吴静波
- 作品数：10 被引量：11H指数：2
- 供职机构：韶关学院英东生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 一种布鲁氏菌B细胞表位及其单克隆抗体和应用
- 本发明公开了一种布鲁氏菌B细胞表位及其抗体和应用，表位的序列为DRDLQTGGI。本发明的布鲁氏菌B细胞表位，为bp26蛋白的核心表位，疫苗株中该段序列突变后获得的突变bp26蛋白在免疫羊之后，无法诱导产生抗该表位的抗体...
- 王文敬丘金浪吴静波黎诚耀
- 文献传递
- 羊布鲁杆菌M5-90BP26抗原单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的制备高亲和性的羊布鲁杆菌M5—90BP26抗原单克隆抗体，并对抗体进行鉴定。方法将质粒pET-28a—BP26转化感受态大肠埃希菌（E．coli）BL21（DE3），构建原核表达质粒pET-28a—BP26，用镍离子金属螯合亲和层析法（Ni—NTA）纯化、重组BP26蛋白（rBP26）。将纯化后的rBP26蛋白与弗氏完全佐剂等体积混合成乳化抗原。按每只100μg／0．1ml在BALB／c小鼠皮下多点注射进行初次免疫；2周后，按每只50μg／0．1ml在小鼠皮下多点注射进行再次免疫。再次免疫后2周，小鼠尾静脉取血测效价，检测免疫效果；在细胞融合前3天，将乳化抗原按每只小鼠50μg腹腔注射加强免疫。将小鼠骨髓瘤SP2／O细胞与脾细胞按1：5比例在聚乙二醇（PEG）1450作用下进行细胞融合，置于37℃、5％CO2培养箱中培养；10d后取细胞培养上清液，用间接酶联免疫吸附法（ELISA）测定，筛选分泌抗rBP26抗体的杂交瘤细胞；再经过反复3次克隆，筛选出单克隆全阳性的杂交瘤细胞建株，用杂交瘤细胞株制备BP26抗原单克隆抗体，并以初始杂交瘤细胞克隆号命名。利用羊布鲁杆菌M5～90疫苗株制备膜蛋白提取物（NMP），采用免疫印迹法（Western）及斑点间接酶联免疫吸附法（Dot—ELISA）对筛选的单克隆抗体进行免疫学特性鉴定，用单克隆抗体亚型试剂盒进行抗体分型和Kappa（K）和Lambda（入）轻链鉴定。结果成功地获得2株能稳定分泌抗rBP26抗原的高亲和性杂交瘤3C3和5A5单克隆抗体，并能与羊布鲁杆菌M5—90疫苗株上的NMP结合，构建成M5—90BP26抗原单克隆抗体，抗体亚型分别为IgG1和IgG2b，轻链均为K链。结论鉴定结果表明，成功制备2株羊布鲁杆菌BP26抗原的高亲和性单克隆抗体，抗体具有识别M5—90疫苗株的膜蛋白构象表位的能力，优势表位的识别可为羊布鲁杆菌M5—90疫苗株的改造提供实验依据。
- 丘金浪吴静波黎诚耀王文敬
- 布鲁杆菌优势抗原OMP31和BP26的B细胞表位筛选
- 吴静波丘金浪翁云层廖卿宇王文敬黎诚耀
- 马耳他布氏菌弱毒疫苗M5-90外膜蛋白BP26和OMP31抗原表位及其疫苗免疫评价
- 背景： 布鲁氏菌在我国为乙类病原微生物,主要引起布鲁氏菌病,简称布病,是目前世界上流行最广、危害最大的人兽共患病之一。布病可引起动物的流产和不孕,引起人急性波状热等,容易转入慢性引起肝脾、淋巴结肿大,关节炎等变态反应性疾...
- 吴静波
- 关键词：布鲁氏菌病免疫测定抗原表位
- 文献传递
- 羊布鲁菌OMP31蛋白基因表达及抗原性分析被引量：3
- 2013年
- 目的构建布鲁菌OMP31蛋白原核表达载体,获得OMP31蛋白。方法 PCR扩增OMP31基因,连接入pET-30a(+)表达载体中,构建pET-30a(+)/OMP31质粒,双酶切鉴定、测序正确后,转化入大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,以不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,并通过二十烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析;蛋白质免疫印迹(western blot)初步分析其免疫原性。结果成功构建pET-30a(+)/OMP31表达载体,并表达出OMP31蛋白,分子量约为31 kDa,主要以包涵体形式存在;通过复性获得>95%的高纯度可溶性蛋白;以布鲁菌虎红平板阳性血清检测,显示复性后蛋白具有良好的免疫反应性。结论成功表达出带组氨酸(HIS)标签的OMP31融合蛋白,且具有较好的蛋白抗原性。
- 吴静波丘金浪逯光文许翔邱菲黎诚耀王文敬
- 关键词：布鲁菌表达载体构建蛋白表达抗原性
- 布鲁氏菌弱毒疫苗株M5-90 BP26和OMP31蛋白T细胞表位的鉴定
- 布鲁氏菌为胞内寄生菌,而CD4+/CD8+细胞分泌的高水平IFN-γ等细胞因子能有效抑制胞内寄生菌;另外CTL的细胞毒作用和Th1型细胞免疫应答,对诱发长效抵抗布菌感染也是至关重要;BP26和OMP31蛋白为布菌疫苗中的...
- 吴静波翁云层丘金浪李荣黎诚耀王文敬
- 关键词：布鲁氏菌T细胞表位
- 文献传递
- 羊布鲁杆菌脂蛋白OMP19单克隆抗体制备与鉴定被引量：6
- 2015年
- 目的制备与鉴定羊布鲁杆菌脂蛋白OMP19单克隆抗体,用于布菌感染免疫机制研究。方法将OMP19基因连接入pET-30a(+)表达载体中,构建pET-30a(+)/OMP19质粒,转化入大肠埃希氏菌BL21(E3),以不同浓度异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,采用镍金属螯合亲和层析(NI-NTA)纯化;以布菌阳性血清检测重组蛋白免疫反应性,并利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,以天然OMP19蛋白及布菌外膜蛋白提取物(NMP)对制备的单克隆抗体进行Western Blot及酶免疫染色试验(IEST)鉴定。结果表达了OMP19蛋白,分子量约19kDa,通过纯化纯度可达95%,Western Blot分析显示蛋白具有良好的抗原性,并制备了OMP19抗原23株鼠源性单克隆抗体,鉴定结果显示22(95.65%)株能与天然OMP19蛋白反应,18(78.26%)株能与NMP反应,其中IgG1(k)亚型占91.30%;4株能与羊种布鲁氏菌菌涂片反应。结论成功制备具有良好抗原性的重组OMP19蛋白,筛选出识别天然蛋白的单克隆抗体,已初步应用于布菌的检测,为OMP19抗原B细胞表位的筛选奠定基础。
- 廖卿宇胡飞环吴静波罗佩芳王文敬黎诚耀
- 关键词：布鲁杆菌蛋白表达单克隆抗体
- 布鲁氏菌omp31抗原表位及其单克隆抗体和应用
- 本发明公开了布鲁氏菌omp31抗原表位及其抗体和应用，表位的序列为GGYIGINAGYAGGKFK。本发明还公开了识别上述表位的单克隆抗体，及上述表位与单克隆抗体在制备诊断、预防或治疗布鲁氏菌病试剂或药物中的应用。
- 王文敬吴静波廖卿宇黎诚耀
- 文献传递
- 一种布鲁氏菌B细胞表位及其单克隆抗体和应用
- 本发明公开了布鲁氏菌B细胞表位及其抗体和应用，表位的序列为DRDLQTGGI。本发明的布鲁氏菌B细胞表位，为bp26蛋白的核心表位，疫苗株中该段序列突变后获得的突变bp26蛋白在免疫羊之后，无法诱导产生抗该表位的抗体，从...
- 王文敬丘金浪吴静波黎诚耀
- 布鲁杆菌优势抗原OMP31和BP26的B细胞表位筛选
- 2012年
- 目的筛选BP26和OMP31蛋白的B淋巴细胞线性表位,并探索该表位及其抗体在布病检测中的价值。方法构建BP26和OMP31蛋白的原核表达系统,表达、纯化重组BP26(rBP26)和OMP31蛋白(rOMP31),并以rBP26和rOMP31分别免疫BALB/c小鼠,制备能特异性结合天然OMP31和BP26蛋白的单克隆抗体;合成BP26和OMP31蛋白的重叠16肽作为抗原,多肽ELISA测定单抗;与KLH偶联的16肽作为ELISA检测抗原,检测羊的血清。结果获得纯度90%以上的rBP26和rOMP31,并制备28株能稳定分泌抗rBP26单抗,5株稳定分泌抗rOMP31单抗的杂交瘤细胞株,其中分别有11株和1株能与多肽结合,
- 吴静波丘金浪翁云层廖卿宇王文敬黎诚耀
- 关键词：布鲁杆菌杂交瘤细胞株原核表达系统布病线性表
