刘在斯
- 作品数：8 被引量：24H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家肉鸡产业技术体系建设专项哈尔滨市科技攻关计划项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立
- 为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法,以原核表达的HLJ09MDJ-1(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-EL...
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- 关键词：禽白血病病毒单克隆抗体多克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 文献传递
- 禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2012年
- 为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒(ALV)的方法,以原核表达的HB09JY03(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。该方法对p27的最小检出量为1.25ng/mL,且与禽类常见的病毒鸡传染性支气管炎病毒、马立克病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒等无交叉反应。动物感染试验结果表明,用该方法可在感染动物12d后有效检测泄殖腔分泌物中的禽白血病病毒。利用该方法检测了491份蛋清样品和180份肛拭子样品,与PCR方法的符合率分别为96.5%和93.8%。证实,该方法具有方便、快速、敏感等优点,该方法的建立为ALV的早期诊断及种鸡场的净化提供了有效工具。
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- 关键词：禽白血病病毒单克隆抗体多克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 禽流感病毒NS1蛋白在杆状病毒表达系统中的表达被引量：3
- 2012年
- 为获得纯化的禽流感病毒(AIV)的NS1蛋白,将A/chicken/Guangxi/10/99(H9N2)(CK/GX/10/99)NS1全长核苷酸克隆至杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,构建了重组转移载体pFastBacHTA-NS1,然后转化入DH10Bac感受态细胞中制备重组杆粒,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得表达NS1基因的重组杆状病毒。用重组杆状病毒转染昆虫细胞sf9进行NS1蛋白的表达,通过SDS-PAGE电泳、Western blot、间接免疫荧光(IFA)对表达的目标蛋白进行分析。结果表明,构建了含NS1基因的重组杆状病毒,分子质量约30ku的重组蛋白得到了表达,为NS1的相关功能研究奠定了基础。
- 李东卫郭莹莹刘在斯王世达沈楠文辉强焦同路王靖飞
- 关键词：蛋白纯化
- 禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立
- 为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法，以原核表达的HB09JY03(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体，p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心EusA(DAs-ELISA...
- 负炳岭高玉龙王笑梅刘文李德龙秦立廷刘在斯吴关祁小乐王永强高宏雷
- 关键词：禽白血病病毒单克隆抗体多克隆抗体
- 文献传递
- 我国部分地区种鸡禽肺病毒感染的血清学调查被引量：12
- 2012年
- 禽肺病毒（Avian pneumovirus,APV）又称火鸡鼻气管炎病毒（Turky rhinotracheitis virus,TRTV）[1]。禽肺病毒属于副黏病毒科肺病毒亚科偏肺病毒亚属[2]。已经确定禽肺病毒可引起火鸡呼吸道疾病和产蛋量下降。虽然广泛认为禽肺病毒是鸡肿头综合征的因素之一。
- 贠炳岭刘在斯吴关李久宽秦立廷祁小乐王永强高宏雷高玉龙王笑梅
- 关键词：血清学调查种鸡鼻气管炎病毒鸡呼吸道疾病鸡肿头综合征产蛋量下降
- 盖塔病毒SC483株cDNA感染性克隆的构建
- 2023年
- 【背景】盖塔病毒(Getah virus,GETV)是一种由蚊虫传播的病毒,分类学上属于披膜病毒科甲病毒属成员。该病毒宿主范围广,可感染猪、马、牛、狐狸等多种哺乳动物,人也可以感染,但在人群中造成的危害尚不知晓。动物感染主要临床表现为发热、皮疹、关节炎、繁殖障碍和死胎。GETV在世界范围内流行较为广泛,近年来在我国的流行呈上升趋势,2018年我国南方多个猪场爆发该病,GETV在畜禽养殖及公共卫生方面的危害渐渐受到人们的关注。目前,尚无用于预防和治疗盖塔病毒感染的商业化疫苗和药物。由于对GETV研究较少,其生物学特性、对不同物种的致病性和致病机制以及流行趋势在很大程度上均是未知的。【目的】建立高效的GETV反向遗传操作平台,为深入研究GETV基因组结构与功能、致病机制以及开发新型疫苗奠定基础。【方法】采取化学合成的方式人工合成了两端分别含有锤头状核酶(HamRz)和丁肝病毒核酶(HdvRz)序列的GETV SC483株基因组全长,并克隆至低拷贝pOK12-CMV载体中,从而获得含有GETV SC483株基因组全长cDNA克隆的重组质粒pGETV-SC483。将纯化的重组质粒pGETV-SC483转染BHK-21细胞进行病毒拯救。对拯救病毒进行连续传代、鉴定以及生物学特性分析,并对感染性克隆质粒pGETV-SC483在大肠杆菌中的遗传稳定性进行验证。【结果】重组质粒pGETV-SC483转染BHK-21细胞后,48 h即可观察到GETV感染引起的典型细胞病变,获得的拯救病毒命名为rSC483。分别提取拯救病毒和亲本病毒基因组RNA,对病毒基因组进行RT-PCR扩增、Not I酶切以及序列测定。结果表明,拯救病毒不同于亲本病毒,其含有人为引入以消去Not I酶切位点的G4332A突变的分子标记。使用GETV特异性抗体作为检测抗体的间接免疫荧光试验和病毒粒子形态学电镜负染观察结果进一步表明,GETV拯救成功。噬斑形成试验和一步�
- 杜炳辰王铭刘春国王世达魏新宇路雅曼孙振钊刘在斯魏丽丽王靖飞杨德成
- 关键词：盖塔病毒病毒拯救
- 禽白血病病毒衣壳蛋白p27基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2012年
- 从J亚群禽白血病病毒(ALV-J)HB09JY03株感染的DF-1细胞的冻融裂解液中提取DNA,通过PCR方法扩增出约720bp的gag-p27基因片段,克隆至pMD18-T载体。鉴定正确后,将该片段克隆至pET-30a(+)原核表达载体,经IPTG诱导表达。表达产物经His Trap TMHP纯化后,测蛋白浓度达到9mg/mL。用兔抗自然p27蛋白阳性血清进行Western blot检测,表明重组p27蛋白有抗原反应活性。免疫新西兰大白兔后,产生的抗体与禽白血病全病毒抗原可以发生特异性反应。所制备的重组p27蛋白和多克隆抗体将在ALV的抗原分析、血清学诊断等方面有着重要的应用价值。
- 李德龙刘在斯贠炳岭吴关高玉龙秦立廷祁小乐王永强高宏雷刘思当王笑梅
- 关键词：禽白血病P27基因原核表达多克隆抗体
- 禽白血病病毒群特异性抗原单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2012年
- 为制备禽白血病病毒(ALV)群特异性抗原的单克隆抗体(MAb),本研究从ALV-J病毒株感染DF-1细胞的冻融裂解液中提取DNA,通过PCR方法扩增出ALV群特异性抗原p27基因,并将其克隆至pMD18-T载体中,酶切鉴定后进行序列测定和分析。最后将p27基因亚克隆至载体pET-30a(+)中,转化受体菌BL21,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE检测获得融合蛋白。经过western blot检测,表达的蛋白具有良好的反应原性。将纯化的p27蛋白作为抗原,免疫7周龄BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得5株能稳定分泌特异性MAb的杂交瘤细胞株。5株MAb与纯化的p27蛋白以及不同亚群ALV可以发生特异性反应。所制备的MAb为禽白血病的诊断方法研究奠定了基础。
- 贠炳岭李德龙胡晓亮刘在斯秦立廷吴关刘文祁小乐王永强高宏雷高玉龙王笑梅
- 关键词：禽白血病病毒P27蛋白原核表达单克隆抗体
