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闻洁君: 作品数：10 被引量：5H指数：2; 供职机构：华东师范大学生命科学学院更多>>; 发文基金：上海市青年科技启明星计划中国科学院“百人计划”生化工程国家重点实验室开放基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

合作作者

人LIGHT胞外段基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：2: 2009年; 目的:构建人LIGHT胞外段基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达。方法:从人外周血单核细胞来源的未成熟树突状细胞中提取总RNA,通过RT-PCR得到LIGHT胞外段基因,并将其克隆至pET32a(+)原核表达载体中,经双酶切鉴定及序列测定后的重组质粒转化入E.coli BL21,IPTG诱导表达目的蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot进行检测。结果:RT-PCR扩增出了大小为543bp的LIGHT胞外段基因,经测序证明序列正确。SDS-PAGE和Western blot分析证实重组质粒可表达出Mr约为41000的蛋白。结论:成功地克隆了人LIGHT胞外段基因并在大肠杆菌中进行了表达为进一步研究LIGHT的功能打下了基础。; 郝文丽江文正闻洁君樊燕钱旻; 关键词：LIGHT 基因克隆原核表达大肠杆菌

人肠道病毒71型VP0蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1: 2011年; 目的:原核表达并纯化人肠道病毒71型(EV71)VP0蛋白,免疫豚鼠制备多克隆抗体,并鉴定其用于EV71检测的反应性和特异性。方法:PCR方法扩增VP0基因,构建原核表达质粒pET-VP0并转化大肠杆菌,诱导表达并纯化VP0重组蛋白,免疫豚鼠制备抗VP0多克隆抗体,ELISA方法检测抗VP0抗体效价,细胞免疫荧光和Western blot方法鉴定抗体特异性。结果:VP0重组蛋白在大肠杆菌BL21中高效表达,制备的抗VP0抗体效价为1∶106。细胞免疫荧光及Western blot检测结果显示,抗VP0多克隆抗体可以识别原核表达及EV71感染细胞中的VP0蛋白。结论:原核表达了EV71的VP0蛋白并制备出抗VP0多克隆抗体,为EV71的临床诊断、疫苗开发和分子病毒学研究提供了新的研究工具和手段。; 冯嫣芳刘庆伟库志强闻洁君单虎黄忠; 关键词：手足口病人肠道病毒71型 VPO 多克隆抗体

LIGHT表达质粒增强HIV-1 Nef核酸疫苗免疫原性的研究: 研究背景:核酸疫苗的免疫效果在不同动物个体中差异较大,某些肿瘤及病毒的T、B细胞表位抗原性弱,难以诱导有效的T、B细胞免疫应答,提高核酸疫苗的免疫效果已成为研究热点。基因佐剂是将编码某些细胞因子及T、B细胞表面共刺激分子...; 闻洁君郝文丽樊燕杜佳妮龙凤英江文正; 关键词：HIV-1 NEF 核酸疫苗 LIGHT 免疫佐剂; 文献传递

HIV-1 Nef基因的克隆、表达及其核酸疫苗的实验免疫研究: 艾滋病病毒1型/(HIV-1/)属于单股正链核糖核酸/(RNA/)逆转录病毒。该病毒因具有高突变率、高重组率和高复制率等特点,故其基因组能快速变异,产生大量变异株,从而顺利逃脱宿主的免疫压力,致使HIV感染者／艾滋病/(...; 闻洁君; 关键词：NEF蛋白核酸疫苗基因佐剂; 文献传递

一种抑制小鼠B7-DC基因表达的shRNA真核表达载体的构建方法: 本发明公开了一种抑制小鼠B7-DC基因表达的shRNA真核表达载体的构建方法，其构建流程是：根据Genebank提供的小鼠B7-DC的基因序列，选取编码区第361～379位核苷酸序列为靶序列设计并合成引物，通过引物退火，...; 江文正樊燕闻洁君郝文丽; 文献传递

HIV-1 nef基因的克隆及原核表达研究被引量：2: 2010年; 目的:构建HIV-1 Nef基因的原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达,初步优化其表达条件。方法:利用特异性引物PCR扩增获得HIV-1 Nef基因片段,PCR产物经限制性内切酶双酶切后连接载体pET24a(+),构建重组质粒pET24a(+)-Nef。经双酶切鉴定及序列测定后的重组质粒转化入E.coliBL21,IPTG诱导表达目的蛋白,优化表达条件,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定表达产物。结果:PCR扩增获得618bpDNA片段,酶切鉴定结果表明HIV Nef基因已克隆入原核表达载体pET24a(+)中,测序证明序列正确。SDS-PAGE和Western blot分析证实重组菌诱导后可表达相对分子质量(Mr)符合预期的融合蛋白。0.1mmol/LIPTG在37℃诱导6h为最佳表达条件,重组蛋白表达量可由15.8%增加到43.9%。结论:在大肠杆菌中成功地表达了HIV Nef蛋白,并初步获得了最优化的表达条件。; 闻洁君江文正郝文丽杜佳妮樊燕钱旻; 关键词：NEF蛋白原核表达

一种人LIGHT-Fc融合蛋白的制备方法: 本发明公开了一种利用毕赤酵母表达系统制备人LIGHT-Fc融合蛋白的方法，步骤包括(1)构建重组表达质粒pPIC9K-LIGHT-Fc；(2)表达人LIGHT-Fc融合蛋白酵母工程菌的制备及筛选；(3)人LIGHT-Fc...; 江文正郝文丽闻洁君樊燕杜佳妮; 文献传递

B7-H1基因沉默对树突状细胞诱导的抗乙肝病毒免疫的影响: 本研究利用RNA干扰的方法沉默树突状细胞中具有负向调节作用的分子B7-H1基因的表达，研究了它对Dc疫苗抗病毒效果的影响。结果显示，B7-H1特异性的siRNA负载HBV表面抗原的优势表位肽后可诱导更强的CTL活性，HB...; 江丈正樊燕张亚丽闻洁君; 关键词：树突状细胞 HRV B7-H1 乙肝病毒 DC疫苗; 文献传递

一种抑制小鼠B7－DC基因表达的shRNA真核表达载体的构建方法: 本发明公开了一种抑制小鼠B7－DC基因表达的shRNA真核表达载体的构建方法，其构建流程是：根据Genebank提供的小鼠B7－DC的基因序列，选取编码区第361～379位核苷酸序列为靶序列设计并合成引物，通过引物退火，...; 江文正樊燕闻洁君郝文丽; 文献传递

小鼠B7-DC胞外段原核表达载体的构建及表达: 2008年; 目的:构建小鼠B7-DC胞外段基因的原核表达载体,并在E.coli BL21中诱导表达。方法:从小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞(DC)中提取总RNA,经RT-PCR扩增B7-DC胞外段,并将其克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建重组表达质粒pET32a(+)-B7-DCECD。重组质粒经双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli BL21,经IPTG诱导表达目的蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot进行检测。结果:获得全长为582bp的小鼠B7-DC胞外段基因,经测序证实其序列正确。SDS-PAGE和Western blot分析证实重组质粒可表达出Mr约为41000的B7-DC胞外段蛋白。结论:成功地构建了小鼠B7-DC胞外段基因原核表达载体,并在E.coli BL21中进行表达,为进一步研究B7-DC的功能奠定实验基础。; 樊燕江文正张亚丽闻洁君郝文丽钱旻; 关键词：基因克隆原核表达