陈建泉
- 作品数：12 被引量：31H指数：4
- 供职机构：扬州大学农学院动物医学系更多>>
- 发文基金：“八五”国家科技攻关计划“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 乳腺特异性基因转基因山羊表达特性的研究被引量：3
- 1999年
- 采用胚胎显微注射的方法，将牛乳酪蛋白（αｓｌｃａｓｅｉｎ）基因作为乳腺定位表达调控序列与人乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ／ａｙｗ）基因组成的两个融合构件（λ１０６和λ２０７）导入山羊原核期受精卵。产出的Ｇ０代羊用ＨＢｘ和ｃａｓｅｉｎ８００两个探针进行ＰＣＲ＋Ｓｏｕｔｈｅｒｎ整合检测，分别获得λ１０６和λ２０７构件整合阳性羊１６和２４只。用ＥＬＩＳＡ／ＨＢｓＡｇ试剂盒检测转基因羊乳汁中的重组人乙型肝炎表面抗原（ｒＨＢｓＡｇ），在Ｇ０代转基因羊中，λ１０６乳腺表达率是４７２％（１７／３６）；λ２０７是６８６％（２４／３５）。Ｇ０代转基因母羊与正常公羊交配，所产的４１只Ｇ１代羊中有１３只整合阳性（３１７％），其中６只Ｇ１代整合羊中，乳腺表达率为６６６７％（４／６）。表达阳性羊乳免疫注射６只成年兔，结果在它们的血清中全部检测到ＨＢｓＡｂ（６／６）。试验表明，由αｓｌｃａｓｅｉｎ和ＨＢｓＡｇ／ａｙｗ基因组成的λ１０６和λ２０７两个融合基因构件导入山羊原核期受精卵后均可获得乳腺特异性表达转基因羊，最高表达量达１３０７μｇ／ｌｉｔｅｒ，由此证明通过牛αｓｌ酪蛋白调控序列作为定位基因来指导ＨＢｓＡｇ／ａｙｗ基?
- 成勇成国祥王杏龙穆宗尧陈建泉徐少甫劳为德张靖溥张旭晨魏允影
- 关键词：乙肝表面抗原乳腺转基因山羊基因表达山羊
- 乙基亚硝基脲诱发转基因小鼠体内基因突变及微核形成
- 2000年
- 目的 用致突变剂乙基亚硝基脲 (ENU)验证基于pUC 118NX质粒的转基因小鼠用于体内诱变研究的可行性。方法 用酶切、环化方法从经过和未经过ENU诱变处理的xylE ,C5 7BL 6J转基因小鼠脾脏组织DNA中重新分离pUC 118NX质粒 ,使其转化DH10B宿主菌并铺氨苄青霉素抗性平板培养后喷洒邻苯二酚溶液 ,通过菌落颜色不同筛选突变体 ,并对突变靶基因xylE测序分析以确定突变类型。同时取该转基因小鼠外周血及骨髓细胞 ,观察ENU对转基因小鼠微核形成率的影响。结果 转基因小鼠脾脏组织xylE基因自发突变率 <4 79× 10 - 5,经ENU( 5 0mg kg× 5 )处理后 ,脾组织基因诱发突变率为 19 83× 10 - 5,两者差异有显著性。ENU诱发小鼠脾组织基因突变的类型包括颠换( 5 0 % )、单 /双碱基插入 ( 3 7 5 % )和转换 ( 12 5 % )。经ENU( 5 0mg kg× 5 )处理后 ,转基因小鼠外周血细胞微核率 ( 7 6‰ )和骨髓细胞微核率 ( 8 8‰ )均明显高于溶剂对照组 ,表明ENU可诱发该转基因小鼠染色体畸变。结论 基于pUC 118NX质粒的xylE ,C5 7BL 6J转基因小鼠可用于同时测定体内基因突变和染色体畸变 ,有望成为一种新的评价化学物遗传毒性的检测系统。
- 曹洁印木泉陈建泉徐少甫
- 关键词：小鼠转基因微核DNA损伤
- 牛αs1酪蛋白/HBsAg基因在山羊乳腺中暂态表达被引量：6
- 1998年
- 采用显微外科的方法将牛αｓ１酪蛋白基因和人乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因组成的融合基因（λ２０７）与介导蛋白一起导入产前、产后山羊乳腺，或经人工诱导泌乳处理的成年母山羊乳腺，产生乳腺转基因山羊．ＰＣＲ基因扩增检测２只乳腺转基因后的小母羊，在基因导入后的６ｄ和２９ｄ分别在乳腺等组织中存在外源基因．经酶联免疫ＥＬＩＳＡ检测，１２只不同生理状态下乳腺转基因母山羊在其泌乳的第１１９天的乳汁中存在表达产物———重组人乙型肝炎表面抗原（ｒＨＢｓＡｇ），表达率为１００％；在第１２天的乳汁中１２只羊平均表达量为３．８０８μｇ·Ｌ－１，与同一基因构件经胚胎显微注射所产生的转基因山羊乳汁中的表达水平（３．５１７μｇ·Ｌ－１）基本一致．
- 成勇徐少甫劳为德成国祥劳为德成国祥张靖溥张旭晨魏允影
- 关键词：山羊乳腺乙型肝炎抗原基因表达
- 乙型肝炎病毒X基因转基因小鼠的初步建立被引量：5
- 1999年
- ＨＢｘ基因为ＨＢＶ基因组上的一个开放读框，可编码具有转录反式激活作用的蛋白（ＨＢｘＡｇ）。已证实在体外ＨＢｘＡｇ可使哺乳细胞株发生恶性转化［１］。为了探索在体内ＨＢｘＡｇ转化细胞的作用，国外数个实验室已相继建立了ＨＢｘ转基因鼠模型［２，３］。为研究Ｈ...
- 朱焕章史景泉成国祥成国祥旷双运陈建泉成勇孙强孙强成勇成勇张新立
- 关键词：乙型肝炎X基因转基因小鼠
- 携带xylE的转基因小鼠的制备被引量：3
- 1999年
- 建立了一种新的转基因小鼠致突变检测模型．选用ｘｙｌＥ基因作为诱变的靶基因，以ｐＥＳｎｘ穿梭质粒作为载体，通过显微注射法将线状ｐＥＳｎｘ导入ＩＣＲ小鼠制备Ｇ０小鼠．将显微注射后存活的３５２／５４９枚受精卵分别移入２４只受体雌鼠的输卵管中，共产生４１只仔鼠，存活３０只（Ｇ０），经过整合检测，检测出转基因小鼠１７只，阳性率为５７％．从中筛选出２只完整整合了ｐＥＳｎｘ的转基因小鼠作为首建鼠（ｆｏｕｎｄｅｒｍｏｕｓｅ）进行繁育，目前已繁殖到第三代（Ｇ３）．经过逐代整合检测，证明转入的基因可稳定地遗传．上述结果表明已成功地制备了在基因组中整合了ｐＥＳｎｘ质粒携带ｘｙｌＥ的转基因小鼠．
- 黄建印木泉陈耀富陈耀富成国祥陈建泉邱信芳成国祥
- 关键词：小鼠转基因
- 突变靶基因xylE转基因小鼠被引量：4
- 1997年
- 本研究以ｐＥＳｎｘ穿梭质粒为载体，选用恶臭假单孢杆菌ＴＯＬ质粒上的ｘｙｌＥ基因作为突变靶基因组构建的重组构件，经微注射导入ＩＣＲ小鼠５４９枚受精卵雄原核，将存活的３５２枚卵移入２４只假孕鼠输卵管内，７只妊娠，共产仔４１只，其中７只死胎，出生后死亡４只，３０只存活。注射卵存活率为６４％（３５２／５４９），出生率为１１．６％（４１／３５２）。存活鼠经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ检测，整合率为５７％（１７／３０）。在整合阳性鼠中选择了杂交信号较强的２只当代公鼠，通过回收载体和转化试验，结果表明整合基因完整，具有转化的功能，由此，建立了突变靶基因ｘｙｌＥ转基因小鼠模型。
- 陈建泉成国祥成勇徐少甫黄建印木泉
- 关键词：靶基因突变E基因转基因小鼠孕鼠假孕
- xylE转基因小鼠的实验研究及转基因小鼠致突变检测模型的应用现状被引量：3
- 1997年
- 黄建陈建泉等
- 关键词：转基因小鼠致突变性动物模型
- xylE 转基因小鼠突变检测系统的建立被引量：3
- 1999年
- 为了验证ｘｙｌＥ转基因小鼠能否用于体内基因突变检测，首先对从小鼠体内回收目的质粒的影响因素（电压，基因组ＤＮＡ浓度和Ｔ４连接酶浓度）进行了研究，结果发现用ＨｉｎｄⅢ酶切后的０．５μｇ组织ＤＮＡ在４００μＬ反应体系中以０．３ＵＴ４连接酶连接后，以１６ｋＶ，２００Ω，２５μＦ的参数用电穿孔法转化大肠杆菌ＤＨ１０Ｂ菌株是回收目的质粒效率最高的方法．在此基础上观察了致突变剂ｎ－甲基－ｎ′－硝基－ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对转基因小鼠（ｉｐ１０ｍｇｋｇ－１ｄ－１，连续４ｄ）外周血正染红细胞（ＮＣＥ）的微核率和肝组织中ｘｙｌＥ基因的自发和诱发突变率，并对突变的ｘｙｌＥ基因进行序列分析，结果ＭＮＮＧ使外周血ＮＣＥ的微核率从（２．２０±１．４８）‰上升为（６．８０±２．２８）‰（Ｐ＜０．０１），ｘｙｌＥ基因的突变率从小于１／２２８４３增至４／１８６４１，表明ＭＮＮＧ可诱发转基因小鼠ＮＣＥ微核率和肝组织中ｘｙｌＥ基因突变率显著升高．序列分析显示ＭＮＮＧ诱发的ｘｙｌＥ基因突变主要是单碱基缺失．上述结果表明ｘｙｌＥ转基因小鼠是检测体内基因突变的有效模型．
- 黄建印木泉陈耀富陈耀富成国祥陈建泉邱信芳成国祥
- 关键词：转基因小鼠突变检测系统
- 复制型HBV转基因小鼠的遗传与繁育研究被引量：7
- 1996年
- 本文采用类似系祖建系的方法，对复制型ＨＢＶ转基因小鼠模型的１７、２１、２５三个系列进行了繁育，通过ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子杂交的方法，检测三个系列小鼠尾组织和血清的ＤＮＡ样品，以确定ＨＢＶ基因的整合和复制情况。结果表明，ＨＢＶ基因已稳定地遗传至第五代（Ｆ５），且各世代小鼠血清中都存在ＨＢＶＤＮＡ，此外，整合阳性小鼠的血清中能测出ＨＢＶＤＮＡ的比率很高，Ｆ１代为９４．４４％（１０２／１０８），Ｆ２、Ｆ３代为９５．３１％（６１／６４），故在繁育中可以通过测血清中的ＨＢＶＤＮＡ来确定小鼠是否整合。
- 李厚达李劲松陈建泉万曙光励雁峰成勇万大方徐少甫钱耕荪成国祥
- 关键词：HBV转基因小鼠血清DNA鼠模型阳性
- 纯合子转基因动物筛选方法研究进展被引量：5
- 1997年
- 纯合子转基因动物筛选方法研究进展陈建泉成国祥徐少甫（扬州大学农学院生物技术研究所及动物医学系，哺乳动物胚胎工程与遗传工程实验室，扬州２２５００９）转基因动物在基础生物学、临床医学、制药工业、品种改良等众多领域中已日益显示其重要地位。转基因动物技术，在...
- 陈建泉成国祥徐少甫
- 关键词：动物转基因动物
