刘春红
- 作品数：11 被引量：35H指数：4
- 供职机构：湖南农业大学动物医学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的克隆与表达及表达产物的免疫原性分析
- 根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZBKM01000005,设计一对特异性引物,以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段.将其进行T-A克隆,构建pETD15质粒并进...
- 朱小宁余兴龙盛益颖李润成罗维葛猛刘俊奇刘春红肖利军将大良
- 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白原核表达免疫原性
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌Neu基因的克隆表达及表达产物的免疫原性被引量：4
- 2010年
- 为研究副猪嗜血杆菌(HPS)基因工程疫苗,以HPS5型毒株为模板,通过PCR扩增获得副猪嗜血杆菌神经氨酸酶(Neu)全基因,将其克隆至pMD18-T载体并对其进行测定和分析。结果表明,Neu全基因含一个2187bp的开放阅读框,编码一含729个氨基酸的蛋白,与Neu基因参考序列(登录号:NZ-ABKM01000006)的同源性为99.0%。以pMD-Neu基因为模板,重新设计引物,扩增得到HPSNeu蛋白的部分编码区,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建得到重组原核表达质粒pET-Neu。将pET-Neu在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达,经SDS-PAGE分析,重组蛋白Neu主要以包涵体形式表达,分子质量为52ku;Western-blot分析表明,重组蛋白Neu能与阳性血清发生特异性抗原反应。将纯化重组蛋白Neu试验性注射免疫昆明小鼠,攻毒试验结果显示,氢氧化铝佐剂组的保护性较低,仅有10%;而弗氏佐剂组具有较高的保护性,保护率高达60%。
- 刘俊琦余兴龙蒋大良朱小宁李润成肖利军刘春红罗维葛猛
- 关键词：副猪嗜血杆菌神经氨酸酶原核表达免疫原性
- 猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立
- 采用PCR方法从猪瘟病毒兔化弱毒(Hog Cholera Lapinized Virus HCLV)疫苗株cDNA中扩增到长度为2000bp左右NS3基因序列,将其克隆进原核表达载体pET32a(+),构建重组原核表达载...
- 蒋大良余兴龙李润成葛猛颜爱李杰刘春红刘俊琦
- 关键词：基因克隆原核表达免疫印迹间接ELISA
- 文献传递
- 卵黄抗体和灭活疫苗同时注射紧急预防H5N1亚型禽流感被引量：5
- 2008年
- 丁建余兴龙白霞刘春红李润成黄泽彬汪镇南刘忠华
- 关键词：H5N1亚型禽流感病毒灭活疫苗卵黄抗体A型流感病毒公共卫生意义
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的原核表达及其表达产物的免疫原性被引量：7
- 2010年
- 根据GenBank中登录的副猪嗜血杆菌(HPS)D15基因鸟枪序列(登录号:NZ_ABKM01000005)设计1对特异性引物,以HPS5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增了D15基因。将其进行T-A克隆,构建pMD18D15质粒并进行序列测定和分析。结果表明,D15基因含有一个2418bp的开放阅读框,编码805个氨基酸,与D15基因参考序列的同源性为99.9%。该HPSD15基因的推导氨基酸序列具有典型Omp85蛋白家族的拓扑结构特征。以pMD18D15质粒为模板,用PCR方法扩增HPSD15基因,并将其克隆到pET-28a(+)中,构建pETD15原核表达质粒,将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后,用IPTG诱导重组菌,并用SDS-PAGE和Western-blot检测诱导物。结果表明,pETD15重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白的分子质量约为94ku,融合蛋白能被HPS阳性血清识别,提示该融合蛋白具有反应原性。昆明小鼠和豚鼠免疫试验结果表明,D15重组蛋白具有一定的诱导免疫保护反应的能力。
- 朱小宁余兴龙盛益颖李润成罗维葛猛刘俊奇刘春红肖利军将大良
- 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白原核表达免疫原性
- 猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立被引量：11
- 2010年
- 采用PCR方法从携带猪瘟病毒兔化弱毒(Hog cholera lapinized virus,HCLV)全长基因组cDNA的质粒pPOHCLV中扩增到长度为2000bp左右NS3基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建成重组原核表达载体pETNS3。将pETNS3在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达,SDS-PAGE分析重组蛋白NS3主要以包涵体形式表达,分子大小约95kD。Western Blotting分析表明重组蛋白NS3具有免疫原性。采用Ni+亲和层析方法纯化得到重组蛋白NS3(90%)。以纯化的重组蛋白NS3为抗原初步建立了检测CSFVNS3抗体的间接ELISA方法,检测221份不同猪群和年龄猪的血清样品。检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果进行对比,阳性符合率为83.33%,阴性符合率为89.38%,总符合率为86.43%。30份存在差异的血清样品用间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence assay,IFA)进行检测,结果显示IFA检测结果与NS3间接ELISA和IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒符合率分别为56.67%和43.33%。
- 蒋大良余兴龙李润成葛猛罗维颜爱李杰刘春红涂长春
- 关键词：CSFNS3基因克隆原核表达IFA
- 猪瘟病毒C、NS5A、NS5B蛋白原核表达及应用
- 本试验在大肠杆菌表达系统中得到了CSFV重组的C、NS5A和NS5B蛋白。通过Western blot试验证实3个蛋白都能与猪瘟阳性血清发生特异性反应,这为基因工程疫苗研究和建立特异性血清学诊断方法以及3个蛋白的相关功能...
- 刘春红
- 关键词：CSFV间接ELISA
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的克隆与表达及表达产物的免疫原性分析
- 根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZ_ABKM01000005，设计一对特异性引物，以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板，通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段。将其进行T-A克隆，构建pETD15质粒...
- 朱小宁将大良余兴龙盛益颖李润成罗维葛猛刘俊奇刘春红肖利军
- 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白免疫原性
- 文献传递
- 禽流感高效价卵黄抗体的制备和应用被引量：6
- 2010年
- 试验选用4个免疫增强成分,采用1%添加水平添加到130日龄法国伊莎褐壳蛋鸡的日粮中,并用禽流感H5N1疫苗连续免疫鸡群3次,试验结果显示,4个免疫增强成分的试验组与对照组相比,前两次免疫效果显著,但当血清抗体效价达到15log2左右时,效果不是很明显;用制备的高效价卵黄抗体与疫苗同时接种未免疫过的海兰褐蛋雏鸡发现其能填补单独使用疫苗免疫时的抗体空白期,可提高紧急预防高致病性禽流感的效果。
- 刘春红余兴龙李波李润成
- 关键词：免疫增强剂禽流感抗体效价抗体滴度卵黄抗体
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5基因的表达及表达产物的免疫原性分析被引量：2
- 2010年
- 实验通过将副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)外膜蛋白(Outer membrane protein,OMP)P5基因克隆至pET-28a(+)中,构建pET-OMP5原核表达质粒,再将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),通过IPTG诱导重组菌,SDS-PAGE显示pET-OMP5重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,Western-blot表明融合蛋白能被阳性血清识别。昆明小鼠试验结果表明OMP5重组蛋白具有一定的诱导免疫保护反应的能力。
- 刘俊琦余兴龙朱小宁蒋大良李润成肖利军刘春红
- 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白免疫原性
