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TAT细胞穿透肽融合小鼠SurvivinT34A重组蛋白的原核表达纯化及其细胞转导效能研究: 2011年; 为研究细胞穿透肽TAT融合小鼠存活素T34A(survivinT34A)重组蛋白(TAT-msvT34A)转导细胞的效能,该实验将表达TAT-msvT34A的原核表达载体pTAT-msvT34A转化大肠杆菌表达株E.coli BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。通过亲和层析、离子交换柱层析、分子筛等步骤纯化,得到TAT-msvT34A融合蛋白的纯度可达98%。纯化的融合蛋白用异硫氰酸荧光素(FITC)标记(FITC-TAT-msvT34A)后,分别转导HepG2、TC-1、B16及HEK293细胞株,流式细胞仪检测显示,较低浓度的重组蛋白即对HepG2、TC-1、B16及HEK293等细胞株具有较高的转导效能,在100 nmol/L时的转导效率均可达到60%以上,作为对照,FITC标记的牛血清白蛋白(FITC-BSA)在100 nmol/L时对上述细胞株的转导效率极低,结果具有显著性差异(P<0.01)。荧光显微镜观察可见,50 nmol/L和100 nmol/L的TAT-msvT34A融合蛋白对HepG2细胞的转导效率均可达50%,而对照FITC-BSA对HepG2细胞几乎无转导。表达纯化的TAT-msvT34A融合蛋白对HepG2、TC-1、B16及HEK293等细胞株均有较高的转导效能,可以用于后续抗肿瘤研究。; 于海涛陈科达倪崖阎辉; 关键词：原核表达凋亡

超正电荷绿荧光蛋白+36GFP作为核酸载体的细胞穿透性分析被引量：2: 2013年; 旨在通过原核表达纯化超正电荷绿色荧光蛋白+36GFP,研究其与核酸的结合作用及作为核酸载体的细胞转导功能。将pET+36GFP-HA2质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,然后表达纯化+36GFP蛋白。将得到的目的蛋白在特定浓度下分别转导293细胞、HepG2细胞、A549细胞和B16细胞,流式细胞仪检测+36GFP的转导效率;+36GFP蛋白(100 nmol/L)转导A549细胞,激光共聚焦显微镜观察结果;将+36GFP蛋白与质粒DNA按不同比例孵育,凝胶阻滞实验检测+36GFP与DNA的结合能力;激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测+36GFP蛋白携带质粒DNA转导细胞后报告基因的表达。结果显示,+36GFP蛋白具有较高的细胞转导效率,且随浓度升高转导效率增加,呈浓度依赖性。凝胶阻滞实验显示,+36GFP能够与质粒DNA结合,阻滞DNA在凝胶中迁移,且呈现一定的浓度依赖性。+36GFP包裹质粒转导细胞后,可高效携带质粒DNA转导进入细胞,使质粒报告基因得到表达。本研究成功表达纯化了+36GFP蛋白,证实该蛋白具有较高的细胞转导效率,可将外源核酸携带入细胞使外源基因得到表达。; 李红玉房有荣于海涛俞盈阎辉; 关键词：细胞转染

CXCL12（SDF-1）／CXCR4信号传导通路及其肿瘤相关性研究进展被引量：5: 2011年; 细胞因子是一组分子量为8～30kD的小分子信号蛋白，多为水溶性蛋白和糖蛋白，在免疫系统中起核心作用，参与免疫和炎症反应。趋化因子是细胞因子中的一个亚家族，; 李红玉陈科达于海涛阎辉; 关键词：信号传导通路肿瘤相关性 CXCR4 水溶性蛋白信号蛋白

肿瘤细胞致死性人α-乳清蛋白的抗肿瘤作用及其机制的研究进展被引量：1: 2011年; 肿瘤细胞致死性人α-乳清蛋白(humanα-lactalbumin made lethal to tumor cells,HAMLET)是人α-乳清蛋白与油酸结合后改变自身三级结构而形成的脂蛋白复合物,能够选择性杀伤肿瘤细胞,而对正常细胞几乎无影响。HAMLET杀伤肿瘤细胞的机制目前还未完全明确。早期研究显示,HAMLET通过细胞凋亡机制杀伤肿瘤细胞;进一步研究发现,HAMLET并不主要依赖凋亡,而是通过细胞自噬、内质网应激、蛋白酶体、溶酶体、组蛋白和DAN等多种途径杀伤肿瘤细胞。HAMLET对皮肤乳头状瘤、膀胱癌局部用药的抗肿瘤临床试验已取得良好的效果,它很可能成为具有良好应用前景的绿色抗肿瘤新药。; 于海涛陈科达阎辉; 关键词：肿瘤 HAMLET 自噬凋亡

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于海涛