王振国
- 作品数：112 被引量：352H指数：11
- 供职机构：吉林出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家自然科学基金国家科技部专项基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 检测蜜蜂囊状幼虫病毒环介导等温扩增技术的建立被引量：2
- 2016年
- 为建立一种快速检测蜜蜂囊状幼虫病毒（SBV）的环介导等温扩增方法（LAMP）,本研究根据SBV-UK株多聚蛋白基因序列（AF092924.1）设计了4条特异性引物,通过LAMP real-time Turbidimeter仪对SBV的反应体系和反应条件进行检测和实时监控,并评价其特异性、敏感性、重复性和稳定性。结果显示,在63℃恒温扩增40 min后,仅SBV核酸扩增,而其他病毒均呈阴性。反应结束后在反应体系中加入SYBR Green I的可视化判定结果与real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有较强的特异性和较高的敏感性,其最低检出量为3.2×10~1拷贝/μL,是普通PCR的100倍;对同一批次和不同批次提取的SBV核酸进行扩增,结果表明重复性和稳定性良好;临床样品检测结果表明LAMP法与常规PCR法检测结果一致。本研究建立的LAMP方法操作简便,适用于SBV的快速检测。
- 王向辉郑言隋佳辰张健杨倩宋战昀王振国
- 关键词：环介导等温扩增技术
- 黑蜂王台病毒中国BQCV-JL1株的分离鉴定及全基因组序列分析被引量：1
- 2015年
- 收集吉林蜂场的蜜蜂蜂蛹病料的RNA作为扩增模板,依据GenBank公布的黑蜂王台病毒(Black queen cell virus,BQCV)的全基因组序列,自行设计了10对引物,运用RT-PCR首次获得中国BQCV毒株的全基因组序列,命名为中国BQCV-JL1株。其全基因组序列由8 358个碱基组成,与GenBank公布的其他6株BQCV毒株的全基因组序列相比,同源性为86%~93%。中国BQCV-JL1株ORF 1的位置为546nt^4 676nt(4 131nt),ORF 2位于5 750nt^8 203nt,两个ORFs之间存在一段长为543nt(4 891nt^5 433nt)的ORF3。中国BQCV-JL1株第一个基因功能区ORF1′的位置为546nt^5 429nt,包含ORF 1和ORF 3。在ORF2之前存在内部核糖体进入位点(IRES),其末尾3碱基为CCU(5 642nt^5 644nt),为促进ORF 2翻译的起始密码子,中国BQCV-JL1株第二个基因功能区ORF2′的位置为5 642nt^8 203nt。中国BQCV-JL1株与Hungary 10(EF517515)同源性最高(93%),且分析核苷酸序列和氨基酸序列,与South Korea(JX149531)株最接近,表明中国BQCV-JL1株与South Korea(JX149531)株均有可能来自欧洲。中国BQCV-JL1株与其他6株全基因组序列在ORF位置划分上存在差异,其原因是部分位置发生基因突变。
- 杨倩张健宋战昀郑言王向辉隋佳辰王振国牟峻
- 关键词：全基因组序列RT-PCRRDRP
- 液相芯片检测大肠杆菌O157的方法
- 一种液相芯片检测大肠杆菌O157的方法，属于免疫技术及食品卫生检测技术领域。本发明的目的是提供一种采用液相芯片技术用于检测大肠杆菌O157的方法，以便实现对大肠杆菌O157的快速检测。本发明首先制备液相芯片，捕获抗体与微...
- 王振国蔡阳刘金华罗雁非王亚丽
- 文献传递
- 羧甲基壳聚糖病毒灭活/去除工艺验证被引量：3
- 2016年
- 目的对羧甲基壳聚糖病毒灭活/去除工艺进行验证。方法模拟生产条件,选择猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)、伪狂犬病病毒(pseudo rabies virus,PRV)、鸭肝炎病毒Ⅰ型(duck hepatitis virus-Ⅰ,DHV-Ⅰ)、牛滤过性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)作为指示病毒,采用高温碱化和醇洗灭活/去除病毒,Karber法计算病毒滴度,荧光PCR检测病毒灭活/去除效果。结果 3批甲壳素经碱化反应处理,PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ的平均灭活对数值分别为≥6.736、≥6.597、≥6.138和≥5.806 log TCID50/0.1 ml;3批羧甲基壳聚糖经醇洗处理,PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ的平均灭活对数值分别为≥6.763、≥6.569、≥6.167和≥5.587 log TCID50/0.1 ml。碱化反应与醇洗处理前感染PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ样品荧光PCR检测平均Ct值分别为23.465、23.387,24.873、24.706,26.887、25.376,27.386、24.629,处理后样品的荧光PCR检测平均Ct值均>40。结论羧甲基壳聚糖经高温碱化和醇洗反应处理均能有效灭活病毒,保证了产品的安全性。
- 杨倩宋战昀张旭光李敏思王向辉隋佳辰张健郑言魏春艳王振国
- 关键词：甲壳素羧甲基壳聚糖
- 应用TaqMan荧光定量PCR快速检测鹿血中副结核分枝杆菌被引量：9
- 2011年
- 为建立快速检测鹿血中副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis,MAP)的荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank中登录的MAPf57基因序列设计并合成引物及探针,并检测该方法的特异性和敏感性。试验结果显示,该方法具有良好的特异性,对MAP的检测灵敏度可以达到单个菌细胞。对长春地区采集的549份血清样品进行检测,结果显示阳性血清101份,阳性率达到18.4%。本研究结果表明,荧光定量PCR用于动物性产品MAP的检测具有快速、准确的特点。
- 王春雨杨莉刘金华宋占昀周亮王海军王振国王全凯
- 关键词：副结核病克罗恩病TAQMANPCR
- 2010年吉林边境口岸啮齿类动物中汉坦病毒自然感染状况监测
- 2012年
- 目的了解吉林边境口岸鼠类自然感染汉坦病毒(HV)情况和病毒型别,为肾综合征出血热(HFRS)防治提供科学依据。方法采用夹日法捕捉啮齿类动物,采集鼠类肺组织标本,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增技术对特异性核苷酸序列进行扩增并进行测序分析。结果共捕获鼠类164只,10只携带HV,均为汉城型病毒(SEOV)。结论吉林边境口岸啮齿类动物自然感染HV普遍,HV主要流行型别为SEO型。
- 刘阳邵丽筠刘金华李晓娜王振国曹国祥
- 关键词：啮齿动物汉坦病毒
- 牛病毒性腹泻病毒一步法RT-PCR检测方法的建立被引量：15
- 2007年
- 根据牛病毒性腹泻/粘膜病病毒5'端非结构蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,建立检测牛病毒性腹泻/粘膜病病毒244 bp片段的RT-PCR一步法。该方法对牛病毒性腹泻/粘膜病病毒NADL、OregonC24V和长春184毒株各标准毒株检测,结果均为阳性。对标准毒株的细胞毒进行检测,其敏感度达0.1 TCID50;而对牛传染性鼻气管炎病毒、猪瘟病毒、牛轮状病毒和牛冠状病毒的细胞培养物进行检测,结果均为阴性。检测460份不同样品,与病毒分离试验比较,符合率100%,证明该方法特异性强,敏感性高。初步结果表明所建立的一步法RT-PCR技术可用于牛病毒性腹泻/粘膜病的检测及流行病学调查。
- 王伟利肖成蕊孟日增刘金华王振国
- 关键词：RT-PCR
- 新城疫病毒血凝素蛋白RNA适配体的筛选及活性研究被引量：4
- 2014年
- 核酸适配体与单克隆抗体相比具有更高的分辨率,能识别配体间一个基团的细微差别,且所需的结合活性位点更小。本试验通过SELEX技术,体外经过12轮筛选获得了能够与F48E9株新城疫病毒特异性结合的3个RNA适配体,命名为FHN12-45-3、FHN12-36-6和FHN12-19-9。RNA适配体的二级机构预测结果显示,所筛选获得的RNA适配体空间结构以外环、内环、发夹环及突起结构为主。特异性试验结果显示,适配体FHN12-45-3经ELISA和Dot-blot试验证实能够区分不同株的新城疫病毒。生物学活性试验结果显示,适配体FHN12-45-3能够减少4个单位的F48E9株病毒血凝效价,初步表明适配体与F48E9株病毒可能的活性作用位点在血凝素蛋白上,在鸡胚成纤维细胞培养体系中适配体FHN12-45-3能够减少84.62%的F48E9株病毒蚀斑,荧光定量RT-PCR方法检测适配体FHN12-45-3能够减少培养体系中77.73%病毒载量,表明筛选的RNA适配体在细胞水平能够有效的抑制F48E9株新城疫病毒的复制。
- 李敏思宋战昀冯新杨倩郑言魏春艳王伟利王振国付小平
- 关键词：新城疫病毒血凝素蛋白SELEX
- 蜜蜂欧洲幼虫腐臭病PCR快速检测方法
- 一种蜜蜂欧洲幼虫腐臭病PCR快速检测方法，属于生物领域。本发明目的是建立PCR检测方法，为蜜蜂欧洲幼虫腐臭病诊断、防治、检疫以及蜂产品病原污染检测提供快速、准确、简便的蜜蜂欧洲幼虫腐臭病PCR快速检测方法。本发明具有快速...
- 宋战昀王振国罗雁非刘金华肖成蕊石建平蔡阳孟庆峰
- 文献传递
- 黑蜂王台病毒中国BQCV-JL1株5'UTR的序列分析
- 2015年
- 蜜蜂黑蜂王台病毒（Black queen cell virus,BQCV）是引起蜜蜂蜜蜂黑蜂王台病的病原体,主要侵染蜜蜂蜂王幼虫。BQCV基因组为单正链RNA,包括5＇端的ORF 1和3＇端的ORF 2两个开放阅读框。分别编码非结构蛋白和结构蛋白。本实验室首次成功分离鉴定得到中国首株BQCV毒株,命名为中国BQCV-JL1株。该株全长为8 358 nt。【目的】本文主要研究该株核苷酸序列位置为1~1 124 nt的片段,该段序列的1~545 nt为该毒株的5＇UTR区域。【方法】通过Blast及DNAStar等软件对核苷酸及氨基酸序列进行分析。【结果】5＇UTR区域的同源性为94%~99%,为高度保守序列。【结论】经Mega5软件作多重序列对比分析得知,该中国BQCV-JL1株的5＇UTR区域与其他毒株差异性很大,经分析推断原因为碱基的缺失与碱基置换。
- 杨倩张健宋战昀郑言王向辉隋佳辰王振国牟峻
- 关键词：RT-PCR
