- 筛选小鼠Cltb启动子顺式元件结合蛋白的酵母单杂交文库的构建被引量：1
- 2015年
- 目的利用酵母单杂交系统筛选与Cltb基因启动子结合的顺式元件,获得调控Cltb基因表达的转录因子,阐明Cltb基因的转录调控机理。方法首先,构建表达Cltb调控序列的诱饵质粒p Bait-Ab Ai,并将诱饵质粒转入Y1HGold菌株,构建可稳定表达"诱饵-报告子"的酵母菌株;然后,运用SMARTTM技术构建小鼠肺组织酵母单杂交c DNA AD融合表达文库,并进行c DNA文库的筛选。结果成功构建了筛选Cltb启动子顺式元件结合蛋白的酵母单杂交文库,该文库的转化效率为:9.35×105CFU/μg。通过对文库的筛选最后获得了5个阳性克隆并测序,得到5个可编码结合蛋白的基因,分别是Srrt、hnRNPs A/B、Irf1、NKx2.5和Zfp953。结论所构建的酵母单杂交文库符合实验要求,筛选的5个转录因子为研究Cltb基因表达调控奠定了基础。
- 吕学军陆卫忠张永娟郭亮李少莹李玉英钱桂生
- 关键词：转录调控
- 酵母双杂交筛选Clathrin相互作用蛋白被引量：2
- 2014年
- 目的应用酵母双杂交技术从小鼠肺cDNA文库中筛选与Clathrin相互作用蛋白,进一步阐明Clathrin在急性肺损伤和急性呼吸窘迫症(ALI/ARDS)发生时肺泡上皮极性损伤中的具体作用机制。方法首先构建酵母双杂交pSos-Clathrin诱饵载体,酶切鉴定,然后确定Clathrin诱饵蛋白无自激活特性并检测了Clathrin诱饵蛋白的表达;最后筛选小鼠肺cDNA文库并对筛选得到的阳性克隆进行回转验证,对回转验证结果为阳性的文库克隆质粒送检测序,分析克隆序列。结果酵母双杂交筛选小鼠肺cDNA文库得到4个与Clathrin相互作用蛋白,分别是:腺苷酸环化酶关联蛋白1,细丝蛋白α,DAP凋亡诱导蛋白激酶2和G蛋白耦联受体激酶6。结论 Clathrin参与细胞极性调节、炎症损伤和细胞凋亡等过程。
- 吕学军陆卫忠张永娟郭亮李少莹李玉英钱桂生
- 关键词：急性肺损伤细胞极性酵母双杂交
