罗坤
- 作品数：30 被引量：93H指数：8
- 供职机构：浙江大学医学院免疫研究所更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 中国流行株HIV-1B亚型Gag重组鸡痘病毒构建及其免疫原性被引量：1
- 2001年
- 在以鸡痘病毒 ( FPV) 2 82 E4 株为基础构建的重组表达质粒 p UTAL的 ATI-P7.5复合启动子下游 ,插入编码中国流行株 HIV-1 B亚型核心蛋白 gag基因 ,构建了重组表达质粒 p UTALG。重组质粒与 FPV共转染 CEF细胞 ,进行了同源重组。通过 BUd R加压筛选 ,X-gal染色 ,获得重组鸡痘病毒 v UTALG。 Westernblot检测结果表明 ,重组病毒表达了 Gag蛋白 ,裂解后其相对分子质量分别为 5 5× 1 0 3 、4 8× 1 0 3 、2 4× 1 0 3 和1 7× 1 0 3 。以重组病毒 v UTALG免疫小鼠 ,与 FPV对照比较 ,小鼠脾 T淋巴细胞 CD4 + T细胞数和 CD4 + /CD8+值均有上升趋势 ,Con A、LPS诱导的脾细胞增殖能力增强 ,并能诱导 CTL和 HIV-1特异的血清抗体反应 。
- 罗坤金宁一郭志儒方厚华郭焱秦云龙李萍安汝国殷震
- 关键词：HIV-1重组鸡痘病毒
- 树突状细胞来源的免疫抑制性受体，其编码序列及用途
- 本发明涉及了一种新型免疫抑制性受体DIgR2(DC-derived Ig-like receptor2，DIgR2)。本发明提供编码此蛋白分子的多核苷酸和经重组技术产生这种蛋白分子的方法。本发明还公开了编码这种新型免疫抑...
- 罗坤夏大静李楠曹雪涛
- 文献传递
- 新型免疫抑制性受体DIgR2的发现及其功能研究
- 在造血和免疫细胞中发现的免疫抑制性受体(in-hibotory immunoreceptor)是近年来免疫学领域的一个热点课题。免疫抑制性受体的结构特点是含有一个或多个免疫受体酪氨酸相关的抑制性基序(im-munorec...
- 罗坤夏大静王宝梅隋礼丽章卫平曹雪涛
- 文献传递
- 鸡痘病毒282E4株表达载体构建及新城疫病毒F蛋白的表达
- 将鸡痘病毒282E4株TK基因和1.5kbB片段2个非必需区克隆后,分别在TK基因Nco I位点和B片段EcoR I位点插入复合启动子(由牛痘病毒A型包涵体(ATI)启动子和20个串联的痘苗病毒(VV)突变型p7.5启动...
- 郭志儒金宁一方厚华罗坤金扩世李萍
- 关键词：鸡痘病毒新城疫病毒F蛋白
- IBDV VP2/VP243基因DNA疫苗表达质粒的构建与表达被引量：16
- 2000年
- 将传染性法氏囊病病毒 ( IBDV) VP2 /VP2 4 3插入真核表达载体 pc DNA中 ,置于 CMV启动子的调控之下 ,构建成 DNA疫苗表达质粒 pc DNA VP2和 pc DNA VP0。分别转染 CEF细胞后 ,于 2 4、4 8、72 h取细胞裂解液进行 ELISA、SDS-PAGE和 Western blot检测 ,pc DNA VP2于转染后 2 4 h呈阳性反应 ,4 8h表达量高于 2 4 h;pc DNA VP0于转染后 4 8h呈阳性反应 ,72 h表达量高于 4
- 刘毅金宁一古长庆罗坤方厚华王宏伟李萍殷震
- 关键词：DNA疫苗真核表达载体传染性法氏囊病病毒
- 新城疫病毒昌黎株与国外毒株HN蛋白基因核苷酸及氨基酸差异性分析被引量：8
- 2000年
- 参考国外发表的新城疫病毒 ( NDV)的 HN基因序列设计了 1对特异性引物 ,应用 RT-PCR对 NDV昌黎株 (野毒 )的 HN基因进行了扩增 ,扩增产物克隆后测序。扩增出的 HN基因核苷酸长度为 1 74 2 bp,编码 571个氨基酸 ,序列中有 6个糖基化位点 ,1 3个半胱氨酸残基 ,与国外发表的强毒株序列相符。核苷酸同源性在 88.5%～ 92 .9%,推导的氨基酸序列同源性在 90 .0 %～ 94 .2 %之间。
- 丁壮金宁一王兴龙金扩世罗坤郭志儒殷震
- 关键词：新城疫病毒HN蛋白基因
- IBDV VP2/VP0基因在重组鸡痘病毒中的表达及实验免疫研究
- 以FPV 282E4株TK基因为侧翼,分别将IBDV VP2和VP243目的基因克隆到牛痘病毒A型包涵体(ATI)和痘苗病毒P7.5复合型启动子下游,构建成2个重组表达质粒,命名为pUTALacVP2和pUTALacVP...
- 金宁一刘毅郭志儒方厚华古长庆罗坤夏志平
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP基因重组鸡痘病毒免疫原性
- HIV-1 env基因在重组鸡痘病毒中的表达被引量：8
- 1999年
- 在以鸡痘病毒复制非必需区TK基因为侧翼构建的载体 (插入有 16个串联的突变型痘苗病毒P7 5启动子和牛痘病毒A型包涵体晚期启动子及LacZ报告基因 )中的复合启动子下游 ,分别插入编码人免疫缺陷病毒(HIV)Ⅰ型外膜蛋白的env基因和中国株HIV 1gp12 0基因 ,通过与野生型鸡痘病毒的同源重组 ,X gal显色挑斑 ,获得 2株重组病毒vUTA - 2f- 16LE和vUTA - 2f- 16LG。经Dot-ELISA、免疫荧光试验、SDS -PAGE和Westernblot检测表明 ,2株重组病毒均能表达gp16 0和gp12 0 ,相对分子质量分别为 16 0 0 0 0和 12 0 0 0 0。经小鼠免疫试验其血清中抗gp12 0抗体A值和脾脏CD4+ /CD8+ T淋巴细胞比值均高于对照组 (P <0 .0 1) ,说明由重组病毒表达的Env蛋白和Gp12 0蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。
- 金宁一方厚华郭志儒罗坤古长庆殷震邵一鸣王虹
- 关键词：HIV-1ENV基因基因表达FPV
- 野生、园栽月见草中营养元素的比较分析被引量：2
- 1998年
- 采用荧光法和AAS法测定野生、园栽月见草和根下土壤中10种营养元素，其含量各异，且因部位不同而异；所测元素加和量，野生：叶＞茎＞种子＞花＞种子壳＞根；园栽：种子＞叶＞种子壳＞花＞根＞茎；部位加和量均值，野生高于园栽月见草，并与土壤背景值相关。
- 石毅张甲生罗坤何景芳
- 关键词：月见草营养元素野生中药
- 鸡痘病毒282E4株表达载体的构建及新城疫病毒F蛋白的表达被引量：19
- 2000年
- 将鸡痘病毒 2 82 E4株 TK基因和 1 .5kb B片段 2个非必需区克隆后 ,分别在 TK基因 Nco 位点和 B片段 Eco R 位点插入复合启动子 (由牛痘病毒 A型包涵体启动子和 2 0个串联的痘苗病毒 ( VV)突变型 p7.5早期启动子串联组成 ) ,然后在复合启动子上游插入单一启动子 (人工合成的由 1 6个串联的 VV突变型p7.5早期启动子组成 )调控的 Lac Z基因或 GFP基因作为报告基因 ,构建成分别以 TK基因或 B片段为侧翼、以复合启动子调控目的基因的 2个以 Lac Z为报告基因的表达载体 p UTA-2 -1 6Lac Z和 p UBA-7-1 6Lac Z,2个以 GFP为报告基因的表达载体 p UTA-2 -F71 6和 p UBA-7-F71 6。在 TK基因 Nco 位点和 B片段 Eco R 位点插入单一启动子和单一启动子调控的 Lac Z基因 ,得到 2个分别以 TK基因或 B片段为侧翼、以单一启动子调控目的基因、以 Lac Z为报告基因的表达载体 p UT1 61 6Lac Z和 p UB1 61 6Lac Z。将构建的 6个表达载体分别转染 FPV HIPRA株感染的鸡胚成纤维 ( CEF)细胞 ,仅在转染以 TK基因为侧翼、以 Lac Z为报告基因的 2个表达载体 p UTA-2 -1 6Lac Z和 p UT1 61 6Lac Z收获的病毒中 ,在 X-gal存在下 ,筛选出了表达 Lac Z的蓝色重组病毒蚀斑 ,而转染以 B片段为侧翼的表达载体在同样条件下未筛选到蓝色病?
- 郭志儒金宁一王兴龙金扩世丁壮罗坤方厚华李萍殷震
- 关键词：新城疫病毒F蛋白
