吴海祥
- 作品数：12 被引量：68H指数：5
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- 猪瘟病毒感染性cDNA载体的制备方法和应用
- 本发明公开了一种猪瘟病毒感染性cDNA载体的制备方法和应用，该载体含有T7启动子和猪瘟病毒标准强毒石门株基因组的cDNA，在T7启动子下游的cDNA中，缺失NS2基因中的1260个碱基对，保留5’端第3752碱基对至Ps...
- 张楚瑜吴海祥郑从义屈三甫
- 文献传递
- 正链RNA病毒基因组感染性克隆研究进展被引量：10
- 2002年
- 综合叙述了构建正链RNA病毒基因组全长感染性cDNA克隆的基本思路和关键技术 ,并总结了影响基因组全长克隆感染性的因素 还简要介绍了利用正链RNA病毒基因组感染性克隆所取得的一些研究进展 。
- 吴海祥张楚瑜
- 关键词：RNA病毒感染性克隆
- CSFV石门株基因组感染性克隆的构建与致细胞病变分子机制研究
- 猪瘟病毒/(classical swine fever virus, CSFV/)强毒株感染猪体引起90％以上的感染猪死亡。猪瘟的流行给世界范围内畜牧业的发展和贸易造成了巨大损失。猪瘟病毒感染造成机体多种组织损伤，但在离...
- 吴海祥
- 关键词：猪瘟病毒细胞凋亡
- 文献传递网络资源链接
- 猪瘟病毒基因组非编码区的定性、定量与结构分析被引量：14
- 2001年
- 猪瘟病毒是猪瘟的病原体，弄清其基因组的复制与表达是研究猪瘟病毒致病机理、研制抗病毒药物的核心．基因组的非编码区（ＵＴＲ）是复制和表达的主要调节区，为了确定复制与表达位点在非编码区的具体位置以及主要特征，对猪瘟病毒石门株以及其他毒株基因组的３’和５’非编码区进行了生物信息学的定性、定量与结构分析，分别得到了 １７个毒株的 ３’ ＵＴＲ和 ５６个毒株的 ５’ ＵＴＲ与调节复制、表达起始有关的位点以及共有的保守序列和结构成分．这些顺式调控元件可能是复制起始识别位点、宿主细胞转录因子的结合位点和核糖体起始蛋白质合成的作用位点．据此，对猪瘟病毒复制与表达的机理进行了探讨，为进一步实验提供了非常明确的方向，同时也为与猪瘟病毒同科的丙型肝炎病毒、其他瘟病毒以及其他正链ＲＮＡ病毒基因组复制的研究奠定了基础．
- 肖明张楚瑜祝志展吴海祥
- 关键词：基因表达猪瘟病毒非编码区RNA复制正链RNA病毒基因组
- 人Leptin基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2005年
- 目的克隆Leptin基因,构建其重组表达菌株,并对表达产物进行免疫学鉴定。方法利用RT-PCR方法从脂肪细胞RNA中扩增出人瘦素前体(pre-Leptin)的cDNA片段和去信号肽序列的Leptin成熟基因片段,并插入pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达重组人瘦素(rh-Leptin)的菌株。结果DNA序列分析显示获得的pre-Leptin和成熟基因片段的序列与预计序列一致,菌株诱导后经SDS-PAGE检测,rh-Leptin表达量达菌体总蛋白的40%以上。Western blot分析显示重组Lep-tin具有免疫学活性。结论已获得高效表达Leptin的重组菌株。
- 曹剑峰王革非文力李均吴海祥李清雄王贞慧
- 关键词：大肠杆菌N基因DNA序列分析LEPTINRT-PCR方法WESTERN
- 猪瘟病毒感染性cDNA克隆的构建及其致病性被引量：16
- 2005年
- 为了建立研究猪瘟病毒的技术平台,利用RT PCR技术构建了猪瘟病毒中国石门株(Shimen)的全长有感染性cDNA克隆pT7SM。通过体外转录线性化的pT7SM并将转录的RNA转染至PK 15细胞中,获得了猪瘟病毒粒子。再用间接免疫荧光法测定了其生长曲线,通过电镜观察到重组病毒呈球形,具有囊膜结构。进一步把获得的猪瘟病毒粒子感染非免疫实验猪,结果子代病毒与石门株类似,对非免疫实验猪有强烈的致病性,证明该全长cD NA克隆可靠稳定,忠实地保留了石门株病毒的感染性和致病特征。由此为进一步探讨猪瘟病毒的致弱机制及病毒与机体相互作用的机制打下了良好的基础。
- 王毅吴海祥张楚瑜伊光辉曹晟温国元
- 关键词：猪瘟病毒全长CDNA克隆体外转录RT-PCR猪瘟疫苗
- 口蹄疫病毒诱导宿主细胞凋亡的研究被引量：12
- 2001年
- 本文报道了口蹄疫病毒 (Foot and MouthDiseaseVirus,FMDV)在体外诱导PK 15细胞凋亡的研究结果。采用Hoechst332 5 8荧光探针、DNA凝胶电泳、脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口末端标记 (TUNEL)技术均检测到了典型的细胞凋亡。结果显示 :使用感染性滴度为 4.8lgTCID50 /mL的口蹄疫病毒感染PK 15细胞 ,在培养 32h后荧光探针检测呈现典型的凋亡细胞核固缩和梅花状碎裂核 ,并伴随有凋亡小体出现 ,凋亡率约为 2 0 % ;DNA凝胶电泳显示ladder梯带 ;末端标记检测到强绿色荧光标记物结合于凋亡细胞核上。研究结果提示 :口蹄疫病毒可以在体外诱导宿主细胞凋亡 ,细胞凋亡是其致细胞病变死亡的重要途径之一。
- 吴海祥郑从义屈三甫郭荆哲王燕丽
- 关键词：细胞凋亡口蹄疫病毒宿主细胞
- 构建猪瘟病毒致细胞病变的PK-15细胞模型被引量：2
- 2003年
- 猪瘟病毒在离体细胞培养条件下不引起宿主细胞病变,病毒与宿主细胞之间相互作用的研究一直没有合适的模型.以猪瘟病毒中国标准强毒石门株为材料,通过基因工程的手段,在构建全基因组感染性克隆的基础上,对全基因组进行部分缺失,获得了7.5 kb的亚基因组,以携带野生型猪瘟病毒的PK-15细胞为宿主,用亚基因组进行转染,得到了能够诱导PK-15细胞产生CPE的亚基因组病毒,检测显示产生CPE的细胞培养物中野生型基因组和亚基因组共同存在.猪瘟病毒致细胞病变模型的构建,为进一步研究其致病的分子机制开辟了新的方向.
- 吴海祥张楚瑜郑从义王家富潘兹书李蕾曹晟伊光辉
- 关键词：猪瘟病毒致病机制
- 重组人乳铁蛋白cDNA表达研究
- hlf基因cDNA被克隆入酵母表达载体获得pPIC9-hlf质粒,该质粒与毕赤酵母基因组同源重组,经G418筛选后获得多拷贝重组酵母菌株,对其进行甲醇诱导表达,SDS-PAGE、免疫及活性检测表明,表达产物为有乳铁蛋白,...
- 张述王革非王贞慧张裕平吴海祥熊春发余永恒
- 文献传递
- 人瘦素Leptin前体及成熟基因的克隆与表达
- 利用RT-PCR方法从脂肪细胞RNA中克隆人瘦素前体(pre-Leptin)和去信号肽序列的Leptin成熟基因片段,将该成熟基因片段插入pET32a中,建立Leptin工程菌株,其表达量达菌体总蛋白的40%以上。wes...
- 曹剑峰王革非文力李均吴海祥李清雄王贞慧
- 文献传递
