陈科达
- 作品数：18 被引量：26H指数：3
- 供职机构：浙江省医学科学院更多>>
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- 疫苗中铝佐剂的危害性研究进展
- 2013年
- 铝佐剂疫苗被长期广泛应用于全球儿童计划免疫中，但疫苗中铝佐剂所致的毒副反应尤其是神经系统毒副反应尚未引起学术界的普遍重视。此文对疫苗中铝佐剂与巨噬细胞肌筋膜炎及慢性疲劳、认知功能障碍、海湾战争综合征、自闭症、克罗恩病、皮肤淋巴组织增生症、急性类肉瘤状病及其他局部病变等的相关性进行综述。
- 杜娟胡天天王静华陈科达
- 关键词：疫苗铝佐剂毒性
- 微载体技术高密度培养MRC-5细胞初探被引量：2
- 2014年
- 目的 通过探索MRC-5细胞的微载体培养条件,以期建立MRC-5细胞的高密度培养方法.方法 用3种不同培养基（MEM、M199、DMEM）分别培养3.0×104/mL的MRC-5细胞,观察它们的细胞增殖及传代能力；在Spinner培养系统中,用1.0 g/L Cytopore 2和3.0 g/L Cytodex 3分别培养密度为3.70× 105/mL和2.98×105/mL的MRC-5细胞,观察两种载体对细胞生长代谢和细胞密度的影响,筛选出最适宜的培养基及微载体.使用5 L CelliGen310生物反应器对筛选获得的培养基及微载体进行MRC-5细胞的灌流培养初步摸索.结果 MRC-5细胞在MEM、M199、DMEM培养基中培养96 h细胞分别增殖了7.0、4.4和3.0倍；在MEM培养基中连续传代至5次以上,细胞增殖稳定,1：3传代72 h形成致密单层,而在M199和DMEM培养基中连续传代均未能获得理想的细胞形态.经96～120 h的培养后,使用1.0 g/L Cytopore 2培养的MRC-5细胞密度达到2.20× 106/mL高于使用3.0 g/L Cytodex 3的1.12×106/mL,且前者葡萄糖和乳酸代谢较后者更为活跃.首选MEM和Cytopore 2作为MRC-5细胞的灌流培养体系.在5L生物反应器中以1.0 g/L Cytopore 2和2.5LMEM培养基培养MRC-5细胞至144h,细胞密度达到1.54×106/mL.结论 初步建立的MEM Cytopore 2微载体细胞培养方法能够获得高密度、活性良好的MRC-5传代细胞.
- 姜云水李剑波顾春燕陈科达唐彩华包佳源毛岱敏张峰庄昉成王平
- 关键词：细胞培养技术微载体
- 非甲基化CpG寡聚脱氧核苷酸对人乳头瘤病毒治疗性蛋白疫苗的免疫佐剂作用被引量：2
- 2013年
- 目的研究非甲基化CpG寡聚脱氧核苷酸（CpG-ODN）联合宫颈癌治疗性融合蛋白疫苗HPV16L2ESET（以下简称蛋白疫苗）诱导小鼠产生的免疫应答及其在肿瘤免疫治疗中的免疫佐剂作用。方法免疫学试验：108只雌性C57BL／6小鼠随机分成CpG组、蛋白疫苗组、CpG＋蛋白疫苗组，每组36只，分别肌肉注射CpG-ODN（10μg／只）、蛋白疫苗（120μg／只）、蛋白疫苗（120μg/只）和CpG-ODN（10μg／只）的混合溶液，免疫程序为0,3、7d；ELISPOT法检测IFN-T，间接ELISA法检测IgG抗体水平，分别评价小鼠产生的细胞及体液免疫效果。肿瘤抑制试验：将40只雌性C57BL／6小鼠皮下接种TC．1肿瘤细胞（1×104／只），24h后随机分成4组接种疫苗，每组10只，CpG组、蛋白疫苗组和CpG＋蛋白疫苗组分别肌肉注射CpG-ODN（10μg/只）、蛋白疫苗（120μg／只）、蛋白疫苗（120μg／只）和CpG-ODN（10μg／只）的混合溶液，免疫程序为0、3、7d；对照组不给药。通过成瘤率分析抗肿瘤效果。结果免疫学试验表明，免疫后14、21和28d,CpG＋蛋白疫苗组小鼠分泌IFN-y的T细胞高于蛋白疫苗组（Z=-2．36、-3．58、-3．58，P均〈0．05），在21d达到最高水平；免疫后5周，CpG＋蛋白疫苗组IgG抗体滴度维持在1：1×105左右，其中在10、14、21、42d与蛋白疫苗组比较差异显著（t=6．15、5．84、4．57、7．91，P均〈0．01）；抑瘤试验表明，蛋白疫苗组能延缓肿瘤生长，成瘤率为40％，添加CpG-ODN后，成瘤率降为0（x^2=5．00，P〈0．05）。结论将CpG-ODN与HPV16L2E6E7融合蛋白疫苗联合应用，可以诱导C57BL／6雌性小鼠产生更强的特异性体液和细胞免疫应答，对荷瘤鼠有更好的抗肿瘤效果，有望提高疫苗的免疫治疗效果。
- 吴小红吴洁陈刚金素凤高孟陈科达姜云水李剑波罗永能庄昉成
- 关键词：CPGODN肿瘤免疫治疗
- 人乳头瘤病毒治疗性多肽及蛋白疫苗的研究进展
- 2011年
- 开发靶向E6和E7蛋白的HPV治疗性疫苗，用其治疗HPV感染及其所引起的癌变有着十分重要的意义。多种治疗性疫苗已进入临床前和临床研究。此文就HPV治疗性多肽及蛋白疫苗的研究进展作了综述。
- 吴小红陈科达姜云水庄昉成
- 关键词：宫颈癌人乳头瘤病毒多肽疫苗蛋白疫苗
- 人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗酶联免疫检测法的建立及其应用被引量：1
- 2015年
- 目的建立人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗（HPV16 L2E6E7）酶联免疫的检测方法,用于疫苗发酵过程中的重组蛋白表达的监控。方法用常规方法制备兔抗HPV16 L2E6E7多克隆抗体作为包被抗体,商品化小鼠抗HPV16 E7单克隆抗体为检测抗体,夹心ELISA方法检测HPV16 L2E6E7抗原参考品,建立抗原标准曲线,确定线性范围及检测限,同时验证该方法的特异性。结果建立了检测HPV16 L2E6E7抗原含量的夹心ELISA方法,抗原参考品系列浓度在19.53~1 250 ng·m L-1内有很好的线性（R2〉0.99）和回收率（90%~110%）;特异性好,不受发酵液中宿主菌蛋白的干扰。结论建立了人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗重组抗原含量的测定方法,为该疫苗的发酵工艺的质控提供了有效技术手段。
- 李剑波潘海桦姜云水吴洁陈刚高孟金素凤吴小红包佳源陈科达庄昉成
- 关键词：人乳头瘤病毒16型重组蛋白抗体
- 人乳头瘤病毒治疗性活载体疫苗的研究进展被引量：1
- 2011年
- 高危型人乳头瘤病毒（HPV）－16和HPV-18在宫颈癌的致病过程中起着重要作用。近年来，HPV预防性疫苗已成功上市，但其费用较高，且不能治疗已感染的患者及相关的损伤。多种靶向E6／E7抗原的HPV治疗性疫苗已进入临床前模型和临床试验，包括活载体疫苗，多肽、蛋白疫苗，核酸疫苗及细胞疫苗。此文就HPV治疗性活载体疫苗进行了综述。
- 吴小红陈科达吴洁庄昉成
- 关键词：宫颈癌
- 光镊技术在单分子及病毒研究中的应用
- 2014年
- 光镊技术自1986年诞生以来,已广泛用于生命科学的研究,尤其对单分子的研究更是热门领域.此文简要介绍光镊技术的原理及其在单分子和病毒学相关方面的研究应用,同时展望该技术在病毒研究上可能应用前景,为该领域进一步突破提供新的思路和技术支持.
- 陈科达忻亚娟
- 关键词：单分子病毒
- 人乳头瘤病毒治疗性疫苗综合疗法的研究现状与临床潜力
- 2011年
- 近年来，人乳头瘤病毒（HPV）治疗性疫苗的研究一直处于非常热门的地位，不少研究已经进入临床试验。HPV是宫颈癌的主要诱因，除了肿瘤细胞逃逸免疫机制外，HPV本身也有其特殊的逃逸机制，因此单一有效的治疗性疫苗研发有其一定的难度。从研究趋势上看，HPV治疗性疫苗联合其他治疗方式的综合性治疗或许成为有效的最新的研究热点而被认为具有更高的临床应用潜力。此文就目前的联合HPV治疗性疫苗的综合治疗方法研究进展进行综述，同时展望了未来值得探索的方向。
- 陈科达吴小红庄昉成
- 关键词：疫苗人乳头状瘤病毒
- TAT细胞穿透肽融合小鼠SurvivinT34A重组蛋白的原核表达纯化及其细胞转导效能研究
- 2011年
- 为研究细胞穿透肽TAT融合小鼠存活素T34A(survivinT34A)重组蛋白(TAT-msvT34A)转导细胞的效能,该实验将表达TAT-msvT34A的原核表达载体pTAT-msvT34A转化大肠杆菌表达株E.coli BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。通过亲和层析、离子交换柱层析、分子筛等步骤纯化,得到TAT-msvT34A融合蛋白的纯度可达98%。纯化的融合蛋白用异硫氰酸荧光素(FITC)标记(FITC-TAT-msvT34A)后,分别转导HepG2、TC-1、B16及HEK293细胞株,流式细胞仪检测显示,较低浓度的重组蛋白即对HepG2、TC-1、B16及HEK293等细胞株具有较高的转导效能,在100 nmol/L时的转导效率均可达到60%以上,作为对照,FITC标记的牛血清白蛋白(FITC-BSA)在100 nmol/L时对上述细胞株的转导效率极低,结果具有显著性差异(P<0.01)。荧光显微镜观察可见,50 nmol/L和100 nmol/L的TAT-msvT34A融合蛋白对HepG2细胞的转导效率均可达50%,而对照FITC-BSA对HepG2细胞几乎无转导。表达纯化的TAT-msvT34A融合蛋白对HepG2、TC-1、B16及HEK293等细胞株均有较高的转导效能,可以用于后续抗肿瘤研究。
- 于海涛陈科达倪崖阎辉
- 关键词：原核表达凋亡
- 短串联重复序列图谱分析法鉴定HEK293细胞传代的稳定性
- 2012年
- 目的用短串联重复序列（STR）图谱20位点分析法对疫苗研发用HEK293细胞的传代稳定性进行研究。方法对购自美国菌毒种保管中心（ATCC）的HEK293细胞进行传代，按中国药典三部要求建立主种子库（第40代），工作种子库（第43代）和生产终末细胞（第65代），并进行SIR检测；按检测要求进行细胞扩增，DNA提取，PCR扩增及SIR20位点分析。结果STR图谱20位点分析法已全面覆盖美国ATCC9位点和中检院16位点法，三级传代细胞检测结果与ATCC标准株293EcRShh（Adv5）匹配度100％，与中检院检测结果完全一致，无外源细胞的污染。结论本实验室传代建库的HEK293细胞遗传稳定，无外源细胞污染，符合疫苗研发用要求。
- 吴洁李剑波毛子安吴小红陈科达高孟陈刚姜云水金素凤庄昉成
- 关键词：串联重复序列HEK293
