余兴龙
- 作品数：275 被引量：1,018H指数：14
- 供职机构：湖南农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- PADRE-TGFβ1融合蛋白的原核表达及鉴定
- 2011年
- 构建PADRE-TGFβ1原核表达质粒,并对其进行诱导表达和反应原性分析。对PADRE、联接序列(Linker)及TGFβ1的基因序列进行密码子优化,采用全基因合成的方法人工合成全长PADRE-Linker-TGFβ1序列,合成产物克隆至pET-28a(+)质粒。将构建好的质粒转化至E.coliBL21(DE3)感受态细胞,经1 mmol/L IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,在约19.87 ku处出现与预期目的蛋白一致的新蛋白条带,Western blot鉴定结果显示,该蛋白能够与TGFβ1抗体发生特异性结合。表明成功构建了pET28-PADRE-TGFβ1原核表达质粒,表达的融合蛋白质具有TGFβ1的反应原性,为TGFβ1自体疫苗的制备及应用奠定了基础。
- 许道军余兴龙刘雪燕薛立群
- 关键词：融合蛋白原核表达
- 猪瘟基因疫苗免疫小鼠外周血细胞免疫动态变化研究被引量：3
- 2000年
- 应用FACS、MTT法对猪瘟基因疫苗pcDST、pcDSW免疫鼠外围血中CD+4 和CD+8淋巴细胞数、淋巴细胞的转化功能等动态变化进行了观察。结果 :pcDST、pcDSW猪瘟基因疫苗免疫小鼠后 ,小鼠的外周血淋巴细胞对LPS有强烈的反应性 ,CD+4 细胞数量增加 ,外周血淋巴细胞CD8+ 细胞数量在一段时间内增加 ,。CD+4 和CD+8细胞数量在免疫后 32天达到高峰后开始下降。表明pcDST、pcDSW质粒免疫小鼠后诱发免疫反应。
- 陈创夫余兴龙乔军李作生涂长春殷震
- 关键词：猪瘟外周血细胞基因疫苗免疫
- 原核表达的猪瘟病毒E2蛋白抗原多肽的复性和纯化被引量：21
- 2003年
- 对原核中以包涵体形式高效表达的猪瘟病毒 (CSFV) E2蛋白抗原表位区段 (m E2 )进行了变性、复性与纯化研究。包涵体经超声破菌分离 ,然后进行变性溶解和复性 ,复性产物经硫酸铵沉淀浓缩后 ,利用免疫亲和层析进行纯化。纯化产物的 SDS- PAGE分析结果表明 ,其纯度达 97%。酶联免疫试验测定的结果显示 ,与复性前变性蛋白相比 ,纯化蛋白与 CSFV特异的单抗和多克隆阳性血清的反应活性提高了 2～ 16倍。
- 刘伯华余兴龙张茂林肖昌徐兴然吴健敏李作生涂长春
- 关键词：原核表达猪瘟病毒包涵体复性纯化
- 腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2融合基因表达载体的构建及表达被引量：1
- 2002年
- 根据腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因 (Pili基因 )序列 ,在 Pili基因 6 19bp Ehe 酶切位点上插入绵羊白细胞介素 - 2基因 (Ovi IL- 2基因 ) ,构建了 Pili基因与 Ovi IL- 2基因的融合基因表达载体。先用 Eco R 、Bam H 双酶切p Bluescript- Ovi IL - 2重组质粒 ,获得两端具有 Eco R 、Bam H 位点的 Ovi IL - 2基因片段 ,用 Klenow补平后 ,与经Ehe 酶切后的重组质粒 PME2 90 - Pili进行平端连接 ;转化 JM10 5感受态细胞 ,筛选阳性克隆 ,分别用 Bam H 、Eco R 、Xba 、Bgl 、Pvu 等进行酶切鉴定。然后将阳性重组质粒转染 BL - 2 1表达宿主感受态细胞 ,用 0 .1m ol/ L Mg Cl2沉淀法和超声波裂解法提取 BL- 2 1表达 Pili基因与 Ovi IL- 2基因融合基因表达蛋白。对流免疫电泳对重组融合蛋白的特异性分析证明 ,融合蛋白主要在宿主菌体中表达 ;SDS- PAGE电泳结果表明 ,重组融合蛋白分子大小约为 330 0 0 ,表达产物的量约占菌体的 5 .49%。
- 王克坚Om Dhungyel余兴龙冯书章赵宝华JR Egerton朱平殷震
- 关键词：腐蹄病节瘤拟杆菌基因工程疫苗免疫
- 猪瘟病毒E2蛋白重组T4噬菌体的构建及免疫学特性被引量：6
- 2004年
- 利用重组 PCR技术将猪瘟病毒 (CSFV) E2基因与 T4噬菌体 SOC基因 C端融合 ,构建了大小为 12 33bp的SOC/ E2融合基因 ,将其插入携带 T4溶菌酶基因 (e)和 denv基因的 T4重组载体 (p RH) ,构建了重组载体 p RSE2 ,通过重组载体与缺失突变型 T4噬菌体基因发生同源重组 ,将 SOC/ E2融合基因整合入 T4噬菌体的基因组中。经EL ISA、Western blot等免疫学检测证实 ,T4噬菌体表达的 E2融合蛋白具有 CSFV免疫学活性 ,动物试验证实 T4 .SOC.
- 吴健敏任兆钧余兴龙张念祖涂长春
- 关键词：猪瘟病毒T4噬菌体免疫学特性
- 一株产高酶活性碱性磷酸酶解淀粉芽孢杆菌的分离及其phoD碱性磷酸酶基因的克隆与表达被引量：2
- 2022年
- 【背景】碱性磷酸酶作为工具酶被广泛应用于各个领域,在免疫学检测方面应用较多的是PhoA家族的碱性磷酸酶,尚无关于PhoD家族的碱性磷酸酶在免疫学检测方面的研究。【目的】筛选出一株产高酶活性PhoD家族碱性磷酸酶的细菌,并将其phoD基因进行克隆表达,研究PhoD的酶学性质,为PhoD家族的碱性磷酸酶在免疫学检测方面的应用奠定一定的基础。【方法】采取有机质丰富的土样在有机磷平板中进行细菌分离,以4-硝基苯磷酸二钠盐(4-nitrophenyl phosphate disodium salt hexahydrate,p-NPP)为底物测定有机磷平板中单菌落的酶活性,选取酶活性高的菌株作为目的菌株,克隆其phoD基因。【结果】筛选到一株产碱性磷酸酶酶活性高的菌株S2-4,通过16S rRNA基因序列同源性比较分析,鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌,克隆了其phoD基因并进行诱导表达。研究了纯化后PhoD的酶学性质,PhoD的最适反应温度为70℃;最适反应pH为9.8;PhoD最适Ca^(2+)浓度为3 mmol/L,Mg^(2+)对PhoD的酶活性有抑制作用,K^(+)、Zn^(2+)、Mn^(2+)和Fe^(2+)对PhoD的酶活性没有明显影响;以p-NPP为底物,在25℃下测得PhoD的Km为5.94 mmol/L,Vmax为31.46μmol/(L·min),k_(cat)值为103.59 s^(−1),为大肠杆菌碱性磷酸酶EAP k_(cat)值的1.60倍。【结论】菌株S2-4能产高酶活性的碱性磷酸酶,其含有的PhoD为单体酶,催化效率高于EAP,是比EAP具有更大优势的标记酶。
- 熊梦霞廖华媛郑金何景锋曹锟余兴龙
- 关键词：碱性磷酸酶解淀粉芽孢杆菌酶学性质
- 猪瘟病毒E2蛋白4重复抗原表位的构建及抗原活性研究被引量：2
- 2003年
- 利用PCR方法获得 4次重复的猪瘟病毒E2蛋白中和性抗原表位基因 ,将其克隆到 pGEM 5ZF(+)载体 ,测序正确后亚克隆到pGEX 3X载体构建得到重组质粒pGEX 3X 4P。重组质粒在大肠杆菌中诱导表达了含 4重复抗原表位的融合蛋白。该蛋白经纯化后 ,利用间接ELISA检测其与血清的反应性 ,结果表明 ,纯化的融合蛋白与兔抗CSFVE2血清有很强的反应性 ,与兔抗BVDVE2血清不反应 。
- 张青婵刘思国徐兴然余兴龙涂长春
- 关键词：猪瘟病毒CSFV基因克隆技术疾病防治
- 主题策划:重视猪瘟的防控工作被引量：2
- 2009年
- 猪瘟是引起猪高度致死、接触性传染的严重危害养猪业的重要传染病，在我国被列为一类动物疫病。随着猪瘟疫苗的研制与广泛应用，猪瘟的流行与暴发已经被控制，但是在我国的一些地区仍然时有发生，并且其流行形式和发病特点都发生了很大的变化，尤其是妊娠母猪带毒综合征、仔猪胎盘垂直传播及先天免疫耐受，同时还存在非典型的发病特点，因此给疫病的防控增加了难度。
- 余兴龙
- 关键词：猪瘟疫苗生物疫苗策划主题
- 基于转录组分析猪链球菌抗氧化应激相关基因表达的变化
- 2023年
- 本研究通过转录组测序技术研究猪链球菌(Streptococcus suis)经H_(2)O_(2)处理后的全基因组转录水平变化,探究氧胁迫下与猪链球菌应对氧化应激过程相关的代谢通路和基因。将9型猪链球菌DN13菌株培养至对数生长后期,用PBS和H_(2)O_(2)分别处理15 min,将处理后的DN13菌株进行转录组测序(RNA-seq),对转录本中的差异表达基因进行KEGG和GO分析,并用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)验证RNA-seq的分析结果。RNA-seq结果显示,DN13共检测到2005个基因,与对照组相比,实验组有749个基因差异表达,占比37.4%。GO富集结果表明,差异表达基因在分子功能、生物学过程和细胞组分这3大类中均显著富集。KEGG富集结果表明,差异表达基因主要集中在核糖体、ABC转运体、氨基糖和核苷酸糖的代谢以及半乳糖代谢等代谢途径中。RT-qPCR结果与RNA-seq数据的一致性好,证明RNA-seq分析结果具有可靠性。这说明猪链球菌应对氧化应激是一个涉及细菌多个途径和一系列基因表达变化的复杂过程。通过分析实验组和对照组之间DN13菌株的基因表达水平,发现在本研究中与抗氧化相关的差异表达基因的表达变化均与其功能一致,且均注释到催化活性、细胞结构体和结合这3个GO条目中,这说明转录组分析的数据可在整体上准确反映参与抗氧化应激基因表达水平的变化。
- 曹锟杨磊杨鹏江陈如泓柳泰余兴龙
- 关键词：猪链球菌转录组氧化应激
- 猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达
- 1997年
- 本研究首次用RT-PCR技术分两段扩增了我国猪瘟病毒(HCV)标准强毒石门株的主要保护性抗原E2基因,并将其进行了克隆和序列分析。将这两个片段连接成完全的E2基因,并将其克隆到原核表达载体pBV220和pET-28a(+)中,重组表达载体转化、诱导的受体菌经Western印迹和直接ELISA检测能够表达E2抗原。 用RT-PCR技术对从我国多个地区收集的猪瘟病料进行检测,结果从吉林、长春、南京、重庆、昆明、佛山病料中扩增出了HCV
- 李红卫涂长春金扩世王新平吕宗吉余兴龙殷震
- 关键词：猪瘟病毒肠杆菌E2基因氨基酸序列野毒株
