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阎辉: 作品数：26 被引量：8H指数：2; 供职机构：浙江省医学科学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金浙江省重大科技专项资金浙江省医药卫生科学研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>

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一种重组痘苗病毒表面展示系统载体质粒及应用: 本发明公开了一种重组痘苗病毒表面展示系统载体质粒及应用，所述痘苗载体质粒展示系统的表达框核心组分包括修饰的痘苗病毒H5启动子、大肠杆菌EM7启动子、串联的组氨酸标签、能结合链霉亲和素的多肽片段Nano‑tag15、红荧光...; 阎辉罗砚曦刘美丽; 文献传递

基于抗性恢复的高效克隆超短片段重组质粒的构建: 2017年; 分子克隆作为一种常规技术被广泛应用于DNA及蛋白质的研究。在传统的分子克隆中,主要通过限制性内切酶先分别消化目的 DNA片段及载体,再纯化回收,然后用DNA连接酶将二者连接。而对一些超短基因片段(<300 bp),通过酶切及切胶纯化后,回收率极低,导致插入表达载体比较困难。文中介绍了一种新的利用质粒抗性恢复进行克隆的方法,大大提高了克隆效率,为短基因片段的分子克隆提供了一种高效的方法。; 刘美丽罗砚曦赵铮蓉阎辉; 关键词：分子克隆

超电荷绿色荧光蛋白(+36GFP):一种新型生物大分子穿膜载体: 2017年; 超电荷绿色荧光蛋白(sc GFP)是一种表面带很高净电荷的新型功能蛋白质。ScGFP具有很强的水溶性和抗蛋白质聚集的能力,在生物技术、医药和材料科学方面有着广泛的应用前景。带正电荷的sc GFP能够穿透细胞膜,具有运载核酸和蛋白质等生物大分子进入哺乳动物细胞内的能力。与传统的转运载体相比,sc GFP有细胞毒性低、转运效率高和具广泛的细胞普适性等优点。带正电荷的sc GFP与带负电荷的核酸分子之间通过静电相互作用形成自组装的多离子复合物,这与生物体中的组蛋白和带负电荷的DNA之间自组装成染色质的行为非常相似。本文以带有36个正电荷的超电荷绿色荧光蛋白(+36GFP)为例,对超电荷蛋白的性质,细胞穿透能力以及其作为生物大分子穿透载体的应用等方面做一综述。; 刘美丽罗砚曦阎辉

适配体与病毒性感染诊断及治疗: 2013年; 适配体(Aptamers)是通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术,从随机核酸文库中筛选出来的单链寡核苷酸,已在临床医疗及其他领域得到日益广泛的应用.与抗体相比,适配体具有很多优点,如高亲和力、高特异性、分子量小、几乎无免疫排斥反应、结构稳定、易于合成等.可用于适配体筛选的靶标范围非常广,包括有机小分子、蛋白质、完整细胞及病毒颗粒等.迅速可靠的病原检测对于病毒性传染病的成功预防和治疗具有重要意义.随着严格筛选和快速分离技术的进步,适配体在病毒感染的检测治疗中显示出巨大的潜力.本文概括介绍了适配体在病毒研究方面的最新应用进展及未来前景.; 李红玉阎辉; 关键词：适配体病毒检测病毒治疗

超正电荷绿荧光蛋白+36GFP作为核酸载体的细胞穿透性分析被引量：2: 2013年; 旨在通过原核表达纯化超正电荷绿色荧光蛋白+36GFP,研究其与核酸的结合作用及作为核酸载体的细胞转导功能。将pET+36GFP-HA2质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,然后表达纯化+36GFP蛋白。将得到的目的蛋白在特定浓度下分别转导293细胞、HepG2细胞、A549细胞和B16细胞,流式细胞仪检测+36GFP的转导效率;+36GFP蛋白(100 nmol/L)转导A549细胞,激光共聚焦显微镜观察结果;将+36GFP蛋白与质粒DNA按不同比例孵育,凝胶阻滞实验检测+36GFP与DNA的结合能力;激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测+36GFP蛋白携带质粒DNA转导细胞后报告基因的表达。结果显示,+36GFP蛋白具有较高的细胞转导效率,且随浓度升高转导效率增加,呈浓度依赖性。凝胶阻滞实验显示,+36GFP能够与质粒DNA结合,阻滞DNA在凝胶中迁移,且呈现一定的浓度依赖性。+36GFP包裹质粒转导细胞后,可高效携带质粒DNA转导进入细胞,使质粒报告基因得到表达。本研究成功表达纯化了+36GFP蛋白,证实该蛋白具有较高的细胞转导效率,可将外源核酸携带入细胞使外源基因得到表达。; 李红玉房有荣于海涛俞盈阎辉; 关键词：细胞转染

腺病毒E4orf4蛋白诱导的肿瘤特异性细胞死亡及其在癌症治疗中的应用: 2018年; 腺病毒E4orf4蛋白由腺病毒早期第4转录区第4开放读码框编码,为一种多功能调节蛋白质,其活性包括下调早期病毒基因表达和下调影响病毒复制的细胞基因表达,调控病毒基因的选择性转录后剪切以影响病毒感染进程等。当E4orf4脱离病毒环境单独表达时,可诱导不依赖p53和胱天蛋白酶途径的癌细胞特异性细胞死亡,而不影响原代细胞的正常生长。这表明E4orf4对癌细胞有特异性的杀伤作用。本文主要介绍了:(1)E4orf4主要蛋白质伴侣(蛋白磷酸酶2A和Src家族激酶)对E4orf4细胞杀伤作用的贡献;(2)E4orf4诱导的细胞死亡独特模式的基本机制及其特点;(3)近年来利用E4orf4治疗癌症的研究。; 孙婷罗砚曦阎辉; 关键词：癌症治疗

CXCL12（SDF-1）／CXCR4信号传导通路及其肿瘤相关性研究进展被引量：5: 2011年; 细胞因子是一组分子量为8～30kD的小分子信号蛋白，多为水溶性蛋白和糖蛋白，在免疫系统中起核心作用，参与免疫和炎症反应。趋化因子是细胞因子中的一个亚家族，; 李红玉陈科达于海涛阎辉; 关键词：信号传导通路肿瘤相关性 CXCR4 水溶性蛋白信号蛋白

利用冰核蛋白N-端结构域在大肠杆菌表面展示人存活蛋白: 2017年; 存活蛋白(survivin)是高度特异的广谱肿瘤相关抗原,利用冰核蛋白(ice nucleation protein,INP)表面展示系统研究在大肠杆菌细胞表面展示人存活蛋白的可行性。将人存活蛋白基因片段和报告基因Cherry融合到冰核蛋白N-端,构建表面展示载体p ET-INP-CHY-SUV并转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经IPTG诱导后可检测到红荧光,荧光强度在胰蛋白酶的作用下降低,完整细胞ELISA实验及免疫荧光实验可检测和观察到绿荧光,表明人存活蛋白在重组菌中得到表达,并且成功展示于细胞表面,为进一步研制新型的肿瘤DNA疫苗奠定基础。; 罗砚曦蒋依俐阎辉; 关键词：存活蛋白 DNA疫苗

癌胚抗原单链抗体在细菌表面的展示及其应用: 2018年; 癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)作为肿瘤标志物,在临床肿瘤诊断及肿瘤靶向治疗等方面具有重要应用价值。癌胚抗原单链抗体(CEA-specific single chain antibody fragments,CEA-scFv)能够特异性结合癌胚抗原。本研究将癌胚抗原单链抗体展示于大肠杆菌细胞表面,分析其作为癌胚抗原检测平台和细菌靶向载体的可行性。首先将CEA-scFv基因克隆到表面展示载体pBAD-OmpA-m Cherry中,经酶切和测序证实,成功构建了重组质粒pBAD-OmpA-mCherry-CEA。重组菌经阿拉伯糖诱导后可检测到红色荧光,荧光强度在胰酶的作用下降低,全菌ELISA检测呈阳性反应,提示融合蛋白和目的蛋白质在重组菌表面展示成功。由Western印迹分析可知,融合蛋白质的相对分子质量约为85 k D,符合预期设计。进一步的研究提示,重组菌在大肠杆菌表面展示的癌胚抗原单链抗体具有生物活性,能够有效结合A549细胞裂解液的癌胚抗原。在细菌侵染细胞实验中,与对照组相比,重组菌孵育A549细胞后细胞内可明显观察到点状红色荧光,证明重组菌能够靶向侵入癌胚抗原阳性肿瘤细胞。本研究为癌胚抗原相关的快速诊断和基于细菌载体的肿瘤靶向治疗奠定了实验基础。; 蒋依俐罗砚曦翟利娟谢恬阎辉; 关键词：大肠杆菌肿瘤靶向治疗

Zeocin和GFP双筛选标记重组痘苗病毒载体的构建: 2012年; 目的为研究重组痘苗病毒通用载体，构建融合Zeocin和GFP双筛选标记质粒pcB-Zeo-GFP。方法质粒LeCo-G／Zeo含有Zeo-GFP融合基因片段，通过PCR反应、BamHI酶切后连接替换空白质粒pCB的筛选基因gpt，通过菌落PCR，酶切图谱分析及测序分析鉴定重组质粒，构建成功后将其与野生型痘苗病毒进行位点特异性同源重组，经Zeocin药物筛选2代后，用流式细胞仪观察重组痘苗病毒GFP表达。结果经菌落PCR，1号、5号和10号菌落中扩增出426bp的目的条带，与预期的大小完全一致，经酶切分析和DNA测序进一步验证了重组质粒pCB-zeo-GFP；该质粒与野生型痘苗病毒同源重组，得到了重组的痘苗病毒；Zeocin筛选2代后，病毒上清感染细胞，流式细胞分析7．18％的细胞中有GFP的表达，而阴性对照仅有1．43％；Zeocin药物筛选5代后，通过激光共聚焦可在80％以上的细胞中观察带GFP；提取的重组痘苗基因组DNA也扩增出预期大小目的条带。结论含Zeocin和GFP双筛选标记的新型重组痘苗病毒不仅具有可观察性且具有药物抗性，非常容易进行筛选鉴定。; 房有荣李红玉陈科达周文硕阎辉; 关键词：痘苗病毒 GFP

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