房有荣
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：浙江省医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省重大科技专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 超正电荷绿荧光蛋白+36GFP作为核酸载体的细胞穿透性分析被引量：2
- 2013年
- 旨在通过原核表达纯化超正电荷绿色荧光蛋白+36GFP,研究其与核酸的结合作用及作为核酸载体的细胞转导功能。将pET+36GFP-HA2质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,然后表达纯化+36GFP蛋白。将得到的目的蛋白在特定浓度下分别转导293细胞、HepG2细胞、A549细胞和B16细胞,流式细胞仪检测+36GFP的转导效率;+36GFP蛋白(100 nmol/L)转导A549细胞,激光共聚焦显微镜观察结果;将+36GFP蛋白与质粒DNA按不同比例孵育,凝胶阻滞实验检测+36GFP与DNA的结合能力;激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测+36GFP蛋白携带质粒DNA转导细胞后报告基因的表达。结果显示,+36GFP蛋白具有较高的细胞转导效率,且随浓度升高转导效率增加,呈浓度依赖性。凝胶阻滞实验显示,+36GFP能够与质粒DNA结合,阻滞DNA在凝胶中迁移,且呈现一定的浓度依赖性。+36GFP包裹质粒转导细胞后,可高效携带质粒DNA转导进入细胞,使质粒报告基因得到表达。本研究成功表达纯化了+36GFP蛋白,证实该蛋白具有较高的细胞转导效率,可将外源核酸携带入细胞使外源基因得到表达。
- 李红玉房有荣于海涛俞盈阎辉
- 关键词：细胞转染
- Zeocin和GFP双筛选标记重组痘苗病毒载体的构建
- 2012年
- 目的为研究重组痘苗病毒通用载体，构建融合Zeocin和GFP双筛选标记质粒pcB-Zeo-GFP。方法质粒LeCo-G／Zeo含有Zeo-GFP融合基因片段，通过PCR反应、BamHI酶切后连接替换空白质粒pCB的筛选基因gpt，通过菌落PCR，酶切图谱分析及测序分析鉴定重组质粒，构建成功后将其与野生型痘苗病毒进行位点特异性同源重组，经Zeocin药物筛选2代后，用流式细胞仪观察重组痘苗病毒GFP表达。结果经菌落PCR，1号、5号和10号菌落中扩增出426bp的目的条带，与预期的大小完全一致，经酶切分析和DNA测序进一步验证了重组质粒pCB-zeo-GFP；该质粒与野生型痘苗病毒同源重组，得到了重组的痘苗病毒；Zeocin筛选2代后，病毒上清感染细胞，流式细胞分析7．18％的细胞中有GFP的表达，而阴性对照仅有1．43％；Zeocin药物筛选5代后，通过激光共聚焦可在80％以上的细胞中观察带GFP；提取的重组痘苗基因组DNA也扩增出预期大小目的条带。结论 含Zeocin和GFP双筛选标记的新型重组痘苗病毒不仅具有可观察性且具有药物抗性，非常容易进行筛选鉴定。
- 房有荣李红玉陈科达周文硕阎辉
- 关键词：痘苗病毒GFP
- 改善沙门菌载体疫苗效能的若干策略
- 2012年
- 沙门菌是一种侵袭性胞内菌,利用其侵袭性,可将其减毒后改造为疫苗载体,携带异源抗原基因到细胞内,表达相应的异源抗原,从而引发免疫保护反应。然而成功研制沙门菌载体疫苗必需解决一些关键问题,包括:选择合适的保护性异源抗原和表达载体,确定抗原在载体内的表达方式(即体细胞内膜结合型或分泌型表达)和宿主细胞内的定位(内体或细胞质)等。针对上述问题,从筛选适当的沙门菌载体菌株、确定最优启动子、增强质粒稳定性、抗原表达后准确定位、提高抗原的免疫原性和优化疫苗接种制度六个方面,讨论近年来改善减毒沙门菌载体疫苗的研究策略。
- 房有荣陈科达阎辉
- 关键词：减毒沙门菌疫苗载体
- 以GFP-Zeocin为筛选标志的重组痘苗病毒载体质粒的构建
- 为研究以痘苗病毒为载体的重组病毒疫苗,本研究构建了痘苗病毒通用的载体pCB-zeo-GFP,该载体融合了GFP和Zeocin两种报告基因,由痘苗病毒p7.5k启动子驱动表达,与其紧邻着一多克隆位点,用于外源基因的插入,由...
- 房有荣阎辉
- 关键词：痘苗病毒
- 文献传递
- 表达翻转重组酶的真核载体的构建
- 2012年
- 目的构建表达翻转重组酶（FLP）重组表达的真核载体。方法以质粒pFRT为模板，用聚合酶链反应（PCR）扩增出两端包含了Xbal和BamHI内切酶识别位点的全长FLP基因片段，将该片段插入用NheI和BamHI双酶切后的载体质粒pBK—CMV上，构建出重组质粒pBK—CMV—FLP。经过转化、挑选菌落，PCR鉴定且测序均正确。结果成功构建重组质粒pBK—CMV—FLP。结论构建好的pBK—CMV—FLP质粒为生物工程上删除筛选标记物提供了良好的条件。
- 程乾房有荣邓琳阎辉郑骏年
- 关键词：真核载体
