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叶酰聚谷氨酸合成酶在氨甲蝶呤对映体耐药A549细胞株中的表达及临床应用: 目的:探讨叶酰聚谷氨酸合成酶(FPGS)在氨甲蝶呤(MTX)对映体(L-(+)-MTX和D-(-)-MTX)耐药A549细胞株中的表达,并应用于临床病例。　　方法:用SYBR Green I为荧光染料,以β-actin作...; 孙利; 关键词：氨甲蝶呤对映体肺癌细胞株; 文献传递

叶酰多聚谷氨酸合成酶与肿瘤耐药被引量：2: 2010年; 叶酰多聚谷氨酸合成酶(folyl-polyglutamate synthetase,FPGS)是近几年来研究比较多的肿瘤耐药靶酶之一。随着人们对其在基因组学和蛋白组学研究的逐渐深入,涉及FPGS(分胞浆型cFPGS和线粒体型mFPGS两种异构体)与肿瘤耐药的研究也越来越多。本文就FPGS结构、功能、生化特点及其与肿瘤耐药关系作一综述,并探讨其在临床的应用前景和意义。; 孙利沈佐君; 关键词：肿瘤抗药性

康复理疗联合盆底肌锻炼治疗产后早期压力性尿失禁的疗效观察: 目的：　　研究患者产后早期压力性尿失禁使用康复理疗联合盆底肌锻炼治疗的临床效果。　　方法：　　选取100例我院2013.1-2015.1期间收治的产后早期压力性尿失禁的患者，将所有患者随机分为两组，每组各50例，其中50...; 孙利; 关键词：康复理疗产后压力性尿失禁盆底肌锻炼

柱上样本堆积毛细管电泳法同时检测细胞内氨甲蝶呤及其六种代谢产物被引量：1: 2011年; 目的建立柱上堆积高效毛细管电泳法同时检测细胞内氨甲蝶呤(MTX)及其6种代谢产物氨甲蝶呤多聚谷氨酸链(MTXPG)的方法。方法采用高效毛细管电泳技术,以75 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH值7.40)作为分离介质,用水和乙腈(V/V=1∶1)作溶剂重组残留样本的方法进行柱上样本堆积,0.5 psi压力进样,进样时间50 s,在分离电压28 kV、检测波长300 nm条件下对MTX和MTXPG进行分离。在此基础上,检测细胞内MTX及其代谢产物MTXPG的含量。结果通过不断改变分离缓冲液中异丙醇(5%、8%、10%,V/V)和羟丙基-β-环糊精(hp-β-CD)浓度(20、25、30 mmol/L),发现在含8%异丙醇、25 mmol/L hp-β-CD的缓冲液条件下,30 min内实现7种组分的完全分离。用水和乙腈(V/V=1∶1)作溶剂重组残留样本进行柱上样本堆积的方法可使检测灵敏度提高10倍。结论建立柱上样本堆积高效毛细管电泳法可同时检测细胞内MTX及其代谢产物MTXPG。该方法具有高效、快速、简便、高灵敏度的特点。; 李道静何晓东李明孙利许维东沈佐君; 关键词：氨甲蝶呤毛细管电泳法

氨甲蝶呤对映体获得性耐药A549细胞株二氢叶酸还原酶基因表达分析被引量：5: 2011年; 目的研究氨甲蝶呤(MTX)对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药与二氢叶酸还原酶(DHFR)基因表达的关系。方法用浓度递增结合低剂量持续诱导法获得A549细胞对不同构型及不同浓度的MTX对映体的耐药细胞株,荧光定量PCR检测耐药细胞株中DHFR基因的相对含量。结果对两种不同对映体的获得性耐药存在差异,D型耐药细胞耐药指数高于L型;对映体各浓度耐药细胞间耐药指数也有差异。15μmol/L L型、D型MTX首次诱导耐药细胞的DHFR相对含量低于亲本细胞,对该浓度对映体耐药的各细胞组间没有差别(P>0.05)。35～45μmol/L浓度耐药细胞的DHFR相对含量增加,45μmol/L D型耐药细胞DHFR相对含量高于对应浓度L型耐药细胞,差异有显著性(P<0.05)。结论首次诱导MTX耐药以抑制DHFR基因为主。DHFR基因表达具有手性差异。DHFR基因的检测有望作为肿瘤治疗监测的指标。; 李道静何晓东孙余婕凡任芝许维东孙利张永娟张白银沈佐君; 关键词：二氢叶酸还原酶氨甲蝶呤对映体耐药

叶酰聚谷氨酸合成酶基因在甲氨蝶呤对映体获得性耐药A549细胞株中的表达差异被引量：3: 2011年; 目的研究不同甲氨蝶呤（MTX）对映体耐药与叶酰聚谷氨酸合成酶（FPGS）基因水平表达的关系。方法用大剂量冲击递增结合低剂量持续诱导法诱导获得两组含不同构型15～55μmoL／L浓度的MTX对映体[L-（＋）-MTX和D-（-）-MTX]耐药的细胞系，细胞为人源非小细胞性肺癌A549细胞，用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各细胞系的耐药指数；用实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ—PCR）方法检测这两组各细胞系中胞质型FPGS（cFPGS）和线粒体型FPGS（mFPGS）基因的相对含量。结果D-（-）-MTX耐药细胞组耐药指数高于L-（＋）-MTX耐药细胞组（32．7±9．3比11．54-2．9，P〈0．05），L-（＋）-MTX／A549细胞系耐药指数均在5～15之间，为中度耐药，而D-（-）-MTX／A549细胞系耐药指数均〉15，为高度耐药。在D-（-）-MTX和L-（＋）-MTX两组耐药细胞系中，mFPGS表达水平仅在MTX为15μmol／L时差异无统计学意义，在MTX其他各浓度点两组间差异均有统计学意义（25μmol／L：2．3±0．9比1．3±0．7，35μmoL／L：2．6±0．3比1．1±0．9，45μmol／L：1．4±0．8比1．0±1．0，55μmoL／L；1．0±0．2比0．2±0．1均P〈0．05）；cFPGS表达水平在MTX为15μmol／L时两组间差异也同样无统计学意义，在25～55μmol／L浓度区间内D-（-）-MTX／A549细胞系的cFPGS表达与耐药指数呈现高度负相关（r=-0．95，P〈0．05）。结论在A549细胞中MTX对映体初次剂量15μmol／L冲击法诱导获得的对映体耐药与再次接受更大剂量（t〉25μmol／L）MTX诱导获得耐药的机制不同，D-（-）-MTX／A549耐药细胞系表现为更高的耐药性，提示临床使用MTX时应考虑该药物存在手性对映体问题。; 周红艳何晓东孙余婕凡任芝孙利沈佐君; 关键词：甲氨蝶呤对映体

淫羊藿苷逆转耐甲氨蝶呤肺癌A549细胞转移表型被引量：17: 2009年; 目的:研究中药淫羊藿苷(icariin,ICA)作用甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)耐药肺癌A549细胞后对细胞转移表型的影响,初步探讨ICA逆转A549/MTX耐药细胞转移表型的作用机制及对肺癌的治疗价值。方法:采用MTT法检测ICA对A549/MTX耐药细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)。采用双层软琼脂克隆形成实验检测A549/MTX组和A549/MTX+ICA组细胞的克隆形成率,并观察其集落形态。细胞划痕实验检测A549/MTX组和A549/MTX+ICA组细胞的迁移能力。Transwell小室实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:MTT结果显示,无毒剂量的ICA与MTX联合应用后A549/MTX细胞的IC50值为35.50±1.85μmol/L,比单独应用MTX(同等剂量)后A549/MTX细胞的IC50值(52.17±2.25μmol/L)有了一定程度的下降。软琼脂实验发现,A549/MTX+ICA组细胞克隆形成率为0.94±0.09,小于A549/MTX组细胞的1.56±1.07(P<0.05)。划痕实验显示,72 h后A549/MTX组细胞的迁移能力大于A549/MTX+ICA组细胞(P<0.05)。Transwell实验显示,A549/MTX组细胞的穿膜细胞数明显多于A549/MTX+ICA组细胞(P<0.05),说明A549/MTX+ICA组细胞的侵袭浸润能力小于A549/MTX组细胞。结论:中药ICA具有逆转A549/MTX耐药细胞转移表型的作用。; 吴剑锋何晓东许卫东李道静孙利沈佐君; 关键词：淫羊藿苷甲氨蝶呤肿瘤转移

氨甲蝶呤对映体耐药A549细胞株中叶酰聚谷氨酸合成酶mRNA和蛋白表达被引量：1: 2011年; 目的探讨叶酰聚谷氨酸合成酶(FPGS)在氨甲蝶呤(MTX)对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药A549细胞株中的表达。方法通过FQ-PCR和Western blot法分别测定肺癌A549细胞株和15μmol/L L-(+)-MTX和D-(-)-MTX两种耐药A549细胞株中FPGS mRNA和蛋白表达。结果 L-(+)-MTX、D-(-)-MTX耐药细胞株中FPGS基因表达的mRNA相对含量分别为肺癌A549细胞株的(0.80±0.09)倍和(2.04±0.34)倍,两组间差异具有统计学意义(P<0.05);L-(+)-MTX、D-(-)-MTX耐药细胞株中FPGS的蛋白表达含量分别为对照组肺癌A549细胞株的(0.85±0.12)倍和(1.62±0.24)倍,两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 MTX诱导耐药后细胞株中FPGS mRNA和蛋白均发生变化,且在两种对映体细胞株间具有手性差异。; 孙利沈佐君何晓东孙余婕许维东李道静张白银张永娟; 关键词：氨甲蝶呤

A549/MTX对映体耐药细胞的裸鼠荷瘤模型的建立被引量：1: 2009年; 目的利用L型和D型氨甲喋呤(MTX)对映体分别建立人肺腺癌A549细胞株裸鼠耐药模型,为进一步揭示MTX对映体体内活性差异的原因提供实验平台。方法裸鼠皮下分别接种A549、耐药细胞株A549/L-MTX、A549/D-MTX各6×106个/0.2ml,观察肿瘤生长特性;瘤体原代培养后四甲基偶氮唑兰(MTT)法检测耐药指数(resistance index RI);免疫组化(IHC)检测ki-67、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein1,MRP1)、survivin变化。结果从肿瘤生长曲线上看瘤体积三者差异有统计学意义(P<0.05),A549/L-MTX/nude组体积更小。A549/L-MTX/nude移植瘤RI为4.9,为低度耐药,A549/D-MTX/nude移植瘤RI为14.5,为中度耐药。A549/L-MTX/nude相关蛋白总体表达低于A549/D-MTX/nude,两者表达差异有统计学意义(P均<0.05)。结论成功建立对MTX两种对映体耐药的A549细胞株裸鼠肿瘤模型,且两种耐药细胞具有不同耐药特性,为研究MTX对映体体内抗肿瘤活性差异提供了较好的实验平台。; 朱园园沈佐君何晓东董林陶绍能李明吴剑锋孙利; 关键词：氨甲喋呤抗药性

Luminex液相芯片技术测定氨甲喋呤对映体耐药A549细胞株中磷酸化酪氨酸激酶受体被引量：3: 2011年; 目的探讨氨甲喋呤(MTX)对映体诱导的耐药A549细胞株中磷酸化酪氨酸激酶受体(RTKs)的表达差异及受体间的相关性。方法用MTX对映体浓度递增结合低剂量持续诱导肺腺癌A549细胞株,用Luminex液相芯片技术检测L-(+)-MTX/A549细胞、D-(-)-MTX/A549细胞和亲本A549细胞3组细胞中7种磷酸化RTKs[磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)、磷酸化胰岛素样生长因子1受体(p-IGF-1R)、磷酸化肝细胞生长因子受体(p-HGFR)、磷酸化血小板源性生长因子受体(p-PDGFRβ)、磷酸化人类表皮生长因子受体2(p-HER-2)、磷酸化血管内皮生长因子受体2(p-VEGFR2)、磷酸化血管生成素受体(p-Tie-2)]的表达水平,分析它们之间的相关性。结果 D-(-)-MTX/A549组p-EGFR、p-HER-2的平均荧光强度(MFI)分别为26.91±1.81、16.56±1.15;L-(+)-MTX/A549组的MFI分别为54.13±2.75、16.94±1.44;亲本细胞组的MFI分别为54.38±2.88、33.75±2.49。p-EGFR与p-HER-2显著相关(P<0.05),p-HER-2和p-VEGFR、p-HGFR之间显著相关(P<0.05),其他磷酸化RTKs之间相关关系不显著。结论 MTX对映体诱导的耐药A549细胞株中,p-EGFR表达水平存在手性差异。; 许维东何晓东孙利李道静张永娟张白银沈佐君; 关键词：氨甲蝶呤 A549细胞对映体酪氨酸激酶受体液相芯片

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孙利

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