李业伟
- 作品数：7 被引量：15H指数：3
- 供职机构：吉林大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究(英文)被引量：3
- 2011年
- [目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得Onderstepoort株H基因,插入pcDNA3.1(+)建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Westernblot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下基础。
- 李业伟孙程龙韩乃君王颖扈荣良
- 关键词：伪狂犬病毒犬瘟热病毒H基因病毒载体
- 基于Xcm I酶切的pUC19-T载体的构建被引量：3
- 2011年
- [目的]构建以pUC19质粒为基础可利用XcmI内切酶制备的T载体。[方法]化学合成2条含有双XcmI酶切位点的互补寡聚核苷酸链,经过变性、复性后克隆入pUC19质粒的HindIII和BamHI位点之间,通过XcmI酶切后得到一个线性化的带有3'末端突出一个T碱基的T载体。[结果]经TA克隆验证,制备的pUC19-HB-T载体对PCR产物的克隆率达到95%以上。[结论]构建的pUC19-HB-T载体可用于PCR产物的克隆、测序及后续分子生物学操作。
- 孙程龙李业伟王颖宫婷扈荣良
- 关键词：T载体TA克隆
- 狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的构建狂犬病病毒(Rabies virus,RV)SRV9株糖蛋白(Glycoprotein)基因的重组伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus,PRV),并进行鉴定。方法将SRV9株糖蛋白基因表达盒和报告基因Lac Z表达盒克隆至转移载体p8AA中,构建转移质粒p8AA-LacZ-G,与PRV Bartha-K61株基因组共转染BHK-21细胞,待细胞发生病变后,收集病毒液,进行多轮蓝色噬斑筛选,获得重组病毒rPRV-LacZ-G,对其进行电镜观察、PCR及Western blot鉴定,并测定重组病毒的滴度。结果酶切及测序鉴定证实,转移质粒p8AA-LacZ-G构建正确;电镜观察显示,重组病毒rPRV-LacZ-G呈典型的PRV特征结构;PCR分析显示可见RV 1 790 bp的特异性条带;Western blot显示,重组病毒可与SRV9株糖蛋白单抗发生反应,形成特异条带;经测定,重组病毒的滴度为106.25TCID50/ml,较Bartha-K61亲本株的滴度(107TCID50/ml)下降。结论成功构建了RV SRV9株糖蛋白基因重组PRV rPRV-LacZ-G,为其应用于兽用狂犬病疫苗的开发奠定了基础。
- 李业伟杨洋刘晔王景龙孙程龙韩乃君刘祥义扈荣良
- 关键词：伪狂犬病病毒狂犬病病毒同源重组LAC
- 猪瘟病毒E2蛋白基因重组人5型腺病毒的构建及鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2蛋白基因重组人5型腺病毒,并进行鉴定。方法通过巢式PCR从猪瘟活疫苗中扩增CSFV E2全基因序列,克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA的多克隆位点处,构建重组穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA-E2,将其线性化后与骨架质粒pacAd5 9.2-100共转染293AD细胞,进行重组腺病毒的包装。细胞完全病变后,采用RT-PCR法检测E2基因mRNA的转录;细胞病变法检测病毒滴度;连续传代后检测病毒的稳定性;Western blot法检测E2蛋白的表达;以105.82TCID50重组腺病毒经腹腔免疫小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清猪瘟抗体效价。结果重组穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA-E2经双酶切及测序证明构建正确;重组腺病毒rAd5v-MxE2转染的293AD细胞可检测到E2基因的转录和蛋白的表达;重组腺病毒的滴度为105.82TCID50/ml;第5、30代重组腺病毒均可扩增出目的基因条带,病毒滴度无明显变化;重组腺病毒免疫小鼠后,可产生CSFV抗体。结论成功构建了CSFV E2基因重组人5型腺病毒,其免疫原性良好,为进一步研制猪瘟基因工程疫苗奠定了基础。
- 杨洋高博宫婷李业伟孙程龙张守峰刘晔扈荣良
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白腺病毒免疫原性
- 表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究被引量：4
- 2011年
- [目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得On-derstepoort株H基因,插入pcDNA3.1(+)建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Western blot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下了基础。
- 李业伟孙程龙韩乃君王颖扈荣良
- 关键词：伪狂犬病毒犬瘟热病毒H基因病毒载体
- 表达狂犬病病毒糖蛋白重组伪狂犬病毒的构建及免疫原性研究
- 狂犬病由狂犬病病毒引起，是一种带有神经症状的疾病，临床上主要导致脑脊髓炎。机体主要通过破损的皮肤或粘膜感染这一病毒，后经神经末梢进入中枢神经，最终机体死于脑脊髓炎。 作为一种动物疫源性疾病，数千年来，狂犬病给人类的安全造...
- 李业伟
- 关键词：伪狂犬病毒狂犬病病毒
- 文献传递
- 一种基于Xcm Ⅰ酶切的pUC19-T载体的构建(摘要)(英文)
- 2011年
- [目的]构建以pUC19质粒为基础可利用XcmⅠ内切酶制备的T载体。[方法]化学合成2条含有双XcmI酶切位点的互补寡聚核苷酸链,经过变性、复性后克隆入pUC19质粒的HindⅢ和BamHⅠ位点之间,通过XcmI酶切后得到一个线性化的带有3末端突出一个T碱基的T载体。[结果]经TA克隆验证,制备的pUC19-HB-T载体对PCR产物的克隆率达到95%以上。[结论]所构建的pUC19-HB-T载体可用于PCR产物的克隆、测序及后续分子生物学操作。
- 孙程龙李业伟王颖宫婷扈荣良
- 关键词：T载体TA克隆
