秦云龙
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
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- 重组鸡痘病毒与核酸疫苗联合免疫提高机体免疫功能研究
- 2001年
- 目的 :探索联合免疫对小鼠细胞免疫和体液免疫功能的影响。方法 :以表达中国流行株HIV 1核心蛋白Gag的重组鸡痘病毒vUTALG作初始免疫 ,以表达相同抗原的核酸疫苗质粒pcDNAG加强免疫 ,对被免疫鼠的细胞免疫和体液免疫功能进行初步测定。结果 :以重组鸡痘病毒首次免疫的联合免疫组与单纯用重组病毒免疫组比较 ,CD4+ T细胞数升高 ,ConA和LPS诱导的T细胞增殖能力均明显增强 ,并能诱导HIV 1特异的血清抗体反应。结论 :以重组鸡痘病毒首次免疫的联合免疫能有效的提高T ,B细胞介导的细胞免疫和体液免疫水平。
- 罗坤金宁一吴丛梅郭志儒秦云龙郭焱夏志平安汝国殷震
- 关键词：重组鸡痘病毒联合免疫免疫功能小鼠
- 中国流行株HIV-1Gag蛋白在重组鸡痘病毒的表达及鉴定
- 2001年
- 目的 以鸡痘病毒为载体，表达ＨＩＶ－１ Ｇａｇ蛋白，进而研制ＡＩＤＳ疫苗。方法 以鸡痘病毒２８２Ｅ４株 非必需区ＴＫ基因为侧翼，插入ＶＶ突变型Ｐ７．５串联启动子和牛痘病毒Ａ包涵体晚期启动子与２０个串联的突变型 早期痘苗病毒Ｐ７．５启动子组成复合启动子及ＬａｃＺ报告基因构建重组表达质粒ｐＵＴＡＬ。在ＡＴ１－Ｐ７．５复合启动子 下游，插入编码中国流行株 ＨＩＶ－１ Ｇａｇ基因（Ｂ亚型），构建了重组表达质粒ｐＵＴＡＬ－Ｇａｇ。重组质粒Ｇａｇ与ＦＰＶ共 转染ＣＥＦ细胞，进行同源重组。通过ＢＵｄＲ加压筛选，Ｘ－ｇａｌ染色，获得重组鸡痘病毒ｖＵＴＡＬＧ，用于感染ＢＨＫ细胞 并免疫小鼠。结果 经Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测，重组病毒表达了Ｇａｇ蛋白相对分子质量分别为５５０００、４８０００、２４０００和 １７０００，为Ｇａｇ蛋白的Ｐ５５、Ｐ４８、Ｐ２４和Ｐ１７蛋白。重组病毒免疫小鼠可诱导产生特异性抗体。结论 所重组的病毒 成功地表达了目的蛋白并进行了正确加工。
- 罗坤金宁一郭志儒方厚华郭焱秦云龙安汝国邵一鸣殷震
- 关键词：HIV-1重组鸡痘病毒
- HIV-1中国流行株gp120基因在痘苗病毒中的表达及其与核酸疫苗的实验免疫研究被引量：1
- 2001年
- 将HIV 1中国流行株 gp12 0基因在痘苗病毒中进行表达 ,以期获得重组痘苗病毒 ,与核酸疫苗混合免疫 ,评价免疫效果 ,为艾滋病疫苗开发研制打下基础。将HIV 1中国流行株 gp12 0基因片段插入到 pJ38载体启动子下游 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒 ,SDS PAGE、Westernblot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫BALB/c小鼠 ,进行淋巴细胞转化实验、CTL、CD4 +、CD8+T细胞数目及血清抗体等细胞免疫和体液免疫指标检测。结果获得的重组痘苗病毒vJ38gp12 0能够表达Gp12 0蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫 ,具有良好的免疫原性 ,其免疫效果以 2rVV DNA混合方式为最好。重组痘苗病毒vJ38gp12
- 王莉馨金宁一罗坤秦云龙王宏伟郭志儒殷震
- 关键词：HIV-1痘苗病毒DNA疫苗
- 中国流行株HIV-1B亚型Gag重组鸡痘病毒构建及其免疫原性被引量：1
- 2001年
- 在以鸡痘病毒 ( FPV) 2 82 E4 株为基础构建的重组表达质粒 p UTAL的 ATI-P7.5复合启动子下游 ,插入编码中国流行株 HIV-1 B亚型核心蛋白 gag基因 ,构建了重组表达质粒 p UTALG。重组质粒与 FPV共转染 CEF细胞 ,进行了同源重组。通过 BUd R加压筛选 ,X-gal染色 ,获得重组鸡痘病毒 v UTALG。 Westernblot检测结果表明 ,重组病毒表达了 Gag蛋白 ,裂解后其相对分子质量分别为 5 5× 1 0 3 、4 8× 1 0 3 、2 4× 1 0 3 和1 7× 1 0 3 。以重组病毒 v UTALG免疫小鼠 ,与 FPV对照比较 ,小鼠脾 T淋巴细胞 CD4 + T细胞数和 CD4 + /CD8+值均有上升趋势 ,Con A、LPS诱导的脾细胞增殖能力增强 ,并能诱导 CTL和 HIV-1特异的血清抗体反应 。
- 罗坤金宁一郭志儒方厚华郭焱秦云龙李萍安汝国殷震
- 关键词：HIV-1重组鸡痘病毒
- 中国流行株HIV-1gag和hIL-2/hIL-6核酸疫苗构建与实验免疫研究被引量：8
- 2001年
- 目的探讨中国流行株 HIV- 1gag与 h IL - 2 /h IL - 6共表达重组核酸疫苗质粒的免疫效果。方法以核酸疫苗质粒 p IRES1neo为表达载体 ,构建重组核酸疫苗质粒 p IRES1- gag、p IRES1- gag- h IL- 2、p IRES1- gag- h IL- 6 ,通过间接免疫荧光试验、Dot- EL ISA检测 gag/h IL - 2 /h IL - 6基因的表达产物。另将此重组核酸疫苗质粒免疫 Balb/c小鼠 ,进行淋巴细胞转化试验、CD4+ 、CD8+ T淋巴细胞数量测定、细胞毒性 T淋巴细胞 (CTL )特异性杀伤作用检测及血清抗体检测 ,结果构建的重组质粒转染 BHK细胞后可表达目的基因 ,免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖、诱导特异性 CTL 反应 ,当和 h IL- 2 /h IL- 6共表达时免疫效果更加显著。讨论与 Gag蛋白共表达的 h IL- 2 /h IL- 6能够进一步增强免疫鼠的细胞免疫与体液免疫水平 ,构建的重组质粒为 HIV-
- 秦云龙金宁一罗坤李凡王宏伟王莉馨张永生殷震
- 关键词：HIV-1GAG蛋白白细胞介素-2
- 利用中国流行株HIV-1 Gag重组痘苗病毒与核酸疫苗免疫的新程序被引量：1
- 2001年
- 目的 将中国流行株ＨＩＶ－１ Ｇａｇ基因在痘苗病毒中表达，以重组痘苗病毒与核酸疫苗混合免疫，进 而研制艾滋病疫苗。方法 将中国流行株ＨＩＶ－１ Ｇａｇ基因片段插入到ｐＪ３８载体启动子下游，经同源重组和血凝素 阴性空斑筛选重组痘苗病毒，经 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和 Ｗｅｓｔｅｒｎ检测目的蛋白。以重组痘苗病毒与核酸疫苗进行小鼠免 疫试验，淋巴细胞转化实验，ＣＩＬ，ＣＤ＋４；ＣＤ＋８细胞计数及细胞免疫和体液免疫水平检测。结果 重组痘苗病毒ｖＪ３８ Ｇａｇ具有良好的免疫原性，与２ｒＶＶ－ＤＮＡ混合免疫效果更好。结论 重组痘苗病毒 ｖＪ３８ Ｇａｇ能够表达Ｇａｇ蛋白并诱 导机体产生细胞免疫和体液免疫。
- 金宁一王莉馨罗坤秦云龙王宏伟张应玖李萍
- 关键词：HIV-1痘苗病毒GAG蛋白
- 中国流行株HIV-1Gag与IFN-α2b重组质粒的构建与实验免疫研究
- 2001年
- 目的探讨中国流行株 ＨＩＶ－ １Ｇａｇ与 ＩＦＮ－ α２ｂ共表达重组核酸疫苗质粒的免疫效果。方法以 核酸疫苗质粒ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ为表达载体，构建重组核酸疫苗质粒ｐＩＲＥＳ１－Ｇａｇ、ｐＩＲＥＳ１－Ｇａｇ－ＩＦＮ，通过间接免疫荧光 试验、ＤｏｔＥＬＩＳＡ检测Ｃａｇ／ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－６基因的表达产物。另将此重组核酸疫苗质粒免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，进行淋巴细 胞转化试验、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞数量测定、细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）特异性杀伤作用检测及血清抗体检测。 结果构建的重组质粒转染ＢＨＫ细胞后可表达目的基因，免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖，诱导特异性 ＣＴＬ反应，当和 ＩＦＮ－α２ｂ共表达时免疫效果更加显著。结论与 Ｇａｇ蛋白共表达的 ＩＦＮ－ａ２ｂ能够进一步提高细胞 免疫与体液免疫水平，构建的重组质粒为ＨＩＶ－１ＤＮＡ疫苗的研究奠定了一定实验基础。
- 秦云龙金宁一罗坤王莉馨王宏伟张永生邵一鸣殷震
- 关键词：HIV-1GAG干扰素Α2B实验免疫研究
- 利用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达 HIV-1Gag蛋白
- 2001年
- 目的在昆虫细胞中表达中国流行株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１ Ｇａｇ蛋白，制备重组 Ｇａｇ蛋白。方法将中国 株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１的 Ｇａｇ全基因序列，克隆到杆状病毒表达载体 ｐｆａｓｔｂａｃＩ中，构建了重组质粒 ｐｆａｓｔＧａｇ。经转座及平板 筛选，提取重组穿梭质粒 Ｂａｃｍｉｄ。经转染Ｓｆ９昆虫细胞后，获得了重组杆状病毒。用 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和间接免疫荧光实验分析表达的目的蛋白。结果重组病毒在昆虫细胞 Ｓｆ９中高效表达了中国株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１ Ｇａｇ蛋 白，表达的重组蛋白具有良好的抗原活性，可与ＨＩＶ－１标准阳性血清及ｐ２４单克隆抗体发生较强的免疫反应。结论 重组表达产物可用于艾滋病的免疫诊断和疫苗研究。
- 王宏伟金宁一龚伟张应玖许崇波秦云龙金洪涛邵一鸣殷震
- 关键词：免疫缺陷病毒杆状病毒GAG蛋白
- HIV-1中国流行株gag与hIL-2在重组痘苗病毒中的共表达及其与核酸疫苗的实验免疫研究被引量：3
- 2002年
- 目的：将HIV-1中国流行株B亚型gag基因、gag和hIL-2基因在天坛株痘苗病毒中进行共表达，以期获得重组痘苗病毒，观察细胞因子的佐剂作用，与核酸疫苗混合免疫，评价免疫效果，为新型艾滋病疫苗研制开发打下基础。方法：将HIV-1中国流行株 gag基因、gag和hIL-2基因片段插入到 pJ38载体启动子下游，经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒，SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫Balb/c小鼠，进行淋巴细胞转化实验、CTL、CD4+、CD8+ T细胞数目以及血清抗体的细胞免疫和体液免疫指标检测。结果：获得了重组痘苗病毒 vJ38gag和 vJ38gag-IL-2。与 vJ38-gag相比，vJ38gag-IL-2，具有更好的免疫原性，重组痘苗病毒免疫3次的效果好于重组病毒免疫2次，以2rVV-DNA混合免疫效果最好。结论：重组痘苗病毒vJ38gag和vJ38gag-IL-2能够表达外源蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫。细胞因子IL-2发挥了免疫佐剂的作用。
- 王莉馨金宁一王宏伟秦云龙罗坤葛涛江文正金洪涛
- 关键词：HIV-1HIL-2痘苗病毒
- 含中国流行株HIV-1Gag-gp120融合蛋白的重组鸡痘病毒的构建被引量：1
- 2001年
- 目的 :用重组鸡痘病毒表达中国流行株HIV 1Gag gp12 0融合蛋白。方法 :在以鸡痘病毒 2 82E4株为基础构建的重组表达质粒pUTAL的ATI P7 5复合启动子下游 ,插入编码中国流行株HIV 1Gag gp12 0嵌合基因 ,构建了重组表达质粒pUTALGP。重组质粒与FPV共转染CEF细胞 ,进行了同源重组。通过PUdR加压筛选 ,X gal染色 ,获得重组鸡痘病毒vUTAL GP。结果 :经Westernblot检测表明 ,重组病毒表达了Gap gp12 0融合蛋白 ,其分子量分别为 110× 10 3、6 9× 10 3、48× 10 3、2 4×10 3。电镜观察可见Gag蛋白在CEF细胞中形成的反转录病毒样粒子。重组病毒免疫小鼠 ,能够诱导HIV 1特异的血清抗体反应。结论 :重组鸡痘病毒成功的表达了Gag gp12 0融合蛋白 ,并进行了正确的加工。
- 金宁一罗坤方厚华王莉馨郭志儒郭焱秦云龙安汝国殷震
- 关键词：HIV-1重组鸡痘病毒
