李道静
- 作品数：8 被引量：31H指数：3
- 供职机构：安徽医科大学附属省立医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽省人才开发资金资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 二氢叶酸还原酶与肿瘤耐药被引量：2
- 2010年
- 二氢叶酸还原酶是核酸代谢中的关键酶之一,是肿瘤化疗药物的主要靶酶。随着人们对其在基因水平研究的逐渐深入,发现氨甲蝶呤的靶酶二氢叶酸还原酶是引起耐药的主要原因。本文就二氢叶酸还原酶结构、功能及其与肿瘤耐药关系作一综述,并探讨其在临床的应用前景和意义。
- 李道静沈佐君
- 关键词：二氢叶酸还原酶肿瘤氨甲蝶呤抗药性
- 柱上样本堆积毛细管电泳法同时检测细胞内氨甲蝶呤及其六种代谢产物被引量：1
- 2011年
- 目的建立柱上堆积高效毛细管电泳法同时检测细胞内氨甲蝶呤(MTX)及其6种代谢产物氨甲蝶呤多聚谷氨酸链(MTXPG)的方法。方法采用高效毛细管电泳技术,以75 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH值7.40)作为分离介质,用水和乙腈(V/V=1∶1)作溶剂重组残留样本的方法进行柱上样本堆积,0.5 psi压力进样,进样时间50 s,在分离电压28 kV、检测波长300 nm条件下对MTX和MTXPG进行分离。在此基础上,检测细胞内MTX及其代谢产物MTXPG的含量。结果通过不断改变分离缓冲液中异丙醇(5%、8%、10%,V/V)和羟丙基-β-环糊精(hp-β-CD)浓度(20、25、30 mmol/L),发现在含8%异丙醇、25 mmol/L hp-β-CD的缓冲液条件下,30 min内实现7种组分的完全分离。用水和乙腈(V/V=1∶1)作溶剂重组残留样本进行柱上样本堆积的方法可使检测灵敏度提高10倍。结论建立柱上样本堆积高效毛细管电泳法可同时检测细胞内MTX及其代谢产物MTXPG。该方法具有高效、快速、简便、高灵敏度的特点。
- 李道静何晓东李明孙利许维东沈佐君
- 关键词：氨甲蝶呤毛细管电泳法
- Luminex液相芯片技术测定氨甲喋呤对映体耐药A549细胞株中磷酸化酪氨酸激酶受体被引量：3
- 2011年
- 目的探讨氨甲喋呤(MTX)对映体诱导的耐药A549细胞株中磷酸化酪氨酸激酶受体(RTKs)的表达差异及受体间的相关性。方法用MTX对映体浓度递增结合低剂量持续诱导肺腺癌A549细胞株,用Luminex液相芯片技术检测L-(+)-MTX/A549细胞、D-(-)-MTX/A549细胞和亲本A549细胞3组细胞中7种磷酸化RTKs[磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)、磷酸化胰岛素样生长因子1受体(p-IGF-1R)、磷酸化肝细胞生长因子受体(p-HGFR)、磷酸化血小板源性生长因子受体(p-PDGFRβ)、磷酸化人类表皮生长因子受体2(p-HER-2)、磷酸化血管内皮生长因子受体2(p-VEGFR2)、磷酸化血管生成素受体(p-Tie-2)]的表达水平,分析它们之间的相关性。结果 D-(-)-MTX/A549组p-EGFR、p-HER-2的平均荧光强度(MFI)分别为26.91±1.81、16.56±1.15;L-(+)-MTX/A549组的MFI分别为54.13±2.75、16.94±1.44;亲本细胞组的MFI分别为54.38±2.88、33.75±2.49。p-EGFR与p-HER-2显著相关(P<0.05),p-HER-2和p-VEGFR、p-HGFR之间显著相关(P<0.05),其他磷酸化RTKs之间相关关系不显著。结论 MTX对映体诱导的耐药A549细胞株中,p-EGFR表达水平存在手性差异。
- 许维东何晓东孙利李道静张永娟张白银沈佐君
- 关键词：氨甲蝶呤A549细胞对映体酪氨酸激酶受体液相芯片
- 氨甲蝶呤对映体耐药A549细胞株中叶酰聚谷氨酸合成酶mRNA和蛋白表达被引量：1
- 2011年
- 目的探讨叶酰聚谷氨酸合成酶(FPGS)在氨甲蝶呤(MTX)对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药A549细胞株中的表达。方法通过FQ-PCR和Western blot法分别测定肺癌A549细胞株和15μmol/L L-(+)-MTX和D-(-)-MTX两种耐药A549细胞株中FPGS mRNA和蛋白表达。结果 L-(+)-MTX、D-(-)-MTX耐药细胞株中FPGS基因表达的mRNA相对含量分别为肺癌A549细胞株的(0.80±0.09)倍和(2.04±0.34)倍,两组间差异具有统计学意义(P<0.05);L-(+)-MTX、D-(-)-MTX耐药细胞株中FPGS的蛋白表达含量分别为对照组肺癌A549细胞株的(0.85±0.12)倍和(1.62±0.24)倍,两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 MTX诱导耐药后细胞株中FPGS mRNA和蛋白均发生变化,且在两种对映体细胞株间具有手性差异。
- 孙利沈佐君何晓东孙余婕许维东李道静张白银张永娟
- 关键词：氨甲蝶呤
- 氨甲蝶呤对映体耐药A549细胞株二氢叶酸还原酶的基因与蛋白水平表达分析
- 目的:研究MTX对映体(L-(+)-MTX和D-(–)-MTX)耐药与二氢叶酸还原酶(DHFR)基因水平表达的关系。 方法:采用浓度递增结合低剂量持续诱导方法获得不同构型及不同浓度的MTX对映体对A549细胞的耐药细胞株...
- 李道静
- 关键词：二氢叶酸还原酶氨甲蝶呤耐药A549细胞
- 氨甲蝶呤对映体获得性耐药A549细胞株二氢叶酸还原酶基因表达分析被引量：5
- 2011年
- 目的研究氨甲蝶呤(MTX)对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药与二氢叶酸还原酶(DHFR)基因表达的关系。方法用浓度递增结合低剂量持续诱导法获得A549细胞对不同构型及不同浓度的MTX对映体的耐药细胞株,荧光定量PCR检测耐药细胞株中DHFR基因的相对含量。结果对两种不同对映体的获得性耐药存在差异,D型耐药细胞耐药指数高于L型;对映体各浓度耐药细胞间耐药指数也有差异。15μmol/L L型、D型MTX首次诱导耐药细胞的DHFR相对含量低于亲本细胞,对该浓度对映体耐药的各细胞组间没有差别(P>0.05)。35～45μmol/L浓度耐药细胞的DHFR相对含量增加,45μmol/L D型耐药细胞DHFR相对含量高于对应浓度L型耐药细胞,差异有显著性(P<0.05)。结论首次诱导MTX耐药以抑制DHFR基因为主。DHFR基因表达具有手性差异。DHFR基因的检测有望作为肿瘤治疗监测的指标。
- 李道静何晓东孙余婕凡任芝许维东孙利张永娟张白银沈佐君
- 关键词：二氢叶酸还原酶氨甲蝶呤对映体耐药
- 淫羊藿苷逆转耐甲氨蝶呤肺癌A549细胞转移表型被引量：17
- 2009年
- 目的:研究中药淫羊藿苷(icariin,ICA)作用甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)耐药肺癌A549细胞后对细胞转移表型的影响,初步探讨ICA逆转A549/MTX耐药细胞转移表型的作用机制及对肺癌的治疗价值。方法:采用MTT法检测ICA对A549/MTX耐药细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)。采用双层软琼脂克隆形成实验检测A549/MTX组和A549/MTX+ICA组细胞的克隆形成率,并观察其集落形态。细胞划痕实验检测A549/MTX组和A549/MTX+ICA组细胞的迁移能力。Transwell小室实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:MTT结果显示,无毒剂量的ICA与MTX联合应用后A549/MTX细胞的IC50值为35.50±1.85μmol/L,比单独应用MTX(同等剂量)后A549/MTX细胞的IC50值(52.17±2.25μmol/L)有了一定程度的下降。软琼脂实验发现,A549/MTX+ICA组细胞克隆形成率为0.94±0.09,小于A549/MTX组细胞的1.56±1.07(P<0.05)。划痕实验显示,72 h后A549/MTX组细胞的迁移能力大于A549/MTX+ICA组细胞(P<0.05)。Transwell实验显示,A549/MTX组细胞的穿膜细胞数明显多于A549/MTX+ICA组细胞(P<0.05),说明A549/MTX+ICA组细胞的侵袭浸润能力小于A549/MTX组细胞。结论:中药ICA具有逆转A549/MTX耐药细胞转移表型的作用。
- 吴剑锋何晓东许卫东李道静孙利沈佐君
- 关键词：淫羊藿苷甲氨蝶呤肿瘤转移
- 实时荧光定量PCR法检测MTX对映体耐药A549细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGSmRNA的表达被引量：3
- 2011年
- 目的建立实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞中FPGSmRNA表达的方法，研究MTX对映体[L-（＋）-MTX和D-（-）-MTX]耐药细胞株中FPGS的基因表达差异，并用于观察白血病患者MTX治疗耐药前后FPGSmRNA表达水平的变化。方法用SYBRGreenI为荧光染料，以β—actin作参照，建立检测FPGSmRNA的实时荧光定量PCR方法。根据Ct值、标准曲线相关系数、斜率、重复性曲线、熔解曲线、扩增效率曲线等进行方法学评价。并用该方法检测MTX对映体耐药细胞株及应用MTX耐药的14例白血病患者骨髓细胞中FPGSmRNA的表达。结果建立的标准曲线ct值与模板浓度有良好的线性关系，FPGS和β-actin标准曲线相关系数分别为0．9968和0．9987，斜率分别为-3．595和-3．740，批内CV为1．27％-2．95％，批间CV为3．82％；熔解曲线均呈单个特异峰，扩增效率相似（斜率为0．0217）；L．（＋）-MTX耐药细胞和D．（-）-MTX耐药细胞中FPGSmRNA相对含量分别为（3．51±0．66）和（0．16±0．01），A549亲本细胞（S）中FPGSmRNA相对含量为（1．00±0．31），差异有统计学意义（F=64．45，P〈0．01）；L-（＋）-MTX耐药细胞和D．（-）-MTX耐药细胞间FPGSmRNA相对含量差异有统计学意义（q=9．29，P〈0．01）。白血病患者应用MTX治疗耐药后，FPGSmRNA表达水平为（0．35±0．04），用药前为（1．00±0．44），差异有统计学意义（t=8．83，P〈0．01）。结论建立的实时荧光定量PCR检测FPGSmRNA的方法重复性好、特异度高，可用于FPGSmRNA含量分析。MTX诱导耐药后细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGSmRNA表达发生了变化，MTX2种对映体形式在细胞耐药机制中可能发挥了不同的作用。
- 孙利何晓东孙余婕许维东李道静张白银张永娟刘锐沈佐君
- 关键词：白血病
