杨倩
- 作品数：30 被引量：74H指数：4
- 供职机构：吉林农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家质检总局科技计划项目国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程医药卫生生物学更多>>
- Taq Man探针实时荧光PCR方法检测黑蜂王台病毒的方法建立和应用被引量：3
- 2015年
- 为了建立实时荧光PCR方法以检测蜜蜂黑蜂王台病毒,试验依据Taq Man荧光标记探针技术原理,针对蜜蜂黑蜂王台病毒编码衣壳蛋白的保守序列区域,设计出1对特异性引物和1条探针,建立了一种快速检测黑蜂王台病毒(BQCV)的荧光PCR方法,对2005年从12省收集到的18种蜜蜂病料进行检测,确定各地区感染BQCV情况。结果表明:该方法对蜜蜂黑蜂王台病毒有较好的特异性,与其他蜜蜂病毒之间均无交叉反应;检测灵敏度可达1.0×102拷贝/μL阳性质粒,可对低病毒含量的样品进行准确检测;变异系数为1.3%;应用该方法对2005年从12省收集到的18种蜜蜂病料进行检测,4 h内即可报告检测结果。说明该方法具有快速、灵敏、特异及重复性好等优点,适用于蜜蜂中黑蜂王台病毒的快速检疫。
- 杨倩宋战昀石建平张健王振国孟庆峰崔焕忠王全凯李敏思郑言
- 关键词：TAQ荧光PCR检测
- 蜜蜂黑蜂王台病研究进展被引量：3
- 2015年
- 蜜蜂是自然界中最重要的授粉昆虫,既能维护自然生态系统的多样性,又能保持农业生态系统的增产效应。但近年来蜜蜂疫病频发给养蜂业带来巨大的损失。黑蜂王台病自1955年首次报道以来,目前呈世界性分布,主要感染蜂王幼虫和蛹,引起虫体变暗变黑,甚至导致整个巢房壁变黑,可引发蜜蜂大量死亡。该病为季节性流行,且常呈隐性感染,可通过水平和垂直途径传播,微孢子虫不仅作为媒介生物在该病的传播中起到重要作用,同时微孢子虫感染蜜蜂后会导致隐性感染黑蜂王台病毒的蜜蜂迅速发病致死。黑蜂王台病毒宿主范围广,不仅可以感染多种蜂属,而且还可感染蜘蛛、蜈蚣等节肢动物。该病毒可与其他蜜蜂病毒发生合并感染。本文对黑蜂王台病的发生、流行过程、地域分布、传播途径等方面的研究进展进行综述。
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- 黑蜂王台病毒基因组结构研究进展被引量：1
- 2015年
- 蜜蜂病毒被认为是主要威胁蜜蜂健康的因素之一,是引发蜜蜂蜂群大量死亡及蜂群衰竭的关键因素[1-7].首次鉴定出蜜蜂病毒并认定其为新的感染蜜蜂的病原体是在20世纪初期.目前,已知可感染蜜蜂的病毒高达20种,其中包括18种RNA病毒,其中的某些病毒已在全球范围内广泛传播[8-10].蜜蜂病毒能够影响蜜蜂形态、生理和行为,并与弱群及蜜蜂死亡息息相关[11].蜜蜂黑蜂王台病是由黑蜂王台病毒（Black queen cell virus,BQCV）引起的一种蜜蜂蜂王幼虫病害.BQCV由Baliey等于1977首次报道,该病毒是从蜂王幼虫和封盖蜂王蛹中分离得到,感染的蜂王蛹死亡并且其颜色由棕色变暗变黑,随后蜂房壁开始变黑,BQCV的名称也因此而来[12].
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- 关键词：RNA病毒基因组结构黑蜂蜂王幼虫VIRUS
- 蜜蜂残翼病病毒PCR检测及5′-UTR基因序列分析被引量：1
- 2015年
- 从吉林省某蜂场疑似蜜蜂残翼病病料中分离到一株蜜蜂残翼病病毒（DWV）,命名为DWVJL1,提取该分离株的总RNA,采用RT-PCR技术扩增其基因组的5′-UTR并测序。测序结果与GenBank公布道的DWV 5′-UTR序列同源性在95%~99%之间。将测序结果与GenBank上公布的9个相关序列进行系统遗传进化树分析,证实其与JX878304同源性最近,而与GU109335、KJ437447同源性最远。
- 郑言宋战昀杨倩王向辉隋佳辰张健王振国李敏思
- 猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟混合感染的诊断被引量：3
- 2016年
- 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）俗称猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的以母猪发热、厌食、流产、产死胎、弱胎和木乃伊胎等繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征的一种疾病,且易引起免疫抑制,造成混合感染.该病于1987年在美国的北卡罗那、伊阿华、明尼苏达等州的猪群首次暴发,1996年我国首次分离出PRRSV,PRRS给全世界的养猪业带来了极大的经济损失.猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒（CSFV）引起的严重危害全球养猪业的一种高度接触性传染病,发病率和死亡率高,造成的损失大.我国很多猪场都存在这2种传染病,而且PRRSV和CSFV常呈混合感染给养猪业造成了巨大的经济损失.
- 张辉杨欢高云航杨倩杨亮尹剑常晓博崔焕忠
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒PRRSV呼吸道症状
- 检测蜜蜂囊状幼虫病毒环介导等温扩增技术的建立被引量：2
- 2016年
- 为建立一种快速检测蜜蜂囊状幼虫病毒（SBV）的环介导等温扩增方法（LAMP）,本研究根据SBV-UK株多聚蛋白基因序列（AF092924.1）设计了4条特异性引物,通过LAMP real-time Turbidimeter仪对SBV的反应体系和反应条件进行检测和实时监控,并评价其特异性、敏感性、重复性和稳定性。结果显示,在63℃恒温扩增40 min后,仅SBV核酸扩增,而其他病毒均呈阴性。反应结束后在反应体系中加入SYBR Green I的可视化判定结果与real-time Turbidimeter仪检测结果一致;该方法具有较强的特异性和较高的敏感性,其最低检出量为3.2×10~1拷贝/μL,是普通PCR的100倍;对同一批次和不同批次提取的SBV核酸进行扩增,结果表明重复性和稳定性良好;临床样品检测结果表明LAMP法与常规PCR法检测结果一致。本研究建立的LAMP方法操作简便,适用于SBV的快速检测。
- 王向辉郑言隋佳辰张健杨倩宋战昀王振国
- 关键词：环介导等温扩增技术
- “少子化”对城市养老模式影响的研究——以河北省为例
- 进入21世纪,我国人口发展也进入到一个新的阶段。一方面,经过几十年努力,我国人口数量的增长得到了有效的控制;另一方面,我国在人口问题上同时出现两个新的发展挑战：一个是加速的“少子化”,第二个是加速的老龄化。远远低于更替水...
- 杨倩
- 关键词：少子化老龄化居家养老
- 蜜蜂残翼病毒中国DWV-JL1株衣壳蛋白基因序列分析
- 2015年
- 蜜蜂残翼病毒是引起蜜蜂残翼病的病原体。吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心将成功分离鉴定得到的中国首株蜜蜂残翼病毒毒株命名为“中国DWV—JL1株”，全长9826nt。本文主要研究中国DWV—JL1株核苷酸序列位置为2880～3792nt之间的片段，该段序列为编码衣壳蛋白的一部分，为相对保守序列。通过RT—PCR、克隆及质粒双酶切鉴定分析，得到一段大小约900bp的片段。通过BLAST、进化树及残基化分析，有96％-97％的同源性。氨基酸序列差异性仅为7％。该段序列与韩国株的亲缘关系最近，而与欧洲和美洲各国家获得的毒株序列亲缘关系较远，推测中国DWV—JL1株起源于亚洲。
- 张健杨倩宋战昀郑言王向辉隋佳辰王全凯王振国牟峻
- 关键词：RT-PCR进化树衣壳蛋白
- 黑蜂王台病毒中国BQCV-JL1株的分离鉴定及全基因组序列分析被引量：1
- 2015年
- 收集吉林蜂场的蜜蜂蜂蛹病料的RNA作为扩增模板,依据GenBank公布的黑蜂王台病毒(Black queen cell virus,BQCV)的全基因组序列,自行设计了10对引物,运用RT-PCR首次获得中国BQCV毒株的全基因组序列,命名为中国BQCV-JL1株。其全基因组序列由8 358个碱基组成,与GenBank公布的其他6株BQCV毒株的全基因组序列相比,同源性为86%~93%。中国BQCV-JL1株ORF 1的位置为546nt^4 676nt(4 131nt),ORF 2位于5 750nt^8 203nt,两个ORFs之间存在一段长为543nt(4 891nt^5 433nt)的ORF3。中国BQCV-JL1株第一个基因功能区ORF1′的位置为546nt^5 429nt,包含ORF 1和ORF 3。在ORF2之前存在内部核糖体进入位点(IRES),其末尾3碱基为CCU(5 642nt^5 644nt),为促进ORF 2翻译的起始密码子,中国BQCV-JL1株第二个基因功能区ORF2′的位置为5 642nt^8 203nt。中国BQCV-JL1株与Hungary 10(EF517515)同源性最高(93%),且分析核苷酸序列和氨基酸序列,与South Korea(JX149531)株最接近,表明中国BQCV-JL1株与South Korea(JX149531)株均有可能来自欧洲。中国BQCV-JL1株与其他6株全基因组序列在ORF位置划分上存在差异,其原因是部分位置发生基因突变。
- 杨倩张健宋战昀郑言王向辉隋佳辰王振国牟峻
- 关键词：全基因组序列RT-PCRRDRP
- 羧甲基壳聚糖病毒灭活/去除工艺验证被引量：3
- 2016年
- 目的对羧甲基壳聚糖病毒灭活/去除工艺进行验证。方法模拟生产条件,选择猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)、伪狂犬病病毒(pseudo rabies virus,PRV)、鸭肝炎病毒Ⅰ型(duck hepatitis virus-Ⅰ,DHV-Ⅰ)、牛滤过性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)作为指示病毒,采用高温碱化和醇洗灭活/去除病毒,Karber法计算病毒滴度,荧光PCR检测病毒灭活/去除效果。结果 3批甲壳素经碱化反应处理,PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ的平均灭活对数值分别为≥6.736、≥6.597、≥6.138和≥5.806 log TCID50/0.1 ml;3批羧甲基壳聚糖经醇洗处理,PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ的平均灭活对数值分别为≥6.763、≥6.569、≥6.167和≥5.587 log TCID50/0.1 ml。碱化反应与醇洗处理前感染PRV、PPV、BVDV、DHV-Ⅰ样品荧光PCR检测平均Ct值分别为23.465、23.387,24.873、24.706,26.887、25.376,27.386、24.629,处理后样品的荧光PCR检测平均Ct值均>40。结论羧甲基壳聚糖经高温碱化和醇洗反应处理均能有效灭活病毒,保证了产品的安全性。
- 杨倩宋战昀张旭光李敏思王向辉隋佳辰张健郑言魏春艳王振国
- 关键词：甲壳素羧甲基壳聚糖
