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羊布鲁氏杆菌OMP31的真核表达及其应用分析: 2016年; 为了获得可在细胞内表达布鲁氏杆菌外膜蛋白31(OMP31)基因的表达载体和慢病毒,试验从羊布鲁氏杆菌M5-90疫苗株PCR获得OMP31基因,连接至p Zero Back/blunt载体,经双酶切鉴定、测序鉴定正确的基因亚克隆到p HAGE-CMV-MCS-IZs Green表达载体上,双酶切鉴定,构建含正确OMP31基因的表达载体p HAGE-OMP31,与包装质粒ps PAX2和包膜质粒p MD2.G共转染293FT细胞进行慢病毒Lentivirus-OMP31包装;获得的Lentivirus-OMP31感染293FT细胞,利用蛋白质印迹(Western-blot)和免疫荧光(IFS)鉴定OMP31蛋白的表达及其免疫原性;LentivirusOMP31体外感染布鲁氏杆菌的宿主细胞模型单核细胞THP-1和人绒毛膜滋养层细胞JEG-3,Western-blot和IFS鉴定OMP31基因的表达,并利用流式细胞(FCM)检测细胞凋亡情况。结果表明:构建了能够在细胞内表达OMP31基因的真核表达载体p HAGE-OMP31和慢病毒LentivirusOMP31,二者感染细胞后表达的OMP31蛋白可与特异性抗体反应,具有良好的抗原性。经初步鉴定,OMP31蛋白在JEG-3细胞内表达能引起细胞凋亡。说明载体p HAGE-OMP31和慢病毒Lentivirus-OMP31可作为用于研究OMP31与布鲁氏杆菌感染相关性的试验材料。; 罗佩芳何作萍胡飞环黄建锋翁云层王文敬黎诚耀; 关键词：布鲁氏杆菌真核表达细胞凋亡

抑癌基因CST6及其异常甲基化后在肿瘤发生中的意义: 2013年; 人类半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(cystatin E/M or CST6),又称胱抑C,最初是从转移性乳腺癌细胞中分离出来的一种具有抑制半胱氨酸蛋白酶作用的新基因。有研究发现CST6基因在浸润性乳腺癌、宫颈癌、转移性前列腺癌以及神经胶质脑瘤中表达均有下调,具有抑癌基因的潜能,并且还发现造成该基因表达下调的原因除了基因突变、基因缺失以外,表观遗传修饰的作用更为普遍,而且后者导致的基因沉默可以通过药物逆转。现今有一些关于CST6与癌症发生发展的研究取得了一定的成果。本文综述了CST6基因的功能研究以及其异常甲基化与癌症发生发展关系的研究进展,有望为揭示肿瘤的发生机制提供新的思路,为肿瘤的预防、诊断、治疗提供新的靶点。; 田原聂鑫胡飞环王艺丹杜红延; 关键词：甲基化癌症

调节性T淋巴细胞对急性期布鲁菌病患者治疗效果的影响被引量：5: 2017年; 目的调查布鲁杆菌感染后宿主的体液和细胞免疫应答情况，Foxp3^＋在布鲁菌病患者治疗过程中的变化，阐明宿主产生免疫抑制对布鲁菌病治疗效果的影响。方法2015年7月至2015年11月，黑龙江农垦总局总医院感染三科住院的急性期布鲁菌病患者65例。标准治疗组28例，根据患者情况选择抗菌药物进行3个疗程的标准治疗，每个疗程20d，疗程间隔10d；免疫增强剂组37例，在标准治疗的基础上增加免疫增强药物。另选取健康体检者30名为健康对照组。在治疗前和每个疗程结束时，采用流式细胞术检测患者外周血中CD3^＋CD4^＋Foxp3^＋Treg含量变化。符合正态分布的数据以孑±S表示。两组间比较采用t检验，多组问的比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK法。不符合正态分布的数据进行多个独立样本的非参数检验。结果65例急性期布鲁菌病患者第1疗程结束时外周血中Foxp3^＋ Treg含量为2．83％，第2疗程结束时为3．77％，第3疗程结束时为4．03％，均高于健康对照组的1．69％（￡值分别为5．97、9．05和5．66，均P〈0．01）。第1疗程结结束时，标准治疗组和免疫增强剂组间外周血Foxp3^＋Treg含量差异无统计学意义（t=0．33，P〉0．05），但均高于健康对照组（￡值分别为7．09和4．94，均P〈0．01）。第2疗程结束时，免疫增强剂组患者外周血Foxp3^＋Treg含量高于标准治疗组，差异有统计学意义（t=2．22，P〈0．01），且两组均高于健康对照组（f值分别为10．79和7．25，均P〈0．01）。第3疗程结束时，免疫增强剂组患者外周血Foxp3^＋ Treg含量高于标准治疗组和健康对照组，差异均有统计学意义（t值分别为6．02和6．45，P〈0．01）。结论急性期布鲁菌病患者经过添加免疫增强剂的治疗，外周血Foxp3^＋Treg含量呈现持续上升的趋势，并一直维持在一定高位水平。推测，过�; 胡飞环张国侠田艳君张立杰刘佰玲王文敬黎诚耀; 关键词：布鲁菌病 T淋巴细胞调节性 FOXP3

羊布鲁杆菌外膜蛋白19(OMP19)的表达及鉴定被引量：3: 2016年; 目的构建可表达羊布鲁杆菌外膜蛋白19(OMP19)的真核表达载体,研究OMP19对宿主细胞凋亡的作用。方法以羊布鲁杆菌M5-90疫苗株基因组为模板,PCR扩增脂化型外膜蛋白19(L-OMP19)与非脂化型外膜蛋白19(U-OMP19)基因,产物连接至p Zero Back/blunt载体;经双酶切鉴定、测序正确的基因亚克隆到用于包装慢病毒的表达载体p HAGE-CMV-MCS-IZsGreen上,双酶切鉴定,构建含正确L-OMP19、U-OMP19基因的真核表达载体p HAGE-L-OMP19与p HAGE-U-OMP19。分别将构建好的载体转染293FT细胞、Huh7.5.1细胞和JEG-3细胞,用Western blot法及免疫荧光技术检测L-OMP19、U-OMP19蛋白的表达,用藻红蛋白标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果构建能在细胞内表达L-OMP19和U-OMP19基因的真核表达载体p HAGE-L-OMP19和p HAGE-U-OMP19,二者转染细胞后表达的L-OMP19和U-OMP19蛋白可与特异性抗体反应;L-OMP19和U-OMP19不引起Huh7.5.1细胞凋亡,但可引起JEG-3细胞的大量坏死。结论成功构建可用于慢病毒包装的L-OMP19和U-OMP19真核表达载体,胞内重组表达的脂蛋白OMP19具有良好的抗原性,为研究布鲁杆菌脂蛋白在宿主细胞内作用机制提供实验材料。; 何作萍罗佩芳胡飞环翁云层王文敬黎诚耀; 关键词：布鲁杆菌布鲁杆菌病真核表达细胞凋亡

羊布鲁杆菌脂蛋白OMP19单克隆抗体制备与鉴定被引量：6: 2015年; 目的制备与鉴定羊布鲁杆菌脂蛋白OMP19单克隆抗体,用于布菌感染免疫机制研究。方法将OMP19基因连接入pET-30a(+)表达载体中,构建pET-30a(+)/OMP19质粒,转化入大肠埃希氏菌BL21(E3),以不同浓度异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,采用镍金属螯合亲和层析(NI-NTA)纯化;以布菌阳性血清检测重组蛋白免疫反应性,并利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,以天然OMP19蛋白及布菌外膜蛋白提取物(NMP)对制备的单克隆抗体进行Western Blot及酶免疫染色试验(IEST)鉴定。结果表达了OMP19蛋白,分子量约19kDa,通过纯化纯度可达95%,Western Blot分析显示蛋白具有良好的抗原性,并制备了OMP19抗原23株鼠源性单克隆抗体,鉴定结果显示22(95.65%)株能与天然OMP19蛋白反应,18(78.26%)株能与NMP反应,其中IgG1(k)亚型占91.30%;4株能与羊种布鲁氏菌菌涂片反应。结论成功制备具有良好抗原性的重组OMP19蛋白,筛选出识别天然蛋白的单克隆抗体,已初步应用于布菌的检测,为OMP19抗原B细胞表位的筛选奠定基础。; 廖卿宇胡飞环吴静波罗佩芳王文敬黎诚耀; 关键词：布鲁杆菌蛋白表达单克隆抗体

布鲁菌病免疫耐受机制及细胞内病原菌荧光检测方法研究: 布鲁菌病(Bmcellosis简称布病)是由布鲁杆菌(简称布菌)引起的人畜共患传染病，能够引起患者多器官系统损伤进而严重降低了患者的生活质量，故而准确诊断布病和治疗尤为重要。我国现行的布病检测主要以血清学为主，病原学的菌...; 胡飞环; 关键词：布鲁菌病免疫耐受机制荧光检测; 文献传递

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