贺晨
- 作品数：15 被引量：25H指数：3
- 供职机构：浙江省医学科学院更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金浙江省医学科学院青年基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 兔骨髓间充质干细胞分离培养及向成骨细胞表型的诱导分化被引量：4
- 2004年
- 目的 观察兔骨髓间充质干细胞 (MSC)体外培养增殖的生长特征及体外诱导条件下的成骨能力情况。方法 抽取兔髂骨及胫骨的骨髓液 ,经密度梯度离心分离出MSC ,用塑料培养板贴壁培养进一步纯化MSC ,并培养增殖。观察MSC的生长特征 ,测定其生长曲线及贴壁率。对第 2代MSC进行成骨矿化诱导 ,测定其碱性磷酸酶 (ALP)活性及成骨矿化情况。结果 MSC为贴壁生长 ,以均一的梭形的成纤维细胞样生长 ,增殖能力强。在成骨诱导剂作用下 ,MSC具有成骨能力 ,诱导后ALP活性明显提高 ,并且出现矿化结节。结论 获得的兔骨髓MSC生长增殖旺盛 ,分离培养MSC是可行的 ,且MSC具成骨分化潜能。
- 张文元杨亚冬贺晨房国坚陈勇
- 关键词：骨髓间充质干细胞成骨细胞细胞分化
- 大鼠骨髓间充质干细胞的分离增殖及分化潜能活性
- 目的:建立大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)体外分离、纯化、增殖的方法,并观察其体外分化为成骨细胞及软骨细胞的潜能活性.方法:取SD大鼠的股骨及胫骨,冲取骨髓液,采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化MSC,增殖,并测定其...
- 张文元杨亚冬房国坚贺晨陈勇
- 关键词：SD大鼠间充质干细胞分化成骨细胞软骨细胞
- 亲和层析法纯化系统性红斑狼疮特异性60KDRo/SSA抗原被引量：1
- 2005年
- 目的:建立亲和层析法纯化Ro/SSA自身抗原系统中60KD组分的方法。方法:从猪脾提ENA(可提取核抗原),以硫酸铵沉淀、离子交换层析进行初步纯化。挑选单纯抗60KDSSA抗体阳性的病人的血清,制备亲和层析柱。用ELISA法检测所制备的抗原。结果: 60KDSSA抗体阳性标准血清ELISA检测为阳性,Sm和RNP、Jo-1、Scl-70的标准抗血清为阴性。结论:该方法可获得高纯度的抗原,可用于ELISA检测等目的。
- 贺晨
- 关键词：系统性红斑狼疮特异性可提取核抗原抗原系统标准血清
- 甲胎蛋白单克隆抗体酶联免疫诊断试剂盒的研制及应用被引量：2
- 2005年
- 目的 为研制一种特异性强、灵敏度高、操作简便快速的甲胎蛋白（AFP）单克隆抗体酶联免疫诊断试剂盒，用于定量检测血清中的AFP。方法 将自行研制的AFP单克隆抗体（AFP-McAb）标记辣根过氧化物酶，AFP多抗（AFP-PcAb）包被微孔反应板，研制成AFP单克隆抗体酶联免疫诊断试剂盒。血清中的AFP与包被于微孔板上的AFP多抗结合，再与AFP酶标抗体结合，在TMB底物液作用下形成肉眼可见的蓝色。结果 该诊断试剂盒对305份临床病人血清进行了检测，结果与放射免疫法相比总符合率为98．6％；对215份临床病人血清进行检测，结果与化学发光法相比总符合率为99．0％；灵敏度达10ng／ml。结论 该试剂盒检测AFP特异性强、灵敏度高、操作简便、结果准确，具有临床推广应用价值。
- 房国坚边敏章蒋玉燕贺晨张文元杨亚冬
- 关键词：甲胎蛋白单克隆抗体诊断试剂盒酶联免疫辣根过氧化物酶病人血清
- 诱导兔骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞和软骨细胞的研究被引量：1
- 2004年
- 目的 :探讨兔骨髓间充质干细胞 (MSC)体外分离培养、增殖 ,以及向成骨细胞和软骨细胞定向诱导分化的条件 ,为骨、软骨缺损的修复和重建提供种子细胞。方法 :抽取兔髂骨及胫骨的骨髓液 ,经密度梯度离心法及塑料板贴壁培养法分离纯化出MSC ,并增殖。对第二代MSC进行成骨矿化诱导 ,测定其碱性磷酸酶 (ALP)活性及成骨矿化情况。并对第二代MSC进行诱软骨特定培养液诱导 ,对诱导细胞进行甲苯胺蓝染色 ,测定诱导后的软骨细胞表型。结果 :MSC为梭型的成纤维细胞样贴壁生长 ,增殖能力强。在成骨诱导剂作用下 ,MSC具有成骨能力 ,诱导后ALP活性明显提高 ,并且出现矿化结节沉积。在成软骨诱导剂作用下 ,可见细胞由成纤维样的梭形变为椭圆形及肾形 ,并分泌基质 ,甲苯胺蓝染色呈阳性 ,表现为软骨细胞分化特点。结论 :在特定诱导条件下 ,兔骨髓MSC体外可定向诱导分化为成骨细胞和软骨细胞 ,可用于组织工程骨和软骨组织的修复和重建。
- 张文元杨亚冬贺晨房国坚陈勇
- 关键词：软骨细胞成骨细胞甲苯胺蓝染色骨矿化定向分化定向诱导分化
- 克隆化兔骨髓基质干细胞系的建立及其生物学特性研究被引量：1
- 2005年
- 目的 建立克隆化兔骨髓基质干细胞（MSC）系，并对其生物学特性进行研究，为组织缺损修复寻找理想的种子细胞提供新的途径。方法 应用密度梯度离心和贴壁分离培养方法，从兔骨髓中获得原代骨髓MSCs，再应用克隆化分离培养技术，建立克隆化扩增的骨髓MSC系。体外传代培养、低温冻存复苏、形态学观察、生长曲线测定、染色体分析和分化潜能鉴定。结果 建立了一株克隆化兔骨髓MSC系。该细胞系在含10％胎牛血清的LG-DMEM中连续传代至第32代，仍保持旺盛的增殖能力，P4和P32代细胞染色体众数保持稳定的二倍体核型，成骨细胞诱导试验阳性。结论 获得一株具有旺盛的增殖能力和分化潜能，遗传性能稳定的克隆化兔骨髓MSC系。
- 房国坚边敏章贺晨张文元杨亚冬陈勇
- 关键词：克隆化基质干细胞细胞系
- 克隆化兔骨髓基质干细胞系的建立及其生物学特性
- 2006年
- 目的:建立克隆化兔骨髓基质干细胞系,为组织缺损修复研究寻找理想的种子细胞提供新的途径。方法:实验于2004-09/2005-12在浙江省医学科学院生物工程研究所完成。①取3个月龄新西兰白兔,无菌抽取骨髓液,经密度梯度离心和贴壁培养,获得原代培养骨髓基质干细胞。用有限稀释法进行克隆化培养,选择单细胞克隆增殖细胞,进行扩大培养和液氮冻存保种。②取对数生长期第2,15和32代克隆化骨髓基质干细胞,用四甲基偶氮唑盐法测定其吸光值(A值),绘制生长曲线。③取第4和32代对数生长期骨髓基质干细胞,按常规方法制作染色体标本,进行染色体分析。④取第5代对数生长期骨髓基质干细胞,用成骨诱导试验进行体外分化潜能鉴定。⑤取第5代对数生长期的骨髓基质干细胞,按常规方法测定最适细胞接种密度。结果:①克隆化兔骨髓基质干细胞系的建立结果:获得一株克隆化兔骨髓基质干细胞系,其细胞形态为均一的长梭形,体外连续传代培养至32代,细胞仍保持旺盛的增殖能力。经-196℃冻存复苏后仍保持良好的生长状态。②生长曲线:克隆化骨髓基质干细胞的第2,15和32代细胞生长曲线基本相同,细胞增殖速度没有明显的下降趋势。③染色体分析:第4和32代克隆化兔骨髓基质干细胞的染色体众数均为44条,结构未见异常。显示该细胞在体外经过32代培养,仍保持稳定的二倍体核型。④最适接种密度:第5代对数生长期骨髓基质干细胞,经常规方法测定,以1×103/cm2的接种密度为最适接种密度。⑤体外分化潜能:第6代克隆化骨髓基质干细胞,在向成骨细胞诱导条件下,4,8,12碱性磷酸酶的表达均显著高于对照组[(375.41±13.17)比(239.38±7.33)nkat/L,(503.77±13.34)比(249.22±5.17)nkat/L,(605.95±10.84)比(298.73±8.17)nkat/L,P<0.01];茜素红染色显示有钙化结节形成,对照组为阴性。表明克隆化兔骨髓基质干
- 房国坚边敏章贺晨张文元杨亚冬陈勇
- 关键词：克隆细胞间质干细胞细胞系
- 干细胞研究近况
- 干细胞就是一类有无限自我更新能力且在适当时能分化为多种不同细胞的细胞。受精卵被称为全能干细胞(totipotent),因为它能产生所有的胚内组织和胚外组织并最终形成个体。科学家用多能性(pluripotent)来形容能产...
- 贺晨
- 系统性红斑狼疮特异性抗原60KD Ro/SSA的提取和纯化
- 2005年
- 目的建立从猪脾纯化Ro/SSA自身抗原系统中60KD组分的方法。方法从猪脾提取ENA(可提取核抗原),以硫酸铵沉淀结合离子交换层析分离ENA蛋白组分,并用对流免疫电泳检测60KDSSA抗原的活性,以得到纯化60KDSSA抗原的具体条件。结果60KDSSA抗原在Tris-HCl缓冲液(pH8.3)中的硫酸铵沉淀范围是硫酸铵饱和度50%～60%。60KDSSA抗原在50mMTris-HCl缓冲液(pH8.3)+NaCl中的DE52离子交换层析洗脱范围为电导值35～40ms/cm。结论结合硫酸铵沉淀和DE52离子交换层析两种纯化方法所得的60KDSSA抗原相对于其它ENA有较高的纯度,并能有效分离中SSA中60KD、52KD两个组分。
- 贺晨
- 关键词：RO/SSA硫酸铵沉淀离子交换层析可提取核抗原系统性红斑狼疮特异性抗原
- 同基因骨髓基质干细胞移植促进骨髓细胞诱导免疫耐受的实验研究
- 2007年
- 目的:探讨受体来源的同基因骨髓基质干细胞(MSC)在促进异基因骨髓细胞诱导小鼠皮肤移植免疫耐受中的作用。方法:第-5^-3天,C57BL/6(H-2b)受体小鼠每天腹腔注入0.5 ml抗淋巴细胞血清(ALS),共3天。第0天,5×105源自C57BL/6的MSC及2×107源自BALB/c(H-2d)的骨髓细胞(BMC),通过尾静脉注入到受体鼠。第2天,受体鼠腹腔注入200 mg/kg的环磷酰胺(CP)。第6天进行从BALB/c到C57BL/6的尾-尾皮肤移植。每天观察移植皮片存活情况,共观察100天。并于骨髓细胞移植后第30天、50天及70天对受体小鼠外周血进行嵌合体检查。结果:同基因MSC的输注能促进异基因BMC的植入。与ALS+BMC+CP移植组相比,同基因MSC协同高剂量的异基因BMC移植(即ALS+MSC+BMC+CP移植组)能适度地延长移植皮片的存活时间。在第30天、50天及70天,ALS+BMC+CP移植组及ALS+MSC+BMC+CP移植组受体小鼠体内能检测到供体骨髓源性细胞,ALS+MSC+BMC+CP移植组的嵌合率较高,随着时间推移,嵌合率下降,而且移植皮片存活时间与嵌合率具一定相关性。结论:同基因MSC能协助异基因BMC植入,形成嵌合体,促进免疫耐受的诱导,使移植皮片存活时间得到适度地延长。
- 张文元杨亚冬房国坚贺晨陈勇
- 关键词：骨髓基质干细胞骨髓细胞嵌合体免疫耐受
