王革非
- 作品数：7 被引量：22H指数：3
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- 人甲状旁腺素N-端34肽基因的合成、克隆和融合表达
- 2005年
- 目的构建重组人甲状旁腺素N-端34(PTH34)肽的大肠杆菌融合表达菌株,并对其表达产物进行检测。方法选用大肠杆菌偏爱密码子,设计优化的人甲状旁腺素N-端34肽基因序列,通过6个DNA片段分段合成、片段连接、PCR扩增,经TA克隆到pMD18载体中,经测序验证,构建GST融合表达载体。结果经SDS-PAGE检测PTH(1-34)肽与GST蛋白的融合表达,经Westernblot分析具有免疫活性,通过GST亲和层析和Xa因子酶切,利用小分子蛋白电泳可检测到PTH(1-34)肽。结论已获得了能表达GST-PTH(1-34)融合蛋白的菌株。表达产物具有免疫活性,且能被Xa因子消化得到PTH(1-34)肽。
- 文力王革非冷武军王贞慧杨光
- 关键词：甲状旁腺素基因合成基因克隆免疫活性
- 重组人乳铁蛋白cDNA表达研究
- hlf基因cDNA被克隆入酵母表达载体获得pPIC9-hlf质粒,该质粒与毕赤酵母基因组同源重组,经G418筛选后获得多拷贝重组酵母菌株,对其进行甲醇诱导表达,SDS-PAGE、免疫及活性检测表明,表达产物为有乳铁蛋白,...
- 张述王革非王贞慧张裕平吴海祥熊春发余永恒
- 文献传递
- 重组人乳铁蛋白基因克隆及表达被引量：10
- 2005年
- 目的 构建重组人乳铁蛋白 (HLF)的毕赤酵母分泌表达菌株 ,并对表达产物进行评价。方法 由外周血白细胞总RNA经RT- PCR克隆获得HLF基因结构cDNA ,测序后克隆入酵母表达载体获得质粒pPIC9K- HLF ,线性化后电转化入毕赤酵母 ,经G4 -18 YPD筛选多拷贝后进行甲醇诱导表达。结果 获得基因与GenBank中的人HLF0 1基因基本相符。 2株多拷贝菌株诱导表达产物均能与人HLF抗体反应 ,具有抑制大肠杆菌生长的作用。结论 获得了能分泌有活性HLF的重组人乳铁蛋白 (HLF)的毕赤酵母分泌表达菌株。
- 张述王革非王贞慧张裕平吴海祥熊春发余永恒
- 关键词：分泌表达外周血白细胞人乳铁蛋白克隆抗体反应电转化
- 乳糖诱导重组人睫状神经营养因子在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：9
- 2007年
- 目的利用乳糖替代IPTG,诱导重组人睫状神经营养因子(Recombinanthumanciliaryneurotrophicfactor,rhC-NTF)在原核工程菌BL-TCS中可溶性表达,并选择最适的诱导表达条件。方法在不同的温度下,利用不同浓度的乳糖及0·5mmol/L的IPTG,诱导含有人CNTF基因的工程菌9h,比较菌体生长、乳糖消耗以及目标蛋白的表达规律。结果乳糖组的菌体A600值均高于IPTG组。乳糖诱导产生的rhCNTF主要以可溶形式表达,各浓度乳糖的诱导效果均能接近或超过IPTG的效果。以2%乳糖在25℃下诱导6h,可以达到比较好的诱导效果。结论乳糖可取代IPTG诱导人CNTF基因表达,并获得良好效果。
- 余永恒李清雄王革非邓远鹏王贞慧朱俊铭
- 关键词：乳糖诱导剂人睫状神经营养因子大肠杆菌
- 人甲状旁腺素N端34肽基因的合成克隆和融合表达
- 选用大肠杆菌偏爱密码子,设计优化的人甲状旁腺素N端34肽基因序列,通过六个DNA片段分段合成,经过片段连接、PCR及TA克隆、测序验证,构建了GST融合表达载体。经过SDS-PAGE、检测到了PTH(1-34)肽与GST...
- 文力王革非冷武军王贞慧杨光
- 文献传递
- 人瘦素Leptin前体及成熟基因的克隆与表达
- 利用RT-PCR方法从脂肪细胞RNA中克隆人瘦素前体(pre-Leptin)和去信号肽序列的Leptin成熟基因片段,将该成熟基因片段插入pET32a中,建立Leptin工程菌株,其表达量达菌体总蛋白的40%以上。wes...
- 曹剑峰王革非文力李均吴海祥李清雄王贞慧
- 文献传递
- 人Leptin基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2005年
- 目的克隆Leptin基因,构建其重组表达菌株,并对表达产物进行免疫学鉴定。方法利用RT-PCR方法从脂肪细胞RNA中扩增出人瘦素前体(pre-Leptin)的cDNA片段和去信号肽序列的Leptin成熟基因片段,并插入pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达重组人瘦素(rh-Leptin)的菌株。结果DNA序列分析显示获得的pre-Leptin和成熟基因片段的序列与预计序列一致,菌株诱导后经SDS-PAGE检测,rh-Leptin表达量达菌体总蛋白的40%以上。Western blot分析显示重组Lep-tin具有免疫学活性。结论已获得高效表达Leptin的重组菌株。
- 曹剑峰王革非文力李均吴海祥李清雄王贞慧
- 关键词：大肠杆菌N基因DNA序列分析LEPTINRT-PCR方法WESTERN
