王向辉
- 作品数：17 被引量：58H指数：4
- 供职机构：吉林农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家质检总局科技计划项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程医药卫生生物学更多>>
- 蜜蜂残翼病毒中国DWV-JL1株衣壳蛋白基因序列分析
- 2015年
- 蜜蜂残翼病毒是引起蜜蜂残翼病的病原体。吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心将成功分离鉴定得到的中国首株蜜蜂残翼病毒毒株命名为“中国DWV—JL1株”，全长9826nt。本文主要研究中国DWV—JL1株核苷酸序列位置为2880～3792nt之间的片段，该段序列为编码衣壳蛋白的一部分，为相对保守序列。通过RT—PCR、克隆及质粒双酶切鉴定分析，得到一段大小约900bp的片段。通过BLAST、进化树及残基化分析，有96％-97％的同源性。氨基酸序列差异性仅为7％。该段序列与韩国株的亲缘关系最近，而与欧洲和美洲各国家获得的毒株序列亲缘关系较远，推测中国DWV—JL1株起源于亚洲。
- 张健杨倩宋战昀郑言王向辉隋佳辰王全凯王振国牟峻
- 关键词：RT-PCR进化树衣壳蛋白
- BQCV和SBV可视化LAMP检测方法的建立及初步应用
- 黑蜂王台病毒(Black queen cell virus,BQCV)和蜜蜂囊状幼虫病毒(Sacbrood virus,SBV)是两种常见的蜜蜂病毒,BQCV多感染蜂王幼虫和蜂蛹,感染后王台壁变黑。SBV主要感染2日龄幼...
- 王向辉
- 关键词：环介导等温扩增
- 文献传递
- 黑蜂王台病毒中国BQCV-JL1株的分离鉴定及全基因组序列分析被引量：1
- 2015年
- 收集吉林蜂场的蜜蜂蜂蛹病料的RNA作为扩增模板,依据GenBank公布的黑蜂王台病毒(Black queen cell virus,BQCV)的全基因组序列,自行设计了10对引物,运用RT-PCR首次获得中国BQCV毒株的全基因组序列,命名为中国BQCV-JL1株。其全基因组序列由8 358个碱基组成,与GenBank公布的其他6株BQCV毒株的全基因组序列相比,同源性为86%~93%。中国BQCV-JL1株ORF 1的位置为546nt^4 676nt(4 131nt),ORF 2位于5 750nt^8 203nt,两个ORFs之间存在一段长为543nt(4 891nt^5 433nt)的ORF3。中国BQCV-JL1株第一个基因功能区ORF1′的位置为546nt^5 429nt,包含ORF 1和ORF 3。在ORF2之前存在内部核糖体进入位点(IRES),其末尾3碱基为CCU(5 642nt^5 644nt),为促进ORF 2翻译的起始密码子,中国BQCV-JL1株第二个基因功能区ORF2′的位置为5 642nt^8 203nt。中国BQCV-JL1株与Hungary 10(EF517515)同源性最高(93%),且分析核苷酸序列和氨基酸序列,与South Korea(JX149531)株最接近,表明中国BQCV-JL1株与South Korea(JX149531)株均有可能来自欧洲。中国BQCV-JL1株与其他6株全基因组序列在ORF位置划分上存在差异,其原因是部分位置发生基因突变。
- 杨倩张健宋战昀郑言王向辉隋佳辰王振国牟峻
- 关键词：全基因组序列RT-PCRRDRP
- 羧甲基壳聚糖病毒灭活/去除工艺验证被引量：3
- 2016年
- 目的对羧甲基壳聚糖病毒灭活/去除工艺进行验证。方法模拟生产条件,选择猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)、伪狂犬病病毒(pseudo rabies virus,PRV)、鸭肝炎病毒Ⅰ型(duck hepatitis virus-Ⅰ,DHV-Ⅰ)、牛滤过性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)作为指示病毒,采用高温碱化和醇洗灭活/去除病毒,Karber法计算病毒滴度,荧光PCR检测病毒灭活/去除效果。结果 3批甲壳素经碱化反应处理,PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ的平均灭活对数值分别为≥6.736、≥6.597、≥6.138和≥5.806 log TCID50/0.1 ml;3批羧甲基壳聚糖经醇洗处理,PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ的平均灭活对数值分别为≥6.763、≥6.569、≥6.167和≥5.587 log TCID50/0.1 ml。碱化反应与醇洗处理前感染PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ样品荧光PCR检测平均Ct值分别为23.465、23.387,24.873、24.706,26.887、25.376,27.386、24.629,处理后样品的荧光PCR检测平均Ct值均>40。结论羧甲基壳聚糖经高温碱化和醇洗反应处理均能有效灭活病毒,保证了产品的安全性。
- 杨倩宋战昀张旭光李敏思王向辉隋佳辰张健郑言魏春艳王振国
- 关键词：甲壳素羧甲基壳聚糖
- 蜜蜂黑蜂王台病研究进展被引量：3
- 2015年
- 蜜蜂是自然界中最重要的授粉昆虫,既能维护自然生态系统的多样性,又能保持农业生态系统的增产效应。但近年来蜜蜂疫病频发给养蜂业带来巨大的损失。黑蜂王台病自1955年首次报道以来,目前呈世界性分布,主要感染蜂王幼虫和蛹,引起虫体变暗变黑,甚至导致整个巢房壁变黑,可引发蜜蜂大量死亡。该病为季节性流行,且常呈隐性感染,可通过水平和垂直途径传播,微孢子虫不仅作为媒介生物在该病的传播中起到重要作用,同时微孢子虫感染蜜蜂后会导致隐性感染黑蜂王台病毒的蜜蜂迅速发病致死。黑蜂王台病毒宿主范围广,不仅可以感染多种蜂属,而且还可感染蜘蛛、蜈蚣等节肢动物。该病毒可与其他蜜蜂病毒发生合并感染。本文对黑蜂王台病的发生、流行过程、地域分布、传播途径等方面的研究进展进行综述。
- 杨倩张健宋战昀郑言王向辉隋佳辰王振国牟峻
- 黑蜂王台病毒基因组结构研究进展被引量：1
- 2015年
- 蜜蜂病毒被认为是主要威胁蜜蜂健康的因素之一,是引发蜜蜂蜂群大量死亡及蜂群衰竭的关键因素[1-7].首次鉴定出蜜蜂病毒并认定其为新的感染蜜蜂的病原体是在20世纪初期.目前,已知可感染蜜蜂的病毒高达20种,其中包括18种RNA病毒,其中的某些病毒已在全球范围内广泛传播[8-10].蜜蜂病毒能够影响蜜蜂形态、生理和行为,并与弱群及蜜蜂死亡息息相关[11].蜜蜂黑蜂王台病是由黑蜂王台病毒（Black queen cell virus,BQCV）引起的一种蜜蜂蜂王幼虫病害.BQCV由Baliey等于1977首次报道,该病毒是从蜂王幼虫和封盖蜂王蛹中分离得到,感染的蜂王蛹死亡并且其颜色由棕色变暗变黑,随后蜂房壁开始变黑,BQCV的名称也因此而来[12].
- 杨倩宋战昀张健石建平崔焕忠王振国孟庆峰王全凯李敏思郑言王向辉
- 关键词：RNA病毒基因组结构黑蜂蜂王幼虫VIRUS
- 蜜蜂残翼病病毒PCR检测及5′-UTR基因序列分析被引量：1
- 2015年
- 从吉林省某蜂场疑似蜜蜂残翼病病料中分离到一株蜜蜂残翼病病毒（DWV）,命名为DWVJL1,提取该分离株的总RNA,采用RT-PCR技术扩增其基因组的5′-UTR并测序。测序结果与GenBank公布道的DWV 5′-UTR序列同源性在95%~99%之间。将测序结果与GenBank上公布的9个相关序列进行系统遗传进化树分析,证实其与JX878304同源性最近,而与GU109335、KJ437447同源性最远。
- 郑言宋战昀杨倩王向辉隋佳辰张健王振国李敏思
- 核酸适配体生物传感技术在食品中重金属铅检测中的应用被引量：9
- 2017年
- 近年来,我国食品中铅超标事件频发,严重威胁着人民的健康与生命安全。虽然传统的检测技术能对食品中重金属铅进行高选择性和高灵敏度的检测,但是仍需要发展一种简单、快速、准确、成本低廉的方法应用于食品中重金属铅的快速检测。核酸适配体由于其本身具有靶分子广,成本低廉,易体外合成与修饰,操作简单与快捷,分子质量小,特异性高和稳定性好等优点,使核酸适配体生物传感技术在各检测领域具有很强的发展潜质,同时非常适合于食品应急事件中的快速检测。本文简述目前我国食品中重金属铅的污染现状及其来源与危害,对传统检测方法、国家标准检测方法及核酸适配体生物传感技术在食品重金属铅中的检测进展作较详细的论述,并对3种检测方法的优缺点进行评价,最后对核酸适配体生物传感技术在食品重金属铅中的检测前景进行展望。
- 隋佳辰于寒松代佳宇宋战昀王向辉郑言杨倩张健
- 关键词：重金属铅食品安全核酸适配体
- 检测蜜蜂囊状幼虫病毒环介导等温扩增技术的建立被引量：2
- 2016年
- 为建立一种快速检测蜜蜂囊状幼虫病毒（SBV）的环介导等温扩增方法（LAMP）,本研究根据SBV-UK株多聚蛋白基因序列（AF092924.1）设计了4条特异性引物,通过LAMP real-time Turbidimeter仪对SBV的反应体系和反应条件进行检测和实时监控,并评价其特异性、敏感性、重复性和稳定性。结果显示,在63℃恒温扩增40 min后,仅SBV核酸扩增,而其他病毒均呈阴性。反应结束后在反应体系中加入SYBR Green I的可视化判定结果与real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有较强的特异性和较高的敏感性,其最低检出量为3.2×10~1拷贝/μL,是普通PCR的100倍;对同一批次和不同批次提取的SBV核酸进行扩增,结果表明重复性和稳定性良好;临床样品检测结果表明LAMP法与常规PCR法检测结果一致。本研究建立的LAMP方法操作简便,适用于SBV的快速检测。
- 王向辉郑言隋佳辰张健杨倩宋战昀王振国
- 关键词：环介导等温扩增技术
- 黑蜂王台病毒中国BQCV-JL1株5'UTR的序列分析
- 2015年
- 蜜蜂黑蜂王台病毒（Black queen cell virus,BQCV）是引起蜜蜂蜜蜂黑蜂王台病的病原体,主要侵染蜜蜂蜂王幼虫。BQCV基因组为单正链RNA,包括5＇端的ORF 1和3＇端的ORF 2两个开放阅读框。分别编码非结构蛋白和结构蛋白。本实验室首次成功分离鉴定得到中国首株BQCV毒株,命名为中国BQCV-JL1株。该株全长为8 358 nt。【目的】本文主要研究该株核苷酸序列位置为1~1 124 nt的片段,该段序列的1~545 nt为该毒株的5＇UTR区域。【方法】通过Blast及DNAStar等软件对核苷酸及氨基酸序列进行分析。【结果】5＇UTR区域的同源性为94%~99%,为高度保守序列。【结论】经Mega5软件作多重序列对比分析得知,该中国BQCV-JL1株的5＇UTR区域与其他毒株差异性很大,经分析推断原因为碱基的缺失与碱基置换。
- 杨倩张健宋战昀郑言王向辉隋佳辰王振国牟峻
- 关键词：RT-PCR
