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CYP19A1基因rs10046位点多态性与乳腺癌易感性的Meta分析: 2016年; 目的探讨细胞色素P450芳香化酶（cytochrome P450 family 19 subfamily A member 1,CYP19A1）基因rs10046位点（C〉T）多态性与乳腺癌易感性的关系。方法计算机检索PubMed、Embase、中国期刊全文数据库（China National Knowledge Infranstructure,CNKI）、维普科技期刊全文数据库、万方数据知识服务平台等中英文数据库,获取关于CYP19A1基因多态性与乳腺癌易感性的研究结果。采用Stata 11.1软件对各项原始研究结果进行Meta分析,计算合并OR值及95%可信区间,并评估发表偏倚。结果共纳入15项病例对照研究,其中乳腺癌病例组9241人,对照组12 681人。Meta分析结果显示CYP19A1基因rs10046位点（C〉T）多态性与乳腺癌的发生风险无统计学差异（P〉0.05）。（Tvs.C模型：OR=0.929,95%CI为0.778~1.110,P=0.420;TT vs.CC模型：OR=0.902,95%CI为0.671~1.211,P=0.492;TCvs.CC模型：OR=0.996,95%CI为0.929~1.067,P=0.909;TT＋TCvs.CC模型：OR=0.934,95%CI为0.784~1.112,P=0.442;TTvs.CC＋TC模型：OR=0.920,95%CI为0.699~1.209,P=0.548）,民族、对照组来源、文献质量评分高低的分层分析,亦显示相同的结果。结论 CYP19A1基因rs10046位点（C〉T）多态性与乳腺癌的发生风险无明显相关。; 游路宽陈文福陈初鹏陆卫忠; 关键词：多态性乳腺癌 META分析

酵母双杂交筛选Clathrin相互作用蛋白被引量：2: 2014年; 目的应用酵母双杂交技术从小鼠肺cDNA文库中筛选与Clathrin相互作用蛋白,进一步阐明Clathrin在急性肺损伤和急性呼吸窘迫症(ALI/ARDS)发生时肺泡上皮极性损伤中的具体作用机制。方法首先构建酵母双杂交pSos-Clathrin诱饵载体,酶切鉴定,然后确定Clathrin诱饵蛋白无自激活特性并检测了Clathrin诱饵蛋白的表达;最后筛选小鼠肺cDNA文库并对筛选得到的阳性克隆进行回转验证,对回转验证结果为阳性的文库克隆质粒送检测序,分析克隆序列。结果酵母双杂交筛选小鼠肺cDNA文库得到4个与Clathrin相互作用蛋白,分别是:腺苷酸环化酶关联蛋白1,细丝蛋白α,DAP凋亡诱导蛋白激酶2和G蛋白耦联受体激酶6。结论 Clathrin参与细胞极性调节、炎症损伤和细胞凋亡等过程。; 吕学军陆卫忠张永娟郭亮李少莹李玉英钱桂生; 关键词：急性肺损伤细胞极性酵母双杂交

一条肺癌多药耐药相关基因的功能鉴定及染色体定位: 2004年; 目的　进一步分析从肺癌多药耐药细胞株 (SPC A 1/CDDP)克隆出的差异表达基因染色体的定位 ,并鉴定其耐药相关功能。方法　登录美国国家生物技术信息中心网 (www ncbi nlm nih gov) ,根据克隆的目的基因序列数据 ,查询人类基因库 ,分析确定该基因在人类染色体上的位置。以DNA重组技术构建该目的基因的反义表达载体 ,电穿孔法将其转染多药耐药细胞株SPC A 1/CDDP ,采用半定量RT PCR研究该基因表达受抑情况 ,并以MTT法分析转染细胞对几种化疗药物的敏感性改变。结果　电子信息学确定该目的基因定位在人类染色体的 19q13 3～19q13 4位点上。成功构建该基因的反义表达载体 ,转染反义表达载体的SPC A 1/CDDP细胞的目的基因mRNA含量明显减少 ,即基因表达受抑。MTT药敏测试发现转染了反义表达载体的SPC A 1/CDDP细胞对顺铂、阿霉素、5 氟尿嘧啶、长春新碱、足叶乙苷和丝裂霉素 6种化疗药物的耐药指数分别是 3 87、3 2 8、6 71、2 6 5、2 11、5 0 2 ;对前五种化疗药物的耐药指数与对照细胞相比分别下降了 2～3倍。表明该基因与肿瘤细胞的化疗敏感性密切相关。结论　该差异表达基因是一条肺癌耐药相关新基因 ,其在人类染色体的位置为 19q13 3～ 19q13 4。; 黄桂君钱桂生陆卫忠余时沧李玉英李树均陈杰; 关键词：肺肿瘤基因 MDR 反义技术染色体

canstatin基因转染对肺癌A549细胞和血管内皮细胞增殖与凋亡的影响被引量：4: 2005年; 　背景与目的　肿瘤的生长和转移需要大量新血管的生成,人血管能抑素(canstatin)是新近发现的高效内源性血管生成抑制剂,其抑制血管内皮细胞的作用已引起人们广泛关注。本研究的目的是探讨can statin基因在人肺癌A549细胞和人脐静脉内皮细胞HUV ECC中的表达及意义。方法　将canstatin基因通过电穿孔的方法转染人肺癌细胞A549和人脐静脉内皮细胞HUV ECC,行G418筛选获得转基因细胞克隆。用SDS PAGE电泳检测canstatin蛋白在转基因细胞培养上清液中的表达,以流式细胞仪分析细胞周期,并比较转基因和未转基因细胞的生长特性。结果　canstatin在转染组A549 细胞和ECC细胞表达并分泌至上清液中。canstatin基因转染组ECC的凋亡率(16.04%)显著高于空载体组(0.43%)和亲代细胞组(2.92%)(P<0.01),转染细胞生长明显受抑(P<0.01)。而转染组A549细胞的凋亡率(0.19%)与空载体组(0.13%)及亲代细胞组(0.07%)比较无显著性差异(P>0.05),细胞生长也未受明显影响。结论　canstatin能特异地抑制内皮细胞增殖,并诱导内皮细胞凋亡。; 陆卫忠黄桂君钱桂生李玉英余时沧李瑾; 关键词：CANSTATIN 基因转染内皮细胞

重组人源MPG基因真核表达载体构建及转染非小细胞肺癌多药耐药细胞的研究: 2006年; 目的构建人N甲基化嘌呤DNA糖基化酶(NmethylpurineDNAglycosylase,MPG)基因真核表达载体,并研究其在稳定转染的人非小细胞肺癌多药耐药细胞中的表达情况。方法应用分子克隆技术构建pCMVScript/MPG重组真核表达载体;应用脂质体介导的基因转染技术将其导入人非小细胞肺癌多药耐药细胞株A549/CDDP内;应用G418筛选稳定表达的转染细胞;应用PCR检测pCMVScript载体上的NEOr基因,应用RTPCR及Westernblot检测MPG基因的表达。结果构建产物经限制性酶切分析及基因序列测定证实为pCMVScript/MPG重组表达载体;转染pCMVScript/MPG载体组(MP组)及转染pCMVScript载体组(P组)细胞内检测到NEOr基因,未转染组(C组)则未检测到;MP组细胞内MPGmRNA水平较P组及C组细胞显著增高(P<0.01);MP组细胞内MPG蛋白质水平较P组及C组细胞显著增高(P<0.01)。结论成功地构建了人MPG基因表达载体,并在人非小细胞肺癌多药耐药细胞A549/CDDP获得了稳定、高效的表达。; 余时沧钱桂生黄桂君李玉英陆卫忠陈维中李瑾; 关键词：肺癌多药耐药

筛选小鼠Cltb启动子顺式元件结合蛋白的酵母单杂交文库的构建被引量：1: 2015年; 目的利用酵母单杂交系统筛选与Cltb基因启动子结合的顺式元件,获得调控Cltb基因表达的转录因子,阐明Cltb基因的转录调控机理。方法首先,构建表达Cltb调控序列的诱饵质粒p Bait-Ab Ai,并将诱饵质粒转入Y1HGold菌株,构建可稳定表达"诱饵-报告子"的酵母菌株;然后,运用SMARTTM技术构建小鼠肺组织酵母单杂交c DNA AD融合表达文库,并进行c DNA文库的筛选。结果成功构建了筛选Cltb启动子顺式元件结合蛋白的酵母单杂交文库,该文库的转化效率为:9.35×105CFU/μg。通过对文库的筛选最后获得了5个阳性克隆并测序,得到5个可编码结合蛋白的基因,分别是Srrt、hnRNPs A/B、Irf1、NKx2.5和Zfp953。结论所构建的酵母单杂交文库符合实验要求,筛选的5个转录因子为研究Cltb基因表达调控奠定了基础。; 吕学军陆卫忠张永娟郭亮李少莹李玉英钱桂生; 关键词：转录调控

低氧对肺腺癌多药耐药细胞耐药性的影响: 目的为观察低氧对肺腺癌多药耐药细胞A549／CDDP耐药性的影响并探讨其可能的机制,分别在常氧(21％O2)及低氧(3％O2)条件下,应用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测A549／CDDP对7种化疗药物的耐药性;应用A...; 余时沧钱桂生黄桂君李玉英陆卫忠郭芮伶戢福云李树均; 文献传递

线粒体靶向MPG基因重组体对人非小细胞肺癌多药耐药细胞A549/DDP增殖的抑制作用被引量：1: 2006年; 背景与目的:多药耐药是影响肺癌化疗效果的重要因素。本研究拟构建线粒体靶向人N-甲基化嘌呤DNA糖基化酶(MPG)基因真核表达载体,观察其在稳定转染的人非小细胞肺癌多药耐药细胞线粒体内的表达情况,并研究其对多药耐药细胞增殖的抑制作用。方法:应用重叠延伸剪接技术重组锰超氧化物歧化酶(MnSOD)线粒体靶向序列-MPG融合基因(mito-MPG);构建pCMV-Script/mito-MPG重组真核表达载体;脂质体将其转染至人非小细胞肺癌多药耐药细胞A549/DDP;G418筛选稳定表达的转染细胞;RT-PCR检测mito-MPG基因mRNA的表达水平;分离线粒体蛋白后应用Westernblot检测MPG在线粒体内的表达水平;台盼蓝拒染法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期分布。结果:构建的融合基因经过DNA测序分析;构建的重组载体经限制性酶切分析及DNA测序分析证实为pCMV-Script/mito-MPG重组真核表达载体;转染pCMV-Script/mito-MPG载体组(MPG组)检测到mito-MPGmRNA的表达,转染pCMV-Script载体组(P组)及未转染组(C组)细胞内则未检测到;MPG组细胞线粒体内检测到MPG,P组及C组则未检测到;MPG组细胞增殖能力明显下降,P组及C组细胞增殖能力无明显差异,倍增时间分别为72.6h(C组)、73.5h(P组)、98.9h(MPG组);分裂增殖指数分别为51.3%(C组)、54.3%(P组)、26.1%(MPG组),MPG组出现亚二倍体峰。结论:成功构建了线粒体靶向人MPG基因表达载体,MPG在MnSOD线粒体靶向序列的引导下,顺利地进入了A549/DDP细胞线粒体内,并导致其增殖能力下降,部分细胞死亡。; 余时沧钱桂生李玉英陆卫忠李瑾黄桂君; 关键词：线粒体重组体 A549/DDP细胞

低氧对肺腺癌多药耐药细胞耐药性的影响及其机制: 2007年; 目的观察低氧对肺腺癌多药耐药细胞A549/CDDP耐药性的影响并探讨可能的机制。方法分别在常氧(21%O_2)及低氧(3%O_2)条件下,应用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测A549/CDDP对7种化疗药物的耐药性,应用Annexin V-PI染色流式细胞术检测细胞的凋亡及坏死,应用MTT法绘制生长曲线,PI染色流式细胞术检测细胞周期分布;罗丹明123排出实验检测细胞药物外排效率;测量各组细胞培养基pH值的变化情况,流式细胞术检测多柔比星在细胞内的累积情况,荧光显微镜/流式细胞仪观察ROS特异性探针DCFDA荧光强度。结果低氧条件下,A549/CDDP对多柔比星、VP-16、长春新碱、顺铂明显耐受,对丝裂霉素、5-FU、泰素帝敏感;增殖能力有所增强;药物外排效率无明显变化;培养基呈现明显酸化;细胞内多柔比星的浓度下降;细胞内ROS浓度降低。结论低氧显著影响肺腺癌多药耐药细胞的耐药特性。微环境酸化引起细胞内药物浓度的不同可能是导致这一现象的原因之一。同时,增殖能力的改变,ROS的产生可能也参与其中。; 余时沧钱桂生黄桂君李玉英陆卫忠郭芮伶戢福云李树均; 关键词：肺肿瘤多药耐药低氧微环境

低氧对肺腺癌多药耐药细胞耐药性的影响及其机制的研究: 目的:观察低氧对肺腺癌多药耐药细胞A549/CDDP耐药性的影响并探讨可能的机制. 方法:分别在常氧(21％O2)及低氧(3％O2)条件下:应用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测A549/CDDP对7种化疗药物...; 余时沧钱桂生黄桂君李玉英陆卫忠郭芮伶戢福云李树均; 关键词：肺肿瘤低氧多药耐药细胞耐药性; 文献传递

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陆卫忠

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