何晓东
- 作品数：76 被引量：235H指数：9
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- 甲氨蝶呤耐药细胞内二氢叶酸还原酶纯化和手性分析
- 探讨对映体耐药细胞内甲氨蝶呤与其靶蛋白二氢叶酸还原酶作用的手性特征。本研究利用蛋白层析和毛细管电泳技术，建立一种简单快速的二氢叶酸还原酶与氨甲蝶呤对映体手性选择性的检测方案，用于蛋白质手性功能研究。结果显示甲氨蝶呤耐药细...
- 何晓东沈佐君
- 关键词：免疫检验甲氨蝶呤二氢叶酸还原酶
- 文献传递
- 氨甲蝶呤对映体在肿瘤细胞株A549中的不同生物效应
- 2004年
- 目的通过体外模拟静脉给药方式,研究氨甲蝶呤对映体(L-(+)-MTX和D-(-)-MTX)抗肿瘤细胞的生物活性差异及其机制。方法通过细胞培养,用苔盼蓝染色法观察MTX对映体对A549肺癌肿瘤细胞株的抑制效应,用高效毛细管电泳技术检测药物作用72小时后上清液中MTX对映体的残留量。结果A549细胞对两种对映体的吸收没有差别;L-(+)-MTX对细胞的抑制效果明显高于D-(-)-MTX,但当L-(+)-MTX浓度达70μM时,抑制效果反而降低。结论MTX对映体在A549细胞株中有不同的生物活性;细胞对药物的敏感性并不是浓度依赖性,在特别高浓度时可能存在负反馈作用。实验结果提示在临床用药中要考虑到对映体的生物活性差异,控制用药剂量。
- 何晓东沈佐君王宁玲翟志敏孙自敏
- 关键词：氨甲蝶呤对映体肿瘤生物效应
- 急性心肌梗死与不稳定型心绞痛患者血栓前体蛋白和肌酸激酶的检测被引量：28
- 2002年
- 为了解检测血栓前体蛋白对急性冠状动脉综合征转归的早期诊断价值 ,5 1例临床确诊冠心病患者分为不稳定型心绞痛和急性心肌梗死两组 ,采用酶联免疫吸附法检测各组血浆中血栓前体蛋白含量 ,采用干化学法同步检测患者血清磷酸肌酸激酶及其同工酶。结果发现 ,急性心肌梗死组 2 5例患者血栓前体蛋白均值为 9.9± 3.9mg L ,不稳定型心绞痛组 2 6例患者血栓前体蛋白均值为 2 .6± 1.7mg L ,前者明显升高 ,差别有显著性意义 (P <0 .0 1) ;急性心肌梗死组磷酸肌酸激酶均值为 5 95± 4 32u L ,磷酸肌酸激酶同工酶均值为 10 1± 74u L ,不稳定型心绞痛亚组磷酸肌酸激酶均值为 137± 4 0u L ,磷酸肌酸激酶同工酶均值为 10± 7u L ,前者亦明显升高 ,差别均有显著意义(分别为P <0 .0 5和P <0 .0 1)。结果提示 。
- 褚俊何晓东叶书来翟志敏
- 关键词：血栓肌酸激酶心绞痛心肌梗死
- 甲氨蝶呤对映体诱导肺癌细胞耐药后引起血管内皮细胞分化差异的研究被引量：2
- 2009年
- 目的研究甲氨蝶呤（MTX）对映体大剂量冲击作用肺癌A549细胞后，MTX对映体耐药细胞血管分化是否具有手性选择性。方法用大剂量冲击法诱导获得A549对映体耐药肺癌细胞，流式细胞双色分析细胞CD44／CD31以及P-170表达；皮下接种裸鼠，成瘤后取瘤体切片，进行CD34组化染色，计数新生微血管密度（MVD）。以A549亲本细胞（未获得耐药）作为对照组。结果分别建立耐药浓度为15μmol／L的L—MTX和D—MTX的A549耐药细胞株；它们与各自对映体的耐药指数分别为12．4±1．2和20．14-2．3；A549亲本细胞、L—MTX耐药细胞和D．MTX耐药细胞中：CD31’阳性率分别为55．5％±9．7％、32．9％±8．O％和91．9％±3．2％，差异有统计学意义（F=511．92，P=0．000）；P-170阳性率分别为85．5％±4．6％、71．5％±8．2％和87．0％±8．9％，L—MTX耐药细胞P-170的阳性率低于D．MTX耐药细胞（t=6．13，P=0．002）；3种细胞植入裸鼠成瘤后切片免疫标记CD34统计新生MVD，A549亲本细胞为3．6±1．2，L-MTX耐药细胞为7．24-1．7，D-MTX耐药细胞为55．9±11．9，D．MTX耐药细胞显著高于L—MTX耐药细胞（t=13．37，P=0．000）。结论MTX对映体诱导肺癌A549耐药细胞向血管内皮细胞分化能力不同，D—MTX耐药细胞经血管转移高于L．MTX耐药细胞，这提示MTX制剂中D型组分不能简单当成污染物而忽视，应尽量选用单-对映体的L-MTX药物制剂，减少D—MTX带来的副作用。
- 何晓东胡世莲沈佐君陶绍能董林朱园园李明
- 关键词：抗药性甲氨蝶呤细胞分化对映体
- 心房颤动患者血浆纤溶指标的变化
- 1998年
- 对33例已确诊的心房颤动患者采用发色底物法检测血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA),纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)及纤溶酶原(Plg)活性水平,并以30例非房颤患者作对照;结果发现心房颤动患者血浆t-PA活性低于非房颤患者(p<0.01),Plg活性也显著性低于非房颤患者(p<0.01),而PAI-I活性则显著性高于非房颤患者(p<0.001),提示心房颤动患者由于纤溶性降低而参与心房内附壁血栓形成过程。
- 周志中徐岩何浩何晓东吕世勤顾统元
- 关键词：活性心房纤颤血浆纤溶酶原
- 利用新型免疫磁珠富集原理检测肺癌患者外周血循环肿瘤细胞被引量：5
- 2013年
- 目的建立一种新型免疫磁珠方法，检测肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞（CTCs）。方法实验探索性研究。选择经手术切除组织病理确诊为非小细胞肺癌的42例初治患者，其中I期7例、Ⅱ期9例、Ⅲ期16例、Ⅳ期10例，健康志愿者20名。将不同数量（50、100、200、500、1000个）的肺癌细胞株（A549）混入2ml健康成人血标本中以模拟肿瘤患者的血样，对该血样进行红细胞裂解和离心，沉淀所得细胞与经过免疫磁珠标记的上皮细胞黏附分子（EpCAM）的抗体反应，然后经一套自制的检测装置对细胞进行富集和分离，与磁标记的EpCAM抗体反应后的上皮细胞因为磁力的作用被集中在一张玻片上，最后用经典的HE染色鉴定循环肿瘤细胞并计数。计算肿瘤细胞的回收率验证该方法的敏感性，同时检测20名健康志愿者血标本验证该方法的特异性。用上述方法检测42例肺癌患者的CTCs，将检测到的结果根据患者的临床特征进行分组，以卡方检验分析CTCs的检出率与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤大小等临床特征的相关性，同时以直线相关法研究掺入细胞数与回收细胞数的相关性。结果掺人肿瘤细胞回收试验的回收率在68％～82％之间，掺入细胞间回归方程为Y=0．6419X＋8．8875，回收的细胞与添加细胞间数量有显著的相关性（相关系数尺。=0．9916，P〈0．05）。42例肺癌患者中有18例（42．9％）CTCs阳性，其中，I期CTCs检出率为0，II期CTCs检出率为11．1％，Ⅲ期CTCs检出率为62．5％，IV期CTCs检出率为70％。CTCs检测的阳性率与患者的年龄、性别、肿瘤大小均无明显关系（P〉0．05），而与临床分期（TNM）有密切关系（P〈0．05）。特异性检测结果为20名健康志愿者外周血标本均未检测到CTCs。结论新型免疫磁珠富集技术可以有效分离和鉴定肺癌患者外周血中的循环肿瘤细胞，有�
- 嵇金陵何晓东索美芳张培黄蓉孙余婕沈佐君
- 关键词：肿瘤循环细胞免疫磁化分离肿瘤细胞黏附分子
- 高效毛细管电泳测定海马组织和脑脊液中氨基酸类神经递质被引量：8
- 2007年
- 目的建立测定大鼠海马组织和人脑脊液中氨基酸类神经递质的高效毛细管电泳分析方法。方法用高效毛细管电泳技术,选用总长60 cm、有效长度50.5 cm、直径75μm熔融石英毛细管,在20 kV电压下快速分离4种氨基酸。以100 mmol/L硼酸-三羟甲基氨基甲烷（Tris）（1∶1,含1%异丙醇）为电泳缓冲液（pH值为10.35）,激光诱导荧光检测器进行检测,并对此方法进行方法学评价。同时检测45例患者脑脊液的氨基酸含量。结果谷氨酸（GLU）、天冬氨酸（ASP）、γ-氨基丁酸（GABA）、甘氨酸（GLY）4种氨基酸能在15 min内分离,线性范围为1.0~100.0μmol/L,GLU、ASP、GABA、GLY最低检出限分别为10、23、18、15 nmol/L,4种氨基酸的批内精密度范围4.44%~9.72%,批间精密度范围6.96%~10.50%。4种氨基酸的回收率不低于88.1%。全面性大发作癫痫患者GLU、GLY、ASP含量显著高于对照组（P〈0.05）,而GABA较对照组差异无统计学意义;复杂部分性发作癫痫患者4种氨基酸含量较对照组显著增加（P〈0.05）。结论高效毛细管电泳具有快速、灵敏、准确的特点,为临床和科研提供了一种有效的方法。
- 宣柳沈佐君何晓东伊茂礼金鑫鲁明傅先明
- 关键词：神经递质高效毛细管电泳
- 急性心肌梗塞患者血浆中一氧化氮检测和临床意义
- 1999年
- 目的:检测急性心肌梗塞(AMI)患者血浆中一氧化氮(NO)浓度和组织纤溶酶原激活物(t-PA)活性,探讨它们之间的关系和临床意义。方法:NO浓度用硝酸盐还原酶法,t-PA活性用酶联免疫法。结果:AMI患者血浆NO浓度是(60.9±13.4)μmol/L,正常人血浆NO浓度是(86.2±15.6)μmol/L,二者具有显著性差异(P<0.005)。AMI患者血浆t-PA活性为(0.60±0.23)IU/ml,正常人t-PA活性为(1.40±0.70)IU/ml,二者亦有显著性差异(P<0.005);且AMI患者血浆中NO浓度和t-PA活性之间呈明显相关(r=0.87,P<0.005)。结论:AMI患者血浆中NO浓度和t-PA活性明显低于正常人,并且二者之间有显著相关性。
- 何晓东翟志敏周志中吴竟生
- 关键词：一氧化氮心肌梗塞AMIT-PA
- 112例成人急性白血病免疫分型被引量：32
- 2001年
- 目的 探讨成人急性白血病 (AL)免疫分型标准及其意义 ,了解成人AL抗原表达规律和免疫亚型分布情况。方法 细胞膜抗原采用单克隆抗体双色直接免疫荧光标记法 ,胞浆内抗原采用单色直接免疫荧光标记法及流式细胞术 ,分型标准试用抗体积分系统。结果 ①未分化型占 0 .9% ;单纯型占 5 1.8% ,其中急性髓系白血病 (AML)占 34 .8% ,B淋巴细胞白血病 (B ALL)占 13.4% ,T淋巴细胞白血病 (T ALL)占 3.6 % ;变异型占 38.4% ,其中髓系占 2 7.7% ,淋巴细胞系占 10 .7% ;混合型占8 9%。②AL患者CD3 4 阳性占 5 0 % ,M3 患者HLA DR均为阴性。AML变异型伴CD7阳性最常见 ,然后依次为CD1 0 阳性、CD1 9阳性、CD2 0 阳性 ,B ALL变异型依次为CD1 3 阳性、CD3 3 阳性、CD7阳性 ,T ALL变异型依次为CD3 3 阳性、CD1 0 阳性、CD1 9阳性 ,混合型以B淋巴细胞和髓细胞系共同表达最多 (70 % ) ,其次为T、B、髓细胞系共表达 (2 0 % )及T细胞系和髓细胞系共表达 (10 % )。结论 本方法直接准确地反映成人AL免疫分型特点 ,特别是采用数字化分型指标 ,简洁、客观、易于掌握。
- 翟志敏何晓东戴海明孙自敏
- 关键词：急性白血病免疫分型流式细胞术
- 脐血淋巴细胞的免疫学特性研究被引量：8
- 2001年
- 目的 探讨脐血中T淋巴细胞的免疫功能 ,为脐血移植后移植物抗宿主病 (GVHD)、移植物抗白血病反应 (GVL)及免疫功能重建提供理论依据。方法 用免疫荧光抗体直接标记淋巴细胞分化抗原 ,应用流式细胞仪进行检测 ;用微量全血法进行单细胞内的细胞因子检测从而判断脐血T淋巴细胞分泌细胞因子 (IFN γ、IL 4)的能力 ;用植物血凝素 (PHA)作为刺激剂 ,观察T淋巴细胞CD2 5表达的动态变化。结果 脐血T淋巴细胞CD4 + /CD8+ 为 1.93± 0 .91,较成人高 (P <0 .0 1) ,CD8+ 细胞百分比低于成人外周血 (P <0 .0 1) ,而且 90 %以上T淋巴细胞表达初始型CD4 5RA,显著高于成人外周血淋巴细胞 (P <0 .0 1) ;CD2 5、CD2 8、HLA DR二者间差异无显著性。脐血CD4 + 、CD8+ 细胞分泌IFN γ、IL 4的水平显著低于成人T淋巴细胞 (P <0 .0 1)。脐血T淋巴细胞经PHA刺激可以活化 ,但活化的时相与成人略有不同。结论 脐血淋巴细胞各细胞亚群的构成比例及发育成熟度与成人均不相同 ,脐血CD4 +CD8+ 淋巴细胞中 ,以代表初始型、未接触抗原刺激的CD4 5RA+ 细胞为主 ,而且分泌细胞因子的能力低下 ,可能是脐血移植后急、慢GVHD发生率低、强度弱的原因之一。脐血淋巴细胞经适当刺激可以活化 。
- 祝怀平孙自敏戴海明何晓东吴竞生
- 关键词：胎血免疫学功能淋巴细胞脐血脐血移植移植物抗宿主病
