冷炫
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中山大学中山医学院眼科学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 糖尿病视网膜病变中组蛋白3乙酰化参与乙酰肝素酶调控VEGF基因转录的初步研究
- 2014年
- 目的 研究高糖诱导人视网膜血管内皮细胞（HRECs）中组蛋白3乙酰化（H3ac）、乙酰肝素酶（HPA）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的相关性,明确一种或多种能够参与HPA上调VEGF表达的H3乙酰化赖氨酸残基.方法 实验研究.在中山大学中山眼科中心将该实验分为两组,正常组和高糖组（葡萄糖含量30mmol/L）.免疫荧光染色法观察两组H3乙酰化赖氨酸残基9（H3K9ac）、H3K14ac、H3K18ac、H3K27ac和H3K56ac在HRECs的表达定位.蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测两组间HPA、VEGF和各H3乙酰化赖氨酸残基的蛋白表达变化.结果 免疫荧光染色结果显示,高糖组HRECs细胞核中各H3乙酰化赖氨酸残基的荧光较正常组增强.Western blot检测结果示,与正常组相比,高糖组中HPA、VEGF、H3K9ac和H3K14ac的蛋白表达均有明显升高,差异有统计学意义（PHPA=0.016,PVEGF=0.014,PH3K9ac=0.027,PH3K14ac=0.045）.结论 高糖诱导的HRECs中,H3乙酰化在HPA参与VEGF基因转录调控的过程中发挥作用,并且从蛋白水平证实乙酰化发生在H3K9和H3K14.
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- 关键词：乙酰肝素酶血管内皮生长因子糖尿病视网膜病变
- 低氧诱导人视网膜微血管内皮细胞核中乙酰肝素酶对血管内皮生长因子基因转录调控研究被引量：2
- 2013年
- 目的通过观察低氧诱导人视网膜血管内皮细胞（HRECs）胞核中乙酰肝素酶（HPA）和RNA聚合酶II（Pol Ⅱ）的表达分布、两者相互结合及其与血管内皮生长因子（VEGF）基因启动子的作用，探讨在低氧诱导视网膜新生血管形成中HPA对VEGF基因转录调控的作用。方法用低氧模型模拟剂Cocl2建立低氧模型（含Cocl2100μmol／L的培养液培养48h）。免疫荧光染色法观察HPA与PolⅡ的表达；免疫沉淀法半定量分析HPA及PolⅡ的相互结合作用；染色质免疫沉淀（ChIP）联合实时定量PCR分析两组细胞中HPA与VEGF基因启动子之间的相互作用。结果（1）免疫荧光染色结果显示低氧诱导组HRECs胞核内HPA荧光和PolII荧光均较正常对照组增强，且低氧诱导组胞核内HPA分布与PolⅡ相吻合。（2）免疫沉淀结果表明在低氧诱导HRECs中HPA及PolⅡ相互结合共同作用，而对照组中HPA及PolⅡ则无结合。（3）ChIP联合实时定量PCR实验结果显示HPA及PolⅡ与VEGF启动子结合的高发生区段主要位于VEGF启动子序列-1165与-984之间，低氧诱导HRECs细胞核内HPA及PolII结合VEGF基因启动子水平均较正常组升高（t=-13．591，P=0．001；t=-3．188，P=0．049）。结论在低氧诱导的HRECs中，核内HPA与VEGF基因启动子直接结合，并参与了VEGF基因转录活性的调控。
- 王敬伟胡洁宋新冷炫田景毅吕林
- 关键词：MICROVASCULARENDOTHELIALENDOTHELIALIMMUNOPRECIPITATION
