陈仁良
- 作品数：10 被引量：30H指数：3
- 供职机构：福建农林大学生命科学学院菌物研究中心更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 金针菇疏水蛋白Fv-Hyd1及其潜在的转录因子Fv-Rtg3的共表达分析被引量：2
- 2016年
- 疏水蛋白(hydrophobin,Hyd)普遍存在于真菌的气生菌丝、侵染结构或子实体表面,且存在时空性高丰度表达。不同真菌疏水蛋白在其各个发育阶段发挥不同的功能,如气生菌丝的生长、子实体原基的形成及其形态分化等。虽然已有众多报道指出Hyd与生物或非生物环境刺激所产生的抗逆性有关,但是对它与细胞分裂分化等生物学功能及其信号转导调控的关系仍了解甚少。通过培养金针菇(Flammulina velutipes)菌丝以及金针菇出菇实验,结合基因组及转录组数据、蛋白结构预测、系统发育进化树聚类分析等生物信息学分析鉴定金针菇中一个编码疏水蛋白基因Fv-Hyd1,并利用其上游序列预测该疏水蛋白基因潜在的调控转录因子,辅以实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)数据和皮尔森相关系数鉴定它们的表达关系。结果表明,Fv-Hyd1与金针菇菌丝扭结和子实体原基的形成具有一定的相关性,与其潜在的转录因子Fv-Rtg3之间存在较强的共表达规律,并以此结合蛋白磷酸化位点预测,推测基因Fv-Hyd1的表达调控机制。
- 陈仁良李肖龙莹张磊严俊杰黄千慧熊宏民谢宝贵
- 关键词：金针菇扭结原基荧光定量PCR共表达
- 金针菇JA/SA信号通路基因鉴定及其对外源JA/SA应答被引量：2
- 2016年
- 本研究鉴定了金针菇茉莉酸(JA)信号通路的4个关键基因:COI1、PDF1.2、MYC2-1、MYC2-2与水杨酸(SA)信号通路的4个关键基因:PR1-1、PR1-2、NPR1-1、NPR1-2。NBT染色法和荧光定量结果表明,金针菇JA/SA信号通路可应答外源JA/SA,50μmol·L^(-1)外源JA和500μmol·L^(-1)外源SA处理金针菇菌丝12h可显著提高JA/SA信号通路基因的转录水平,基因PDF1.2响应JA诱导最明显,可作为JA信号通路标记基因;JA/SA信号转导途径间存在协同或拮抗作用:SA信号转导通路中NPR1蛋白对JA信号转导通路中PDF1.2基因表达有抑制作用,外源JA/SA的相对浓度决定其作用的强弱。
- 李肖汪健芳严俊杰陈炳智谢斌陈仁良温志强江玉姬谢宝贵
- 关键词：金针菇茉莉酸NBT
- 草菇多糖单加氧酶基因Vv-lpmo 1的序列分析及其表达规律
- 2015年
- 依据草菇（Volvariella volvacea）基因组和转录组数据,采用ZOOM软件将转录组Reads定位到基因组的分析方法,从草菇中鉴定了一个多糖单加氧酶基因Vv-lpmo1,对其进行生物信息学分析,并对其高效诱导物进行筛选,采用定量PCR方法研究其在降解稻草时表达量的变化规律。结果表明：草菇Vv-lpmo1基因DNA序列长1432bp,有9个内含子,预测编码305个氨基酸的蛋白质;生物信息学分析表明该蛋白质有分泌信号肽,且含有两个完整的保守结构域：N端的glycoside hydrolase family 61（GH61）结构域和C端的cellulose-binding domain（CBD）结构域。通过对葡萄糖、无碳源（饥饿诱导）、微晶纤维素、滤纸、稻草和木屑6种不同基质诱导草菇菌丝的定量PCR,结果筛选出稻草对Vv-lpmo1基因有最强的诱导作用。进一步研究稻草诱导不同时间的变化过程中,该基因的表达规律为0~4h先下调;4~12h恢复到初始水平;12h以后开始迅速上调并维持较高水平。本研究表明草菇多糖单加氧酶基因Vvlpmo1属于诱导表达型基因,可能在草菇降解稻草基质中起着重要作用。
- 陶永新黄千慧陈仁良谢斌连玲丹张磊丁宇斯江玉姬谢宝贵
- 关键词：草菇定量PCR表达量
- 金针菇疏水蛋白Fv-Hyd1的基因功能研究
- 疏水蛋白可在菌丝细胞表面形成疏水层,促进气生菌丝生长和原基形成。本研究分析了金针菇疏水蛋白Fv-Hyd1基因在不同生长发育时期的表达水平,发现它在菌丝纽结时显著上调表达。为了研究该基因的功能,我们构建了疏水蛋白Fv-Hy...
- 龙莹陈仁良谢宝贵
- 关键词：金针菇过表达RNA干扰
- 文献传递
- 草菇多糖单加氧酶基因Vv-lpmo1的序列分析及其表达规律
- 2016年
- 依据草菇（Volvariella volvacea）基因组和转录组数据，采用ZOOM软件将转录组Reads定位到基因组的分析方法，从草菇中鉴定了一个多糖单加氧酶基因Vv—lpmol，对其进行生物信息学分析，并对其高效诱导物进行筛选，采用定量PCR方法研究其在降解稻草时表达量的变化规律。结果表明：草菇Vv—lpmol基因DNA序列长1432bp，有9个内含子，预测编码305个氨基酸的蛋白质；生物信息学分析表明该蛋白质有分泌信号肽，且含有两个完整的保守结构域：
- 陶永新黄千慧陈仁良
- 关键词：酶基因草菇多糖PCR方法DNA序列
- 草菇翻译起始因子Vv‐IF4E及与其共表达转录因子的研究被引量：3
- 2015年
- 真核翻译起始因子IF4E(initiation factor 4E)可通过与m RNA的5’帽子端结合,在蛋白质的翻译起始过程中扮演重要角色。草菇Volvariella volvacea是一种富有商业价值的食用真菌,其生长发育与蛋白质的合成代谢密切相关。本文通过鉴定草菇编码IF4E的基因(Vv-IF4E),并根据生物信息学和实时荧光定量数据分析Vv-IF4E及相关转录因子基因表达量的变化规律。结果显示,草菇Vv-IF4E基因上游存在较多顺式作用元件,基因存在4种可变剪切体,只有一种具有翻译起始因子的保守结构域。预测开放阅读框(ORF)长度为3 083bp,所编码蛋白分子量为87.1k Da,存在35个磷酸化位点。Vv-IF4E蛋白结构有异于拟南芥IF4E,但与皱木耳Auricularia delicata IF4E相似。实时荧光定量结果表明,Vv-IF4E与转录因子YRR1、ECM22存在极强的共表达规律。
- 陈仁良严俊杰陶永新谢斌张磊吴塔菊李少杰谢宝贵
- 关键词：草菇蛋白质合成荧光定量PCR共表达
- 草菇葡萄糖‐6‐磷酸脱氢酶基因及其可变剪接体的克隆与表达量分析被引量：7
- 2015年
- 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶是戊糖磷酸途径的限速酶,影响着细胞生命活动所需要的NADPH的产生。本研究从草菇中克隆到该基因的2个转录本,并测定了它们在两个同核体和形成的异核体菌株中的表达量。结果表明,草菇葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因(g6pdh)的g DNA序列长1 954bp,有7个内含子,可产生两个转录本:一个是内含子全部剪切的转录本(g6pdh ID),编码515个氨基酸且有完整结构域的蛋白质;另一个是第5个内含子保留的可变剪接变体(g6pdh IR),预测编码316个氨基酸但没有完整结构域的蛋白质。定量PCR结果显示,可变剪接变体g6pdh IR在草菇同核体与异核体中的表达量均很低,因此转录本g6pdh ID为g6pdh基因的主要剪接体;并且g6pdh基因在生长旺盛的异核体中的表达量远远高于在生长较弱的两个同核体中的任何一个。研究结论说明,糖代谢活动的强弱与食用真菌的生长与发育有密切关系。
- 陶永新张磊郭丽陈仁良连玲丹谢宝贵
- 关键词：食用真菌基因克隆定量PCR
- 与草菇原基形成相关的过氧化物酶基因VvDyP的结构与表达分析被引量：3
- 2015年
- Dy P-type过氧化物酶作为氧化物酶家族中的一员,参与了菌体氧化应激调节反应以及基质降解等过程。本研究从草菇基因组中获得一个Dy P-type过氧化物酶的编码基因,将其命名为Vv Dy P。对该基因进行结构分析,结果显示草菇的Dy P-type过氧化物酶编码基因全长为2 333bp,含有8个外显子,7个内含子;开放阅读框长为1 485bp,编码494个氨基酸。通过系统发育分析发现它与灰盖鬼伞以及糙皮侧耳Dy P蛋白同源性最高;分析Dy P-type过氧化物酶编码基因在草菇各个时期的表达谱情况并进行荧光定量PCR实验验证发现,草菇的Dy P-type过氧化物酶编码基因只在原基中高表达,推测Dy P-type过氧化物酶编码基因可以清除过量的活性氧自由基以保证原基的正常形成。
- 连玲丹吴小婷卢园萍张磊谢斌陈仁良吴塔菊李少杰谢宝贵
- 关键词：DY草菇原基形成系统发育分析
- 金针菇凝集素基因Fv-mJRL1的生物信息学分析及其共表达被引量：7
- 2016年
- Jacalin凝集素(jacalin-related lectins,JRLs)是一类含有一个或多个JRL结构域的蛋白质,参与生物或非生物环境刺激应答.本研究基于金针菇(Flammulina velutipes)基因组数据,注释筛选到其中一个JRL基因Fv-mJRL1,对其基因结构、蛋白质性质进行了生物信息学分析,并利用其上游调控序列进一步预测到该基因潜在的转录因子Fv-Mbp1.通过实时荧光定量PCR分析得知,无论是在不同栽培基质培养的金针菇菌丝还是在金针菇各发育时期的组织中,Fv-mJRL1基因与潜在的转录因子基因Fv-Mbp1之间都存在极强的共表达规律.生物信息学及实时荧光定量PCR分析为筛选挖掘基因潜在的转录因子提供便利,后期仍需利用下游分子实验进行更为精确的验证.
- 陈仁良王威严俊杰熊宏民谢宝贵
- 关键词：子实体形成
- 农杆菌介导一个内源HMG-box转录因子fvhom1转化金针菇被引量：10
- 2014年
- 利用本实验室金针菇(Flammulina velutipes)基因组、转录组数据对一个内源HMG-box转录因子fvhom1进行了基因结构和表达量分析。通过根癌农杆菌介导转化的方法,以金针菇菌丝球为受体材料转入含该内源HMG-box转录因子的过表达载体,并获得了一个稳定的转化子。该转化子的潮霉素抗性筛选及潮霉素磷酸转移酶基因的PCR扩增结果均证明该过表达载体已整合到金针菇的基因组中。在无选择压力的的PDA固体培养基上继代培养培养5次后仍检测到潮霉素磷酸转移酶基因的存在,表明转入的质粒片段在转基因金针菇中稳定遗传。对该转化子菌丝生长速度测定结果表明,突变体的菌丝生长速度比野生型金针菇菌株显著变慢。实时荧光定量PCR结果表明,突变体中该转录因子表达量与野生型金针菇菌株相比显著上调了100倍左右。该转化子的获得为下一步深入研究金针菇HMG-box转录因子的功能提供了数据支持。
- 施乐乐van Peer A.F.郭丽陈仁良王威严俊杰邓优锦谢宝贵
- 关键词：金针菇农杆菌介导转化
