韩乃君
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：吉林大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的构建狂犬病病毒(Rabies virus,RV)SRV9株糖蛋白(Glycoprotein)基因的重组伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus,PRV),并进行鉴定。方法将SRV9株糖蛋白基因表达盒和报告基因Lac Z表达盒克隆至转移载体p8AA中,构建转移质粒p8AA-LacZ-G,与PRV Bartha-K61株基因组共转染BHK-21细胞,待细胞发生病变后,收集病毒液,进行多轮蓝色噬斑筛选,获得重组病毒rPRV-LacZ-G,对其进行电镜观察、PCR及Western blot鉴定,并测定重组病毒的滴度。结果酶切及测序鉴定证实,转移质粒p8AA-LacZ-G构建正确;电镜观察显示,重组病毒rPRV-LacZ-G呈典型的PRV特征结构;PCR分析显示可见RV 1 790 bp的特异性条带;Western blot显示,重组病毒可与SRV9株糖蛋白单抗发生反应,形成特异条带;经测定,重组病毒的滴度为106.25TCID50/ml,较Bartha-K61亲本株的滴度(107TCID50/ml)下降。结论成功构建了RV SRV9株糖蛋白基因重组PRV rPRV-LacZ-G,为其应用于兽用狂犬病疫苗的开发奠定了基础。
- 李业伟杨洋刘晔王景龙孙程龙韩乃君刘祥义扈荣良
- 关键词：伪狂犬病病毒狂犬病病毒同源重组LAC
- 表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究被引量：4
- 2011年
- [目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得On-derstepoort株H基因,插入pcDNA3.1(+)建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Western blot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下了基础。
- 李业伟孙程龙韩乃君王颖扈荣良
- 关键词：伪狂犬病毒犬瘟热病毒H基因病毒载体
- 表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究(英文)被引量：3
- 2011年
- [目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得Onderstepoort株H基因,插入pcDNA3.1(+)建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Westernblot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下基础。
- 李业伟孙程龙韩乃君王颖扈荣良
- 关键词：伪狂犬病毒犬瘟热病毒H基因病毒载体
- 狂犬病病毒糖蛋白的犬2型腺病毒活载体重组疫苗安全评价被引量：2
- 2008年
- 本试验用狂犬病病毒糖蛋白-犬2型腺病毒重组疫苗口服或注射免疫500条受试犬,免疫一次,采样测定其遗传稳定性、在免疫犬体内的分布、存留时间、排泄规律、高剂量接种对免疫犬的影响,检测疫苗生产人员、试验人员以及试验区周围动物体内犬腺病毒特异性抗体以及免疫犬体内诱导产生的抗体水平和消长规律,监测试验区域外源基因存留情况。通过以上方法来评价重组疫苗环境释放阶段的安全性。结果表明,重组疫苗体外传代79次、体内传代11次后,核酸序列和生物特性未发生改变。重组病毒在免疫犬大肠和小肠短暂存留,在犬粪便中短期存在。高倍剂量免疫受试犬无急性、亚急性和慢性毒性作用,无致畸作用,子代犬均发育正常。重组疫苗生产人员和试验人员体内未检测出犬腺病毒特异性抗体;检测试验区周围除个别犬由于自然感染犬腺病毒野毒株而带有低水平的犬腺病毒抗体(但无狂犬病抗体),其余动物均无犬腺病毒抗体。诱导的抗体平均水平在国际最低保护水平(0.5IU/ml)以上,抗体持续时间至少为54周。试验表明重组疫苗以口服和注射两种途径免疫,均具有较高的安全性和较好的免疫效果。
- 韩乃君刘晔扈荣良张乐萃
- 关键词：重组疫苗环境释放免疫研究
- 转座子介导的伪狂犬病毒重组狂犬病疫苗构建与免疫研究
- 狂犬病（Rabies）是由狂犬病毒(Rabiesvirus)引起的，一种侵害中枢神经系统的传染病。狂犬病病毒属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）中的狂犬病毒属（Lyssavirus）。狂犬病流行已经有三千年历史，...
- 韩乃君
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白口服疫苗
- 文献传递
- Tn5转座子介导表达猪瘟E2蛋白和EGFP重组伪狂犬病毒的构建被引量：2
- 2011年
- 为构建猪瘟重组伪狂犬疫苗,以Tn5转座子为介导,采用体外转座的方法将猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresce protein,EGFP)的表达盒随机插入伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)基因组中,随后将转座产物转染BHK-21细胞,获得表达E2蛋白和EGFP的病毒库,并对E2蛋白和EGFP在细胞上的表达效果进行PCR鉴定和间接免疫荧光分析。试验结果表明,运用体外转座的方法可以将外源基因插入PRV基因组中,并且外源基因可以在细胞中表达。本研究为重组病毒的研究提供了新思路,并为新型重组猪瘟疫苗的研制进一步奠定了基础。
- 高博范志强韩乃君张念张锦霞王颖白安斌黄红梅扈荣良吴健敏
- 关键词：猪瘟病毒E2基因伪狂犬病毒
- 表达狂犬病病毒糖蛋白的犬2型腺病毒活载体重组疫苗安全评价及免疫效力研究
- 本研究评价了本实验室已构建的狂犬病病毒糖蛋白-犬2型腺病毒重组疫苗(以下简称CAV2-E3△-CGS)在环境释放阶段的生物安全性，进行了生产性试验阶段3000条犬的免疫效力研究。
实验一狂犬病病毒糖蛋白-犬2型...
- 韩乃君
- 关键词：狂犬病病毒免疫效力转基因生物安全
- 文献传递
