罗维
- 作品数：37 被引量：96H指数：6
- 供职机构：湖南农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省科技重大专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 猪圆环病毒2型基因1群B亚簇的体外培养特征被引量：1
- 2013年
- 为探寻猪圆环病毒2型(PCV2)在PK15细胞中的复制特征,将PCV2基因1群B亚簇(PCV2–1B)病毒感染PK15均质细胞A10,待感染细胞层长满,对其进行连续传代;对第5、6代细胞进行维持培养,即在细胞长满后隔天更换培养基,以维持细胞良好的生长;用第10代带毒细胞的培养液接种A10细胞,并进行换液维持培养。PCR与定量PCR检测结果表明,PCV2–1B病毒感染A10细胞后,其病毒基因组的含量在感染细胞长满之前(约96 h)随着细胞的增多而上升,同时也随着传代次数的增多而上升;换液维持培养的细胞,在维持10 d后PCV2–1B病毒基因组的含量能维持在107～108拷贝/mL,而第10代带毒细胞的培养液接毒A10之后,病毒基因组含量随细胞增多而上升,在达到约108拷贝/mL后,病毒基因组含量维持在107～108拷贝/mL。
- 罗维赵墩吴海超蒋大良余兴龙
- 关键词：猪圆环病毒2型PK15细胞毒株
- 副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的原核表达及其表达产物的免疫原性被引量：7
- 2010年
- 根据GenBank中登录的副猪嗜血杆菌(HPS)D15基因鸟枪序列(登录号:NZ_ABKM01000005)设计1对特异性引物,以HPS5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增了D15基因。将其进行T-A克隆,构建pMD18D15质粒并进行序列测定和分析。结果表明,D15基因含有一个2418bp的开放阅读框,编码805个氨基酸,与D15基因参考序列的同源性为99.9%。该HPSD15基因的推导氨基酸序列具有典型Omp85蛋白家族的拓扑结构特征。以pMD18D15质粒为模板,用PCR方法扩增HPSD15基因,并将其克隆到pET-28a(+)中,构建pETD15原核表达质粒,将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后,用IPTG诱导重组菌,并用SDS-PAGE和Western-blot检测诱导物。结果表明,pETD15重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白的分子质量约为94ku,融合蛋白能被HPS阳性血清识别,提示该融合蛋白具有反应原性。昆明小鼠和豚鼠免疫试验结果表明,D15重组蛋白具有一定的诱导免疫保护反应的能力。
- 朱小宁余兴龙盛益颖李润成罗维葛猛刘俊奇刘春红肖利军将大良
- 关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白原核表达免疫原性
- 猪圆环病毒2型ORF2基因的改造及在大肠杆菌中的高效可溶性表达
- PCV2-ORF2为702或705bp，编码病毒的衣壳蛋白(Cap)，与PCV2的复制以及抗原性密切相关，是进行PCV2疫苗研究以及免疫活性研究的首选。最初衣壳蛋白在杆状病毒表达系统中成功表达并用于检测PCV2特异性抗体...
- 葛猛余兴龙李润成罗维李微李晶王亚向卫军
- 关键词：ORF2基因大肠杆菌可溶性表达基因改造
- 文献传递
- 猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立被引量：11
- 2010年
- 采用PCR方法从携带猪瘟病毒兔化弱毒(Hog cholera lapinized virus,HCLV)全长基因组cDNA的质粒pPOHCLV中扩增到长度为2000bp左右NS3基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建成重组原核表达载体pETNS3。将pETNS3在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达,SDS-PAGE分析重组蛋白NS3主要以包涵体形式表达,分子大小约95kD。Western Blotting分析表明重组蛋白NS3具有免疫原性。采用Ni+亲和层析方法纯化得到重组蛋白NS3(90%)。以纯化的重组蛋白NS3为抗原初步建立了检测CSFVNS3抗体的间接ELISA方法,检测221份不同猪群和年龄猪的血清样品。检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果进行对比,阳性符合率为83.33%,阴性符合率为89.38%,总符合率为86.43%。30份存在差异的血清样品用间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence assay,IFA)进行检测,结果显示IFA检测结果与NS3间接ELISA和IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒符合率分别为56.67%和43.33%。
- 蒋大良余兴龙李润成葛猛罗维颜爱李杰刘春红涂长春
- 关键词：CSFNS3基因克隆原核表达IFA
- 检测猪圆环病毒2型抗体的ELISA试剂盒
- 一种检测猪圆环病毒2型抗体的ELISA试剂盒，该试剂盒依双抗原夹心ELISA原理研制而成，包括ELISA抗原预包被板条、洗涤液、100倍浓缩的酶标抗原、酶标稀释液、底物显色液、终止液及标准PCV2阴、阳性血清。本试剂盒采...
- 余兴龙葛猛李润成蒋大良罗维
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌Neu基因的克隆表达及表达产物的免疫原性被引量：4
- 2010年
- 为研究副猪嗜血杆菌(HPS)基因工程疫苗,以HPS5型毒株为模板,通过PCR扩增获得副猪嗜血杆菌神经氨酸酶(Neu)全基因,将其克隆至pMD18-T载体并对其进行测定和分析。结果表明,Neu全基因含一个2187bp的开放阅读框,编码一含729个氨基酸的蛋白,与Neu基因参考序列(登录号:NZ-ABKM01000006)的同源性为99.0%。以pMD-Neu基因为模板,重新设计引物,扩增得到HPSNeu蛋白的部分编码区,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建得到重组原核表达质粒pET-Neu。将pET-Neu在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达,经SDS-PAGE分析,重组蛋白Neu主要以包涵体形式表达,分子质量为52ku;Western-blot分析表明,重组蛋白Neu能与阳性血清发生特异性抗原反应。将纯化重组蛋白Neu试验性注射免疫昆明小鼠,攻毒试验结果显示,氢氧化铝佐剂组的保护性较低,仅有10%;而弗氏佐剂组具有较高的保护性,保护率高达60%。
- 刘俊琦余兴龙蒋大良朱小宁李润成肖利军刘春红罗维葛猛
- 关键词：副猪嗜血杆菌神经氨酸酶原核表达免疫原性
- 猪圆环病毒2型Rep蛋白ELISA抗体检测方法的建立被引量：3
- 2012年
- 为建立一种快速检测猪圆环病毒2型(PCV2)抗体的方法,本研究通过基因合成PCV2的Rep编码序列,将其克隆至pET-28a(+)并在E.coli中表达,表达的重组Rep蛋白经Ni2+亲和纯化。采用纯化的目的蛋白作为包被抗原,建立检测PCV2 Rep蛋白抗体的间接ELISA方法。结果表明最佳抗原包被浓度为200 ng/孔,血清和二抗最佳反应时间分别为1 h和30 min。该方法具有良好的特异性和敏感性,与韩国金诺公司试剂盒的符合率为81.4%,表明建立的ELISA方法可以用于PCV2的流行病学检测。
- 李杰葛猛罗维舒晓亮蒋大良李润成李波刘国华余兴龙
- 关键词：猪圆环病毒REP蛋白间接ELISA
- 长沙9个犬细小病毒毒株的分离与鉴定被引量：5
- 2012年
- 从感染犬细小病毒(CPV)的长沙病犬粪便中分离CPV,采用同步接毒方式,将病毒悬液接种到猫肾细胞(F81),经PCR鉴定,从10份阳性样品中分离到9株CPV,血凝试验显示9株CPV均能凝集猪红细胞,血凝价均超过了27。为进一步分析CPV长沙毒株的VP2分子生物学特征及抗原变异规律,对9个CPV毒株的VP2基因进行克隆、测序及序列分析,结果表明:CPV长沙毒株与全国及世界各地CPV毒株相比,其VP2基因序列同源性超过97%,其VP2基因推导的氨基酸序列同源性超过94%;其VP2基因推导的氨基酸序列有独特的变异,且有独特变异的毒株在基因进化树上处于同一个分支。
- 肖博仁罗维刘崇灵李润成余兴龙
- 关键词：犬细小病毒
- 4种茶叶水提物对猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用被引量：3
- 2012年
- 采用小鼠体内试验和体外试验,利用Marc–145细胞体外培养系统,通过观察细胞病变来评价茶叶水提物对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)繁殖的抑制作用。改变加入茶叶水提取物的方式(茶叶水提物先与病毒感作后接种细胞、茶叶水提物与已感染病毒的细胞作用2种方式),初步探讨茶叶水提物对PRRSV的抑制与杀灭作用。体内试验是采用小鼠尾静脉注射的方法,将茶叶水提物注射到小鼠体内,测定小鼠血清对PRRSV的作用。结果表明,茶叶水提物对PRRSV具有杀灭与抑制作用,碧螺春茶(不发酵)、生普洱茶(不发酵)、铁观音茶(半发酵)、熟普洱茶(后发酵)的水提物对PRRSV的最小抑制质量浓度分别为31.3、31.3、31.3、125μg/mL,最小杀灭质量浓度分别为7.8、7.8、15.6、125μg/mL。不发酵型茶叶水提物比发酵型茶叶水提物对PRRSV的杀灭与抑制作用明显,小鼠尾静脉注射茶叶水提物后能正常生长,注射1 h内小鼠血清对PRRSV具有一定的杀灭作用。
- 周洪锐汤起武余兴龙李润成罗维蒋大良葛猛
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征MARC-145细胞
- 检测猪圆环病毒2型抗体的ELISA试剂盒
- 一种检测猪圆环病毒2型抗体的ELISA试剂盒，该试剂盒依双抗原夹心ELISA原理研制而成，包括ELISA抗原预包被板条、洗涤液、100倍浓缩的酶标抗原、酶标稀释液、底物显色液、终止液及标准PCV2阴、阳性血清。本试剂盒采...
- 余兴龙葛猛李润成蒋大良罗维
- 文献传递
