黎诚耀
- 作品数：144 被引量：403H指数：11
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学文化科学生物学更多>>
- 一种基于双功能纳米颗粒的免疫学检测方法
- 本发明公开了一种基于双功能纳米颗粒的免疫学检测方法，所述双功能纳米颗粒上包被有催化底物显色的酶或者信号分子，还包被有与检测抗体或者抗原发生特异性结合的分子。该方法通过纳米颗粒对检测信号进行放大，实现高灵敏检测。该方法可以...
- 李金峰黎诚耀李婷婷张玲
- 文献传递
- 重组人白细胞介素6表达载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达
- 1993年
- 本研究合成了两个成熟人IL-6cDNA引物.采用PCR法扩增出了成熟人IL-6基因片段,并在其5’端加入了一个Eeo RI部位和ATG,3’端加入了一个Bam HI部位和TAA.利用pBV220质粒构建成功了pBV220 IL-6表达载体.将该重组质粒导入E.coli DH5α中,经30℃扩增和42℃诱导,表达出了分子量为21000的预期蛋白.经SDS-PAGE分析与薄层扫描测定,重组IL-6的含量约占全菌体总蛋白的27％以上.菌体裂解液用7TD_1细胞测定,证明具有明显的IL-6活性.实验还对工程菌的IL-6表达动态和包涵体提取进行了研究,从而为工程菌发酵与IL-6纯化提供了工作基础.
- 黎诚耀黎孟枫韩文瑜刘一平刘明远
- 关键词：白细胞介素6基因表达大肠杆菌
- 羊布鲁杆菌M5-90BP26抗原单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的制备高亲和性的羊布鲁杆菌M5—90BP26抗原单克隆抗体，并对抗体进行鉴定。方法将质粒pET-28a—BP26转化感受态大肠埃希菌（E．coli）BL21（DE3），构建原核表达质粒pET-28a—BP26，用镍离子金属螯合亲和层析法（Ni—NTA）纯化、重组BP26蛋白（rBP26）。将纯化后的rBP26蛋白与弗氏完全佐剂等体积混合成乳化抗原。按每只100μg／0．1ml在BALB／c小鼠皮下多点注射进行初次免疫；2周后，按每只50μg／0．1ml在小鼠皮下多点注射进行再次免疫。再次免疫后2周，小鼠尾静脉取血测效价，检测免疫效果；在细胞融合前3天，将乳化抗原按每只小鼠50μg腹腔注射加强免疫。将小鼠骨髓瘤SP2／O细胞与脾细胞按1：5比例在聚乙二醇（PEG）1450作用下进行细胞融合，置于37℃、5％CO2培养箱中培养；10d后取细胞培养上清液，用间接酶联免疫吸附法（ELISA）测定，筛选分泌抗rBP26抗体的杂交瘤细胞；再经过反复3次克隆，筛选出单克隆全阳性的杂交瘤细胞建株，用杂交瘤细胞株制备BP26抗原单克隆抗体，并以初始杂交瘤细胞克隆号命名。利用羊布鲁杆菌M5～90疫苗株制备膜蛋白提取物（NMP），采用免疫印迹法（Western）及斑点间接酶联免疫吸附法（Dot—ELISA）对筛选的单克隆抗体进行免疫学特性鉴定，用单克隆抗体亚型试剂盒进行抗体分型和Kappa（K）和Lambda（入）轻链鉴定。结果成功地获得2株能稳定分泌抗rBP26抗原的高亲和性杂交瘤3C3和5A5单克隆抗体，并能与羊布鲁杆菌M5—90疫苗株上的NMP结合，构建成M5—90BP26抗原单克隆抗体，抗体亚型分别为IgG1和IgG2b，轻链均为K链。结论鉴定结果表明，成功制备2株羊布鲁杆菌BP26抗原的高亲和性单克隆抗体，抗体具有识别M5—90疫苗株的膜蛋白构象表位的能力，优势表位的识别可为羊布鲁杆菌M5—90疫苗株的改造提供实验依据。
- 丘金浪吴静波黎诚耀王文敬
- 腺病毒滴度不同测定方法比较被引量：19
- 2011年
- 目的将目前测定腺病毒滴度常用的OD260法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变(CPE)法进行比较研究,分析和讨论各种方法的优缺点。方法 4种重组腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad–CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CBA-GFP)扩增、纯化后,同时分别用OD260值法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法及CPE法测定病毒滴度,并以壳蛋白免疫法测定结果作为标准,对各种方法所得结果进行比较研究。结果绿色荧光蛋白标记法、CPE法与壳蛋白免疫法同时测定4种腺病毒滴度,其结果无统计学差异(P>0.1)。荧光定量PCR法测定值明显高于壳蛋白免疫法(P<0.05),但与该法测定结果间存在良好的相关性(r=0.965),约为壳蛋白免疫法所测得结果的10倍。OD260法测得结果与壳蛋白免疫法测得结果间则无相关性。结论绿色荧光蛋白标记法与壳蛋白免疫法是测定腺病毒感染性滴度最为快速有效的方法,其结果客观可靠,能真实地反映病毒的实际感染力。荧光定量PCR法测定结果反映的是完整的病毒颗粒数,能够间接反映病毒的感染力,且该方法操作简单,耗时短,同样有较高的实用性。
- 孙鹏宇张艳玲荆玉明张信基张哲欢黎诚耀陈白虹谭万龙李红卫
- 关键词：腺病毒绿色荧光蛋白荧光定量PCR
- 核心抗体阳性合格献血者隐匿性乙肝病毒感染分子生物学特性及追踪结果的研究被引量：29
- 2016年
- 目的了解我国核心抗体阳性合格献血者隐匿性乙肝病毒感染(OBI)情况,分析血清学和分子生物性特征。方法对HBs Ag(-)、NAT检测无反应性的合格献血者血浆,进行乙肝两对半检测和anti-HBs定量检测,对核心抗体阳性标本进行病毒核酸提取,和BCP/PC区及S区巢式PCR扩增,对扩增结果阳性产物纯化后进行基因测序及序列分析,同时进行QPCR定量检测。对HBV DNA阳性的献血者进行追踪检测和分析。结果在1 033名合格献血者中,抗-HBc(+)占47.4%,阳性率随年龄的增长而增加(P<0.001),30岁以下年龄组为32.6%而到50岁以上年龄组为为69.8%。777/1033为抗-HBs(+),占75.2%。在抗-HBc(+)人群中共检出14例HBV DNA(+),其中7例抗-HBs滴度在100 IU/L以上,在抗-HBc(+)合格献血者中OBI阳性率为2.86%。8/14例OBI为B型,1例为C型。7/14能追踪的标本中,1例发现抗-HBe血清转换为阳性。所有追踪标本的病毒均变成检不出。5例BCP/PC区序列发生突变,3例S区氨基酸变异。结论经HBs Ag及NAT检测合格的抗-HBc(+)献血者,其血液中仍有一定几率含有HBV DNA,存在经输血传播病毒的威胁,提示在乙肝高流行地区需进一步提高核酸检测方法的灵敏度,必要时可增加抗-HBc的检测。
- 叶贤林李彤孙淑君许晓绚杜鹏曾劲峰朱为刚杨宝成黎诚耀Jean-Pierre Allain
- 关键词：献血者乙肝病毒核心抗体
- 输血医学专业高等教育模式的探索被引量：30
- 2012年
- 目的高质量输血医学学历教育是培养专业人才基本素质,进而提升输血医学行业服务质量与水平的根本保障。方法以南方医科大学临床医学5年本科专业资源为依托,结合高质量的国内与国际输血医学教育资源,有计划、有目标、分阶段、分层次地开展先进理念的教学模式,特别吸收发达国家的先进知识与技术,补充专业教学内容,突出先进性,提高教学质量,改善输血医学专业学生知识结构。建立教学效果评价制度,以保证课程水平和教学质量的重要环节。结果从全校公共基础课入手,注重临床专业课程(执业医师考试科目)与生物技术专业课程的结合,遴选26门课程进行学习;强化4门输血医学专业主干课程进行重点建设,使得核心课程模块可以满足输血医学相关领域中临床型和技术型两类人才培养的有机结合。挖掘国内优秀资源,聘请血液中心、医院输血科和研究机构的专家,结合各自优势整合在输血医学专业课中,开展专题内容讲授。同时,聘请美国耶鲁大学医学院输血医学领域著名专家,以远程教学模块形式,在《输血技术学》和《临床输血学》的课程之上,独立地开展新知识和新技术的教学工作。理论课程实施以知识点为模块,联系基础、拓展应用的构建模式,在选修课模块中,根据大学生文化素质教育的具体要求,从校50多门文化素质教育课程中遴选出10门课,以带动我校输血医学专业教学水平的整体提高。实验课程设计了自主设计性实验和综合设计性实验。实践教学以培养输血医师和输血技师为基本目标,安排学生在教学医院进行42周的临床实习和10周的血液中心(血站)技能实习。结论明确南方医科大学输血医学专业为临床医学的一个方向,最大限度促进了专业教育国际化进程,初步制定了符合我国输血医学专业岗位需求的输血医学本科高等教育方案,使毕�
- 王文敬李婷婷张玲黎诚耀
- 关键词：输血医学高等教育教学模式
- 宠犬应接种钩端螺旋体菌苗
- 1995年
- 随着宠物热的兴起,狂犬病作为一种人畜共患病已被广泛认识,然而对可在人犬间传播的另一种人畜共患病——钩端螺旋体病,则缺乏应有的重视。钩端螺旋体(以下简称钩体),又称细螺旋体,可分为致病性及非致病性两类。致病性钩体可引起人和多种动物(包括犬在内)的钩体病,此病几乎遍布世界,在我国亦广泛存在。
- 高荣凯王世若黎诚耀
- 关键词：钩端螺旋体菌苗接种
- 调节性T淋巴细胞对急性期布鲁菌病患者治疗效果的影响被引量：5
- 2017年
- 目的调查布鲁杆菌感染后宿主的体液和细胞免疫应答情况，Foxp3^＋在布鲁菌病患者治疗过程中的变化，阐明宿主产生免疫抑制对布鲁菌病治疗效果的影响。方法2015年7月至2015年11月，黑龙江农垦总局总医院感染三科住院的急性期布鲁菌病患者65例。标准治疗组28例，根据患者情况选择抗菌药物进行3个疗程的标准治疗，每个疗程20d，疗程间隔10d；免疫增强剂组37例，在标准治疗的基础上增加免疫增强药物。另选取健康体检者30名为健康对照组。在治疗前和每个疗程结束时，采用流式细胞术检测患者外周血中CD3^＋CD4^＋Foxp3^＋Treg含量变化。符合正态分布的数据以孑±S表示。两组间比较采用t检验，多组问的比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK法。不符合正态分布的数据进行多个独立样本的非参数检验。结果65例急性期布鲁菌病患者第1疗程结束时外周血中Foxp3^＋ Treg含量为2．83％，第2疗程结束时为3．77％，第3疗程结束时为4．03％，均高于健康对照组的1．69％（￡值分别为5．97、9．05和5．66，均P〈0．01）。第1疗程结结束时，标准治疗组和免疫增强剂组间外周血Foxp3^＋Treg含量差异无统计学意义（t=0．33，P〉0．05），但均高于健康对照组（￡值分别为7．09和4．94，均P〈0．01）。第2疗程结束时，免疫增强剂组患者外周血Foxp3^＋Treg含量高于标准治疗组，差异有统计学意义（t=2．22，P〈0．01），且两组均高于健康对照组（f值分别为10．79和7．25，均P〈0．01）。第3疗程结束时，免疫增强剂组患者外周血Foxp3^＋ Treg含量高于标准治疗组和健康对照组，差异均有统计学意义（t值分别为6．02和6．45，P〈0．01）。结论急性期布鲁菌病患者经过添加免疫增强剂的治疗，外周血Foxp3^＋Treg含量呈现持续上升的趋势，并一直维持在一定高位水平。推测，过�
- 胡飞环张国侠田艳君张立杰刘佰玲王文敬黎诚耀
- 关键词：布鲁菌病T淋巴细胞调节性FOXP3
- 羊布鲁杆菌外膜蛋白19(OMP19)的表达及鉴定被引量：3
- 2016年
- 目的构建可表达羊布鲁杆菌外膜蛋白19(OMP19)的真核表达载体,研究OMP19对宿主细胞凋亡的作用。方法以羊布鲁杆菌M5-90疫苗株基因组为模板,PCR扩增脂化型外膜蛋白19(L-OMP19)与非脂化型外膜蛋白19(U-OMP19)基因,产物连接至p Zero Back/blunt载体;经双酶切鉴定、测序正确的基因亚克隆到用于包装慢病毒的表达载体p HAGE-CMV-MCS-IZsGreen上,双酶切鉴定,构建含正确L-OMP19、U-OMP19基因的真核表达载体p HAGE-L-OMP19与p HAGE-U-OMP19。分别将构建好的载体转染293FT细胞、Huh7.5.1细胞和JEG-3细胞,用Western blot法及免疫荧光技术检测L-OMP19、U-OMP19蛋白的表达,用藻红蛋白标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果构建能在细胞内表达L-OMP19和U-OMP19基因的真核表达载体p HAGE-L-OMP19和p HAGE-U-OMP19,二者转染细胞后表达的L-OMP19和U-OMP19蛋白可与特异性抗体反应;L-OMP19和U-OMP19不引起Huh7.5.1细胞凋亡,但可引起JEG-3细胞的大量坏死。结论成功构建可用于慢病毒包装的L-OMP19和U-OMP19真核表达载体,胞内重组表达的脂蛋白OMP19具有良好的抗原性,为研究布鲁杆菌脂蛋白在宿主细胞内作用机制提供实验材料。
- 何作萍罗佩芳胡飞环翁云层王文敬黎诚耀
- 关键词：布鲁杆菌布鲁杆菌病真核表达细胞凋亡
- “输血医学”本科高等教育课程建设
- 目的制定符合我国输血医学专业岗位需求的输血医学本科高等教育方案,从根本上提高输血医学行业质量与水平。方法聘请国内外输血医学领域知名专家教授进行专业课的教学及课程建设工作,课程建设遵循'加强基础、注重实践、增强素质、培养能...
- 王文敬黎诚耀
