张永娟
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
- 供职机构：安徽医科大学附属省立医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- BLMmRNA在白血病细胞中的表达及其临床意义被引量：4
- 2012年
- 目的分析BLM基因在白血病骨髓细胞中的表达情况及其临床意义。方法收集2011年1月至12月安徽省立医院血液科住院和门诊随访的125例白血病患者骨髓标本为研究对象。其中包括59例慢性粒细胞白血病（CML），66例急性白血病（AL）。对照组为5例门诊非恶性血液病患者的骨髓标本，其中女性3例，男性2例，年龄在15岁至53岁。采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测了已通过细胞形态学和免疫分型检查骨髓细胞中BLMmRNA的表达情况，按患者年龄、性别、所患白血病类型、外周血白细胞计数情况、有无肝脾肿大、融合基因表达情况、染色体核型、是否初诊以及是否移植进行分组。回顾性分析BLM基因在各分组中的表达情况以及与以上各因素的相关性。采用，检验、单因素方差分析、t检验以及Pearson相关性检验进行统计学分析。结果BLM基因在各型白血病中均有表达。125例白血病患者骨髓标本中，BLM基因阳性表达71例，阴性表达54例，5例非恶性血液病患者的骨髓标本中均不表达。白血病患者骨髓细胞内BLM基因的表达在不同白细胞计数分组问以及融合基因分组间，差异有统计意义（矿值分别为14．730和22．399，P均〈0．05）。经治疗后的白血病患者BLM基因的表达水平（0．1788±0．1091）低于初诊（0．3276±0．2016）白血病患者，差异有统计学意义（t=3．937，P〈0．05）；移植后的患者BLM基因表达水平（0．1271±0．1009）低于未经过移植（0．2902±0．2034）的患者，差异具有统计学意义（t=2．061，P〈0．05）。Pearson相关性分析显示白血病骨髓细胞中BLM基因的表达与融合基因呈正相关（r=0．357，P〈0．01），并且与染色体核型呈正相关（r=0．279，P〈0．05）。结论BLM基因表达水平的测定可作为判断白血病患者病情严重程度和预后的指标，检测其水平可能为临
- 张永娟何晓东孙余婕张白银黄蓉嵇金陵沈佐君
- 关键词：白血病骨髓细胞逆转录聚合酶链反应
- BLM基因的研究进展被引量：3
- 2012年
- BLM是RecQ DNA解螺旋酶家族成员之一。RecQ DNA解螺旋酶家族在抑制人类肿瘤发生及早衰方面发挥着重要作用。本文介绍了BLM基因的结构与生物学特性,并在此基础上对BLM基因突变及其蛋白表达作一综述。
- 张永娟沈佐君
- 关键词：BLM基因突变蛋白表达
- Luminex液相芯片技术测定氨甲喋呤对映体耐药A549细胞株中磷酸化酪氨酸激酶受体被引量：3
- 2011年
- 目的探讨氨甲喋呤(MTX)对映体诱导的耐药A549细胞株中磷酸化酪氨酸激酶受体(RTKs)的表达差异及受体间的相关性。方法用MTX对映体浓度递增结合低剂量持续诱导肺腺癌A549细胞株,用Luminex液相芯片技术检测L-(+)-MTX/A549细胞、D-(-)-MTX/A549细胞和亲本A549细胞3组细胞中7种磷酸化RTKs[磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)、磷酸化胰岛素样生长因子1受体(p-IGF-1R)、磷酸化肝细胞生长因子受体(p-HGFR)、磷酸化血小板源性生长因子受体(p-PDGFRβ)、磷酸化人类表皮生长因子受体2(p-HER-2)、磷酸化血管内皮生长因子受体2(p-VEGFR2)、磷酸化血管生成素受体(p-Tie-2)]的表达水平,分析它们之间的相关性。结果 D-(-)-MTX/A549组p-EGFR、p-HER-2的平均荧光强度(MFI)分别为26.91±1.81、16.56±1.15;L-(+)-MTX/A549组的MFI分别为54.13±2.75、16.94±1.44;亲本细胞组的MFI分别为54.38±2.88、33.75±2.49。p-EGFR与p-HER-2显著相关(P<0.05),p-HER-2和p-VEGFR、p-HGFR之间显著相关(P<0.05),其他磷酸化RTKs之间相关关系不显著。结论 MTX对映体诱导的耐药A549细胞株中,p-EGFR表达水平存在手性差异。
- 许维东何晓东孙利李道静张永娟张白银沈佐君
- 关键词：氨甲蝶呤A549细胞对映体酪氨酸激酶受体液相芯片
- 氨甲蝶呤对映体获得性耐药A549细胞株二氢叶酸还原酶基因表达分析被引量：5
- 2011年
- 目的研究氨甲蝶呤(MTX)对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药与二氢叶酸还原酶(DHFR)基因表达的关系。方法用浓度递增结合低剂量持续诱导法获得A549细胞对不同构型及不同浓度的MTX对映体的耐药细胞株,荧光定量PCR检测耐药细胞株中DHFR基因的相对含量。结果对两种不同对映体的获得性耐药存在差异,D型耐药细胞耐药指数高于L型;对映体各浓度耐药细胞间耐药指数也有差异。15μmol/L L型、D型MTX首次诱导耐药细胞的DHFR相对含量低于亲本细胞,对该浓度对映体耐药的各细胞组间没有差别(P>0.05)。35～45μmol/L浓度耐药细胞的DHFR相对含量增加,45μmol/L D型耐药细胞DHFR相对含量高于对应浓度L型耐药细胞,差异有显著性(P<0.05)。结论首次诱导MTX耐药以抑制DHFR基因为主。DHFR基因表达具有手性差异。DHFR基因的检测有望作为肿瘤治疗监测的指标。
- 李道静何晓东孙余婕凡任芝许维东孙利张永娟张白银沈佐君
- 关键词：二氢叶酸还原酶氨甲蝶呤对映体耐药
- 氨甲蝶呤对映体耐药A549细胞株中叶酰聚谷氨酸合成酶mRNA和蛋白表达被引量：1
- 2011年
- 目的探讨叶酰聚谷氨酸合成酶(FPGS)在氨甲蝶呤(MTX)对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药A549细胞株中的表达。方法通过FQ-PCR和Western blot法分别测定肺癌A549细胞株和15μmol/L L-(+)-MTX和D-(-)-MTX两种耐药A549细胞株中FPGS mRNA和蛋白表达。结果 L-(+)-MTX、D-(-)-MTX耐药细胞株中FPGS基因表达的mRNA相对含量分别为肺癌A549细胞株的(0.80±0.09)倍和(2.04±0.34)倍,两组间差异具有统计学意义(P<0.05);L-(+)-MTX、D-(-)-MTX耐药细胞株中FPGS的蛋白表达含量分别为对照组肺癌A549细胞株的(0.85±0.12)倍和(1.62±0.24)倍,两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 MTX诱导耐药后细胞株中FPGS mRNA和蛋白均发生变化,且在两种对映体细胞株间具有手性差异。
- 孙利沈佐君何晓东孙余婕许维东李道静张白银张永娟
- 关键词：氨甲蝶呤
- 实时荧光定量PCR法检测MTX对映体耐药A549细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGSmRNA的表达被引量：3
- 2011年
- 目的建立实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞中FPGSmRNA表达的方法，研究MTX对映体[L-（＋）-MTX和D-（-）-MTX]耐药细胞株中FPGS的基因表达差异，并用于观察白血病患者MTX治疗耐药前后FPGSmRNA表达水平的变化。方法用SYBRGreenI为荧光染料，以β—actin作参照，建立检测FPGSmRNA的实时荧光定量PCR方法。根据Ct值、标准曲线相关系数、斜率、重复性曲线、熔解曲线、扩增效率曲线等进行方法学评价。并用该方法检测MTX对映体耐药细胞株及应用MTX耐药的14例白血病患者骨髓细胞中FPGSmRNA的表达。结果建立的标准曲线ct值与模板浓度有良好的线性关系，FPGS和β-actin标准曲线相关系数分别为0．9968和0．9987，斜率分别为-3．595和-3．740，批内CV为1．27％-2．95％，批间CV为3．82％；熔解曲线均呈单个特异峰，扩增效率相似（斜率为0．0217）；L．（＋）-MTX耐药细胞和D．（-）-MTX耐药细胞中FPGSmRNA相对含量分别为（3．51±0．66）和（0．16±0．01），A549亲本细胞（S）中FPGSmRNA相对含量为（1．00±0．31），差异有统计学意义（F=64．45，P〈0．01）；L-（＋）-MTX耐药细胞和D．（-）-MTX耐药细胞间FPGSmRNA相对含量差异有统计学意义（q=9．29，P〈0．01）。白血病患者应用MTX治疗耐药后，FPGSmRNA表达水平为（0．35±0．04），用药前为（1．00±0．44），差异有统计学意义（t=8．83，P〈0．01）。结论建立的实时荧光定量PCR检测FPGSmRNA的方法重复性好、特异度高，可用于FPGSmRNA含量分析。MTX诱导耐药后细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGSmRNA表达发生了变化，MTX2种对映体形式在细胞耐药机制中可能发挥了不同的作用。
- 孙利何晓东孙余婕许维东李道静张白银张永娟刘锐沈佐君
- 关键词：白血病
- MTX对映体耐药A549细胞株中EGFR基因mRNA表达及启动子甲基化分析
- 研究背景肿瘤导致患者死亡的重要原因之一是肿瘤的侵袭和转移。肿瘤的侵袭、转移是一个复杂的过程,涉及面很广。表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor,EGFR)在多种肿瘤中表达或高表达...
- 张白银沈佐君何晓东孙余婕张永娟
- 氨甲蝶呤对映体耐药A549细胞的表皮生长因子受体基因表达及迁移能力被引量：1
- 2012年
- 目的研究氨甲蝶呤(MTX)对映体耐药人非小细胞肺癌A549细胞的迁移能力以及表皮生长因子受体(EGFR)mRNA的表达。方法用细胞划痕试验检测L-(+)-MTX/A549细胞和D-(-)-MTX/A549细胞的迁移能力;双层软琼脂克隆试验检测L-(+)-MTX/A549细胞和D-(-)-MTX/A549细胞的克隆形成率并观察集落的形态;用RT-PCR检测亲本A549细胞、L-(+)-MTX/A549细胞和D-(-)-MTX/A549细胞中EGFR mRNA的表达。结果加入MTX 72 h后D-(-)-MTX/A549细胞的迁移能力(1 230.1±40.2)高于L-(+)-MTX/A549细胞(530.3±25.4);D-(-)-MTX/A549细胞、L-(+)-MTX/A549细胞和亲本A549细胞的克隆形成率(%)分别为(1.38±0.17)、(1.36±0.13)和(1.37±0.15),差异无统计学意义(P>0.05);亲本A549细胞、L-(+)-MTX/A549细胞均有EGFR mRNA表达,其光密度值(IDV)分别为(6 630±64)、(3 697±27),差异有统计学意义(t=103.42,P<0.01)。而D-(-)-MTX/A549细胞不表达EGFR。结论 D-(-)-MTX诱导的A549细胞的迁移能力大于L-(+)-MTX。EGFR基因表达具有手性差异。
- 张白银何晓东孙余婕张永娟嵇金陵沈佐君
- 关键词：表皮生长因子受体氨甲蝶呤对映体
