王莉馨
- 作品数：14 被引量：35H指数：3
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- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人bFGF基因克隆表达及表达产物的纯化和生物学活性分析被引量：3
- 1999年
- 目的：通过融合蛋白表达方式将编码人碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）ｃＤＮＡ在大肠杆菌ＤＨ５α中的表达，为ｂＦＧＦ进一步研究提供材料来源。方法：用多聚酶链反应（ＰＣＲ）及ＤＮＡ重组技术将ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－５Ｚ载体并测序，然后克隆到表达载体ｐＸＨ上。结果：转化重组质粒ｐＬＸ１的大肠杆菌经４２℃温控诱导４５ｈ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示融合蛋白的分子量约３５０００，薄层扫描分析表明该蛋白占菌体总蛋白量的９９％。经ＦａｃｔｏｒＸａ酶切后得到分子量约为１７０００的ｂＦＧＦ，其生物学活性ＥＤ５０为２２９ｎｇ／ｍｌ。结论：经ＰＣＲ方法扩增的ｂＦＧＦ可在大肠杆菌中高效表达。
- 王莉馨李永勇张娅捷范洪学张金三林剑
- 关键词：BFGF基因克隆纯化
- 骨髓CFU-F体内、体外成骨功能研究
- 2001年
- 目的：研究骨髓基质成纤维细胞与成骨的关系，为临床应用奠定基础。方法：采用Ｌｉｕｒｉａ多器官培养器体外器官培养法、肾被膜下移植技术以及石蜡切片技术、Ｇｏｍｏｒｉ染色和Ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ染色技术。结果：移植物在肾被膜下形成软骨细胞团及骨基质；在β－ＧＰ存在下，骨髓基质ＣＦＵ－Ｆ体外培养可见形成钙化的骨板。结论：骨髓基质ＣＦＵ－Ｆ为基质多能干细胞，能增生分化为成骨以及造血诱导微环境所必需的各种基质细胞系。
- 刘雅娟王莉馨林军于洪臣范洪学
- 关键词：骨髓体内成骨体外成骨
- 提高bFGF基因表达水平的策略及其表达产物的纯化工艺被引量：1
- 2001年
- 目的 :通过在同一个表达载体pLX1上调整SD序列和ATG之间距离 ,以提高bFGF目的蛋白表达量。方法 :以Klenow和MungBeanNuclease通过增加 2个及减少 2个碱基调整SD序列和ATG之间距离 ,SDS PAGE和Westernblot检测目的蛋白表达量 ,以高压液相疏水层析、凝胶过滤及肝素亲和层析纯化目的蛋白、MTT法进行活性测定。结果 :获得了重组质粒pLX2 ,pLX3 ,诱导后与表达质粒pLX1( 7.78% )相比 ,表达量分别为 8.0 3 % ,9.9% ,经纯化后获得的bFGF纯度达 98% ,ED50 为 2 .2 9ng/ml。结论 :调整SD序列和ATG之间距离可以增加目的基因的剂量 。
- 王莉馨刘雅娟林剑范洪学金宁一
- 关键词：BFGFATGSD序列基因表达纯化碱性成纤维细胞因子
- 小鼠骨髓基质成纤维细胞与成骨关系的实验研究
- 2001年
- 目的 :研究骨髓基质成纤维细胞与成骨的关系。方法 :Luria多器官培养器体外器官培养法、肾被膜下移植技术以及石蜡切片技术。结果 :移植物在移植处形成软骨细胞团及骨基质。结论 :骨髓基质成纤维细胞集落形成细胞 ( CFU-F)为基质多能干细胞 。
- 王莉馨刘雅娟熊文林军于洪臣范洪学于志刚
- 关键词：骨髓体内成骨小鼠
- 中国流行株HIV-1gag和hIL-2/hIL-6核酸疫苗构建与实验免疫研究被引量：8
- 2001年
- 目的探讨中国流行株 HIV- 1gag与 h IL - 2 /h IL - 6共表达重组核酸疫苗质粒的免疫效果。方法以核酸疫苗质粒 p IRES1neo为表达载体 ,构建重组核酸疫苗质粒 p IRES1- gag、p IRES1- gag- h IL- 2、p IRES1- gag- h IL- 6 ,通过间接免疫荧光试验、Dot- EL ISA检测 gag/h IL - 2 /h IL - 6基因的表达产物。另将此重组核酸疫苗质粒免疫 Balb/c小鼠 ,进行淋巴细胞转化试验、CD4+ 、CD8+ T淋巴细胞数量测定、细胞毒性 T淋巴细胞 (CTL )特异性杀伤作用检测及血清抗体检测 ,结果构建的重组质粒转染 BHK细胞后可表达目的基因 ,免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖、诱导特异性 CTL 反应 ,当和 h IL- 2 /h IL- 6共表达时免疫效果更加显著。讨论与 Gag蛋白共表达的 h IL- 2 /h IL- 6能够进一步增强免疫鼠的细胞免疫与体液免疫水平 ,构建的重组质粒为 HIV-
- 秦云龙金宁一罗坤李凡王宏伟王莉馨张永生殷震
- 关键词：HIV-1GAG蛋白白细胞介素-2
- HIV-1中国流行株gp120基因在痘苗病毒中的表达及其与核酸疫苗的实验免疫研究被引量：1
- 2001年
- 将HIV 1中国流行株 gp12 0基因在痘苗病毒中进行表达 ,以期获得重组痘苗病毒 ,与核酸疫苗混合免疫 ,评价免疫效果 ,为艾滋病疫苗开发研制打下基础。将HIV 1中国流行株 gp12 0基因片段插入到 pJ38载体启动子下游 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒 ,SDS PAGE、Westernblot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫BALB/c小鼠 ,进行淋巴细胞转化实验、CTL、CD4 +、CD8+T细胞数目及血清抗体等细胞免疫和体液免疫指标检测。结果获得的重组痘苗病毒vJ38gp12 0能够表达Gp12 0蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫 ,具有良好的免疫原性 ,其免疫效果以 2rVV DNA混合方式为最好。重组痘苗病毒vJ38gp12
- 王莉馨金宁一罗坤秦云龙王宏伟郭志儒殷震
- 关键词：HIV-1痘苗病毒DNA疫苗
- HIV-1 gag-gp120嵌合基因重组杆状病毒载体的构建被引量：1
- 2001年
- 目的 :构建含有 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体。方法 :利用基因重组技术将 B亚型中国株 HIV- 1的结构基因 gag与 gp12 0嵌合后再通过大肠杆菌 /杆状病毒系统构建重组杆状病毒载体。结果 :酶切电泳显示基因重组正确 ,电镜显示重组杆状病毒大量扩增。结论 :含有B亚型 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体构建成功 ,为进一步研究Gag- gp12 0嵌合蛋白的表达及其生物学活性奠定了基础。
- 张东威金宁一王宏伟张应玖王莉馨罗坤李萍于洪臣殷震
- 关键词：嵌合基因基因重组杆状病毒
- HIV-1中国流行株gag-hIL-2重组痘苗病毒与pIRES-gag-hIL-2核酸疫苗联合免疫的实验研究被引量：1
- 2002年
- 目的 将HIV 1中国流行株B亚型gag和hIL 2基因在天坛株痘苗病毒中进行共表达 ,与核酸疫苗联合免疫 ,评价免疫效果 ,为新型艾滋病疫苗开发研制奠定基础。方法 将HIV 1中国流行株gag hIL 2基因片段插入到痘苗病毒载体pJ38启动子下游 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒 ,SDS PAGE、Westernblot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫BALB c小鼠 ,进行淋巴细胞转化实验及血清抗体的细胞免疫和体液免疫指标检测。结果 获得了重组痘苗病毒vJ38gag IL 2 ,具有更好的免疫原性 ,3rVV效果好于 2rVV ,以 2rVV DNA混合免疫效果最好。结论 重组痘苗病毒vJ38gag IL
- 王莉馨林军王宏伟王洪军金宁一
- 关键词：联合免疫HIV-1HIL-2核酸疫苗
- 利用中国流行株HIV-1 Gag重组痘苗病毒与核酸疫苗免疫的新程序被引量：1
- 2001年
- 目的 将中国流行株ＨＩＶ－１ Ｇａｇ基因在痘苗病毒中表达，以重组痘苗病毒与核酸疫苗混合免疫，进 而研制艾滋病疫苗。方法 将中国流行株ＨＩＶ－１ Ｇａｇ基因片段插入到ｐＪ３８载体启动子下游，经同源重组和血凝素 阴性空斑筛选重组痘苗病毒，经 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和 Ｗｅｓｔｅｒｎ检测目的蛋白。以重组痘苗病毒与核酸疫苗进行小鼠免 疫试验，淋巴细胞转化实验，ＣＩＬ，ＣＤ＋４；ＣＤ＋８细胞计数及细胞免疫和体液免疫水平检测。结果 重组痘苗病毒ｖＪ３８ Ｇａｇ具有良好的免疫原性，与２ｒＶＶ－ＤＮＡ混合免疫效果更好。结论 重组痘苗病毒 ｖＪ３８ Ｇａｇ能够表达Ｇａｇ蛋白并诱 导机体产生细胞免疫和体液免疫。
- 金宁一王莉馨罗坤秦云龙王宏伟张应玖李萍
- 关键词：HIV-1痘苗病毒GAG蛋白
- 中国流行株HIV-1Gag与IFN-α2b重组质粒的构建与实验免疫研究
- 2001年
- 目的探讨中国流行株 ＨＩＶ－ １Ｇａｇ与 ＩＦＮ－ α２ｂ共表达重组核酸疫苗质粒的免疫效果。方法以 核酸疫苗质粒ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ为表达载体，构建重组核酸疫苗质粒ｐＩＲＥＳ１－Ｇａｇ、ｐＩＲＥＳ１－Ｇａｇ－ＩＦＮ，通过间接免疫荧光 试验、ＤｏｔＥＬＩＳＡ检测Ｃａｇ／ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－６基因的表达产物。另将此重组核酸疫苗质粒免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，进行淋巴细 胞转化试验、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞数量测定、细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）特异性杀伤作用检测及血清抗体检测。 结果构建的重组质粒转染ＢＨＫ细胞后可表达目的基因，免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖，诱导特异性 ＣＴＬ反应，当和 ＩＦＮ－α２ｂ共表达时免疫效果更加显著。结论与 Ｇａｇ蛋白共表达的 ＩＦＮ－ａ２ｂ能够进一步提高细胞 免疫与体液免疫水平，构建的重组质粒为ＨＩＶ－１ＤＮＡ疫苗的研究奠定了一定实验基础。
- 秦云龙金宁一罗坤王莉馨王宏伟张永生邵一鸣殷震
- 关键词：HIV-1GAG干扰素Α2B实验免疫研究
