的评价猕猴间充质干细胞（MSC）静脉异体输注后对细胞免疫功能的影响。方法分离培养MSC；不做其他处理，将异体MSC静脉输注给受者猴，通过定期监测外周血象、混合淋巴细胞反应（MLR）、T细胞亚群来判断MSC输注后受者细胞免疫功能的变化。结果成功培养了猕猴的MSC。异体MSC输注后，受者无明显毒性反应、排异表现及血象变化。可以在一定时间内（2周左右）抑制受者T细胞在MLR中的增殖活性，受者猴A2、A3及A4输注MSC的数量分别为4．0×10^5／kg、1．0×10^6／kg、2．0×10^6／kg，在输注后第14天时，MLR的相对反应值（RR）与输注前比较均明显降低，分别从（46．0±2．6）％、（40．9±2．3）％、（48.3±2．0）％降至（40．4±1．73）％、（33．0±2．1）％、（39．0±1．0）％（F=10．19，P=0．023；F=2．593，P=0．013；F=28．431，P=0．003），输注后第30天时RR均恢复到输注前水平；统计结果显示，抑制程度（ARR）与输注MSC数量呈正相关（F=27．413，P=0．038）。A4是输注MSC数量最多的受者，输注后第14天开始，外周血CD3＋、CD3＋CD4＋、CD3＋CD4＋细胞的百分比与输注前相比有所降低，在输注后第30天左右恢复至输注前水平。结论单纯体内输注异体MSC，可以在一定时间内抑制受者T细胞的免疫活性；免疫抑制程度与输注MSC数量呈正相关。MSC特殊的免疫学特性使其具有深远的临床应用价值。
- 范传波王朝晖王磊胡锴勋刘丽辉孙琪云边莉乌庆超
- 关键词：间充质干细胞猕猴属免疫
- 酶联免疫斑点试验检测技术在血液病合并痰涂片抗酸杆菌阴性结核病诊断中的应用被引量：7
- 2010年
- 目的评价酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测外周血中结核分枝杆菌抗原特异性γ干扰素水平,在诊断免疫功能低下的血液病合并痰涂片抗酸杆菌阴性的结核病患者时的应用价值。方法采用以结核分枝杆菌特异性重组ESAT-6和CFP-10融合蛋白为刺激抗原的ELISPOT检测技术,分析了51例发热的血液病怀疑合并痰涂片抗酸杆菌阴性结核病患者的外周血,作能分泌结核特异的γ干扰素的T淋巴细胞测定,以传统的诊断方法为对照。结果确诊血液病合并结核病24例,排除活动性结核病27例;ELISPOT的灵敏度为73.6%,高于PPD皮肤试验的54.5%(P<0.05),高于抗结核抗体试验的37.5%(P<0.01);准确度82.6%高于抗结核抗体的62.5%(P<0.05),高于PPD的77.77%;特异度88.88%,与抗结核抗体检测(87.5%)及PPD(93.75%)相似;ELISPOT与抗结核抗体、PPD试验结果联合分析,其诊断率为79.2%。此外,ELISPOT检测结果与性别、年龄、结核病史、抗结核抗体、机体免疫状态、外周血淋巴细胞数等影响因素之间的相关性进行了初步探讨。结论ELISPOT是血液病患者合并活动性结核的重要辅助诊断工具。
- 叶丽萍梁艳施兵刘丽辉金建刚张玉珠胡文清刘明娟阳幼荣陈虎吴雪琼
- 关键词：血液病结核病酶联免疫斑点试验
- 细胞因子在白血病异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病中的水平及其意义被引量：3
- 2007年
- 目的:探究细胞因子TNF-α、IL-6和IL-8在白血病异基因造血干细胞移植后的变化和病情及预后的关系。方法:用放射免疫分析检测了白血病异基因造血干细胞移植患者(48例)、正常健康人(30例)血清TNF-α、IL-6和IL-8水平,对移植后发生或未发生急性移植物抗宿主病(aGVHD)及发生或未发生慢性移植物抗宿主病(cGVHD)进行了比较,并对预后也进行比较。结果:急、慢性GVHD组与未发生急、慢性GVHD组患者的血清TNF-α、IL-6及IL-8水平均高于正常对照组(P<0.05,除未发生cGVHD组的TNF-α浓度低外);急、慢性GVHD组与未发生急、慢性GVHD组比血清TNF-α、IL-6及IL-8水平均升高(P<0.05);移植后死亡组生存时间≤6月及>6月(除>6月的IL-8水平外)各组TNF、IL-6与IL-8水平均高于同期的存活组(P<0.05)。结论:异基因造血干细胞移植术后动态监测TNF、IL-6、IL-8水平变化有助于对发生aGVHD或cGVHD的可能提供另一种检测方法,并对判断愈后有一定的临床意义。
- 叶丽萍叶一秀施兵刘丽辉金建刚俞志勇户江伟陈虎
- 关键词：细胞因子造血干细胞移植移植物抗宿主病
- 三种细胞因子与白血病异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病的关系(英文)被引量：1
- 2008年
- 背景：目前转化生长因子α与移植物抗宿主病关系的报道较少，急、慢性移植物抗宿主病患者转化生长因子α与多种因子联合的检测值得研究。目的：分析血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素4和转化生长因子α在白血病患者异基因造血干细胞移植后的变化与发生移植物抗宿主病轻重程度的关系。设计：病例对照观察。单位：解放军总医院第二附属医院器官移植中心血液科及解放军总医院第二附属医院核医学科。对象：选择2005—06／2007—06在解放军总医院第二附属医院器官移植中心血液科及解放军307医院移植科住院首次接受异基因造血干细胞移植的42例白血病患者，男23例，女19例，年龄16～68岁，平均35岁。其中急性粒细胞性白血病12例，急性淋巴细胞性白血病15例，慢性粒细胞性白血病15例，移植患者中行外周血移植37例、骨髓移植5例。异基因造血干细胞移植后发生急性移植物抗宿主病20例（Ⅰ～Ⅱ度18例、Ⅲ～Ⅳ度3例），未发生急性移植物抗宿主病21例，发生慢性移植物抗宿主病14例（局限型5例、广泛型9例），未发生慢性移植物抗宿主病28例。选择30名同期到院健康体检者为正常对照组，男18名，女12名，年龄20～70岁，平均44岁。所有受试对象均对实验项目知情同意，实验经过医院伦理委员会批准。方法：用放射免疫分析法检测并比较白血病异基因造血干细胞移植患者及正常对照者血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素4和转化生长因子α水平，同时比较移植后发生或未发生急性移植物抗宿主病、发生或未发生慢性移植物抗宿主病及发生轻重程度的白血病异基因造血干细胞移植患者3种细胞因子水平。主要观察指标：血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素4、转化生长因子α水平比较。结果：白血病患者42例及健康对照者30名均进入结果分析。①急、�
- 叶丽萍姚浩施兵刘丽辉金建刚俞志勇扈江伟陈虎
- 关键词：细胞因子造血干细胞移植
- 多中心性巨淋巴结增生误诊为结缔组织病1例被引量：1
- 2009年
- 刘明娟施兵刘丽辉叶丽萍金建刚陈虎
- 关键词：巨淋巴结增生结缔组织病
- 体外皮肤移植和TUNEL实验评价猕猴间充质干细胞输注对细胞免疫的影响
- 2006年
- 目的:通过给猕猴单次无预处理输注猕猴白细胞抗原(RhLA)不相合供者的骨髓来源的间充质干细胞(MSCs),观察能否抑制供受者之间的免疫反应。方法:无菌抽取MSCs供者猕猴骨髓,分离单个核细胞,用2%FCS的DMEM/F12培养液培养骨髓MSCs,用流式细胞术检测其表型,不同培养条件诱导MSCs多向分化以鉴定;单次无预处理输注MSCs给RhLA不相合受者,分别于MSCs输注前及输注后20、40、60 d取受者外周血淋巴细胞分别与供者及非供者皮肤体外共培养72 h,观察培养皮肤病理损伤情况,同时TUNEL法检测培养皮肤石蜡切片中凋亡细胞的比率。结果:输注MSCs后20 d,受者淋巴细胞与供者皮肤呈现减低的免疫反应,皮肤病理损伤程度较输注前减轻,凋亡细胞比例由(23.0±4.9)%下降到(12.2±1.9)%;MSCs受者与非供者之间体外皮肤病理片中凋亡细胞比例也由输注前的(22.0±2.0)%下降至(11.8±1.4)%,具有显著差异(P<0.05);输注后40 d和60 d,受者淋巴细胞无论对供者还是非供者的皮肤均产生较强的免疫反应,凋亡细胞比例增至(22.0±3.2)%(、22.0±2.5)%(供者)及(23.2±2.4)%(、24.0±2.6)%(非供者)。结论:猕猴输注同种异基因MSCs后,通过体外实验可以检测到供受者之间降低的免疫反应,但是这种免疫抑制作用是短期的、可逆的。
- 黄雅静孙琪云刘丽辉范传波胡恺勋边莉郭梅艾辉胜
- 关键词：皮肤移植TUNEL法
