肖田
- 作品数：2 被引量：15H指数：2
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 双靶向溶瘤腺病毒MD55对肿瘤细胞与正常细胞的杀伤作用比较被引量：2
- 2008年
- 应用分子克隆和同源重组技术构建双靶向溶瘤腺病毒MD55。分析MD55病毒在细胞中的复制能力,并用MTT和结晶紫方法检测MD55对肿瘤细胞和正常细胞生长的影响,West-ern印迹检测病毒感染后细胞中E1A蛋白和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)片断的表达。结果显示,MD55能在MN/CA9阳性的肿瘤细胞SW620和OSRC-2中特异性表达E1A蛋白,并且在这些细胞中的复制能力和对这些细胞的杀伤性与对照病毒ZD55基本相同,而其在正常细胞中的复制能力很弱,对正常细胞的伤害很小;同时MD55可诱导肿瘤细胞SW620和OSRC-2的凋亡,而对正常细胞的凋亡无影响。实验结果表明双靶向溶瘤腺病毒MD55靶向性和安全性比单靶向病毒ZD55更高,有望成为一种很好的肿瘤靶向基因-病毒治疗载体。
- 王卫芸顾锦法戴平肖田曹欣刘新垣
- 关键词：溶瘤腺病毒病毒复制
- 癌特异性双靶向载体的安全性及其携带基因的杀伤性被引量：14
- 2006年
- 背景与目的:我们创导的“癌症的靶向双基因-病毒治疗”策略可消灭移植性肿瘤,目前最重要的是要提高其安全性,使其只靶向肿瘤细胞,而在正常细胞内不复制或者很少复制。本研究旨在构建肿瘤特异性的双靶向腺病毒TD55,并研究其安全性;在TD55中插入凋亡基因TRAIL,构建成TD55-TRAIL,研究其杀伤性。方法:用hTERT启动子控制腺病毒复制必需的E1A基因,并将E1B55KD基因删除,构建肿瘤特异性的双靶向腺病毒TD55,使其只靶向p53功能缺乏的肿瘤。在TD55中插入凋亡基因TRAIL,构建成TD55-TRAIL,通过分子克隆构建质粒pTD55和pTD55-TRAIL,并与包装腺病毒的大质粒pBHGE3在293细胞中同源重组,得到腺病毒TD55和TD55-TRAIL。构建好的病毒体外感染人胚肺细胞MRC5、WI38,人结肠癌细胞SW620、HCT116、人肺癌细胞A549,分别用结晶紫染色法和MTT法检测其对细胞生长的影响。用流式细胞仪测定肿瘤细胞的凋亡率。结果:结晶紫染色结果和MTT结果表明,双靶向腺病毒TD55-TRAIL对正常细胞MRC5和WI38的杀伤作用比ZD55-TRAIL小很多。病毒复制能力分析表明,单靶向腺病毒在正常细胞中的复制倍数是双靶向腺病毒的3～5倍。TD55和TD55-TRAIL均能引起SW620细胞的凋亡,后者是前者的3.3倍。结论:双靶向腺病毒TD55-TRAIL对正常细胞的安全性比以往所构建的单靶向腺病毒ZD55-TRAIL更好,说明双靶向载体TD55比单靶向载体ZD55靶向性更高,如做为治疗药物可增加安全性,在治疗中可大大增加药物的安全性。携带的TRAIL基因能引起肿瘤细胞的凋亡,杀伤力较TD55增加数倍。
- 王娟顾锦法杨水云肖田齐荣孙兰英刘新垣
- 关键词：肿瘤生物疗法溶瘤腺病毒HTERT启动子
