齐荣
- 作品数：5 被引量：26H指数：3
- 供职机构：上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 携带XAF1的复制型溶瘤腺病毒治疗恶性肿瘤的研究
- 肿瘤治疗的瓶颈之一是靶向性问题。对肿瘤组织的靶向性可以提高基因治疗的效果,避免对正常组织的损伤,并且能降低作为载体的微生物对机体的危害。条件复制型腺病毒是一类很有前景的抗肿瘤药物,它们能特异性的在肿瘤细胞中复制、增殖,从...
- 齐荣
- 关键词：溶瘤腺病毒XAF1
- 文献传递
- Ad.TERT-TRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用及其机理被引量：6
- 2005年
- 背景与目的:有学者用人端粒酶逆转录酶(TERT)启动子替换野生型腺病毒E1A自身的启动子,构建了一种肿瘤特异性增殖病毒,即溶瘤腺病毒Ad.TERT。细胞实验和动物实验表明,Ad.TERT有很好的抗癌作用。本研究目的是要在Ad.TERT中插入凋亡基因trail生成Ad.TERT-TRAIL,观察其是否具有更强的杀伤肿瘤细胞的功效并研究其机理。方法:通过腺病毒包装质粒pBH GE3与携带trail的小质粒pZhTERT-trail在H EK293细胞中同源重组构建Ad.TERT-TRAIL病毒,然后用PCR鉴定,并用W estern blot检测E1A、trail基因的表达以进一步确证。用结晶紫染色法和M TT法检测Ad.TERT和Ad.TERT-TRAIL对肿瘤细胞和正常细胞杀伤作用的差异。用W estern blot检测Caspase-3表达量以观察肿瘤细胞的凋亡情况,同时用流式细胞仪测定肿瘤细胞的凋亡率。结果:PCR扩增出来的条带为860bp,即为trail基因。W estern blot结果显示,Ad.TERT-TRAIL中的E1A和trail只在肿瘤细胞中表达,说明Ad.TERT-TRAIL构建成功。结晶紫染色结果表明,Ad.TERT-TRAIL对肿瘤细胞的杀伤力比Ad.TERT高10～100倍,而对正常细胞的影响跟Ad.TERT一样小。100M OI(m ultiple ofinfection)Ad.TERT-TRAIL感染结肠癌细胞SW62072h后,细胞存活率为4%;而感染了Ad.TERT的SW620细胞存活率却达56%。两种病?
- 唐云霞陈瑜陈瑜顾锦法齐荣邹卫国蒋琳兰
- 关键词：溶瘤病毒细胞凋亡
- 腺相关病毒携带hTERT启动子调控的TRAIL基因特异性杀伤肿瘤细胞被引量：6
- 2008年
- 背景与目的:腺相关病毒(adeno-associated virus)作为载体已被广泛用于肿瘤的基因治疗研究。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factorrelated apoptosis-inducing ligand,TRAIL)基因可迅速诱导多种肿瘤细胞的凋亡,是一个安全有效的肿瘤杀伤基因。本研究旨在构建能在肿瘤细胞内特异性表达TRAIL基因的靶向腺相关病毒,并探讨其体外抗肿瘤效应的可能机制。方法:利用肿瘤特异性启动子端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)构建特异性杀伤肿瘤细胞的腺相关病毒载体pAAV-hTERT-TRAIL。通过与pAAV-RC、pHelper共转染HEK293细胞包装出病毒AAV-hTERT-TRAIL。将该病毒体外转染人结肠癌SW620细胞、人肝癌HepG2细胞、人肺癌A549细胞和正常细胞NHLF、MRC5后,检测TRAIL基因的肿瘤特异性表达。MTT法检测其对细胞增殖的影响,ELISA、Westernblot法以及流式细胞仪检测细胞的凋亡,并分析其体外抗肿瘤效应的可能机制。结果:成功包装出病毒AAV-hTERT-TRAIL。RT-PCR、Western blot和免疫组化法均证实AAV-hTERT-TRAIL能介导TRAIL基因在肿瘤细胞内特异性表达,但在正常细胞内不表达。以100 MOI AAV-hTERT-TRAIL感染细胞96h后,SW620、A549和HepG2细胞的增殖率分别是41.55%、44.29%、49.95%,NHLF和MRC5细胞的增殖率分别是84.59%和87.22%。Westernblot检测发现AAV-hTERT-TRAIL可激活Caspase通路,流式细胞仪和ELISA方法检测证实AAV-hTERT-TRAIL可诱导细胞凋亡。结论:hTERT的存在增强了腺相关病毒所携带TRAIL基因表达的肿瘤靶向性和对正常细胞的安全性,由它调控的杀伤基因可介导肿瘤细胞特异性的细胞毒效应。
- 齐荣蔡莹李兵华林志新顾锦法
- 关键词：SW620细胞腺相关病毒TRAILHTERT启动子
- 细菌内同源重组构建含人内皮抑素基因腺病毒及在胃癌细胞中的体外转染实验
- 2003年
- 目的 :采用细菌内同源重组法构建含人内皮抑素基因的重组腺病毒Ad -CMV -hEn。方法 :将hEn基因自 pCA13-hEn质粒中酶切下来 ,亚克隆至腺病毒穿梭质粒中 ,形成转移质粒 pAdtrack -CMV -hEn ,并用PmeⅠ线性化后与腺病毒基因组质粒 pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5 183,抽提重组体腺病毒基因组质粒DNA ,PacⅠ酶切后在 2 93细胞中包装成腺病毒颗粒。采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定 ,同时测定了病毒滴度。并采用RT -PCR检测感染腺病毒的胃癌细胞内有无hEnmRNA的转录。结果 :由 pAdtrack -CMV -hEn和pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5 183后 ,可得到阳性重组体细菌克隆 ,包装完成的腺病毒经PCR检测表明已含有hEn基因。纯化所得腺病毒滴度约为 2 .4× 10 11pfu /ml。RT -PCR证实在感染重组体腺病毒Ad .CMV -hEN的细胞中有相应mRNA的转录。结论 :细菌内同源重组法是一种高效、简便、快捷的重组体腺病毒载体制备方法。所构建的Ad -CMV -hEn在体外能有效转录相应的mRNA。
- 阴忆青齐荣邹卫国秦新裕刘新垣
- 关键词：腺病毒载体内皮抑素胃癌基因治疗
- 癌特异性双靶向载体的安全性及其携带基因的杀伤性被引量：14
- 2006年
- 背景与目的:我们创导的“癌症的靶向双基因-病毒治疗”策略可消灭移植性肿瘤,目前最重要的是要提高其安全性,使其只靶向肿瘤细胞,而在正常细胞内不复制或者很少复制。本研究旨在构建肿瘤特异性的双靶向腺病毒TD55,并研究其安全性;在TD55中插入凋亡基因TRAIL,构建成TD55-TRAIL,研究其杀伤性。方法:用hTERT启动子控制腺病毒复制必需的E1A基因,并将E1B55KD基因删除,构建肿瘤特异性的双靶向腺病毒TD55,使其只靶向p53功能缺乏的肿瘤。在TD55中插入凋亡基因TRAIL,构建成TD55-TRAIL,通过分子克隆构建质粒pTD55和pTD55-TRAIL,并与包装腺病毒的大质粒pBHGE3在293细胞中同源重组,得到腺病毒TD55和TD55-TRAIL。构建好的病毒体外感染人胚肺细胞MRC5、WI38,人结肠癌细胞SW620、HCT116、人肺癌细胞A549,分别用结晶紫染色法和MTT法检测其对细胞生长的影响。用流式细胞仪测定肿瘤细胞的凋亡率。结果:结晶紫染色结果和MTT结果表明,双靶向腺病毒TD55-TRAIL对正常细胞MRC5和WI38的杀伤作用比ZD55-TRAIL小很多。病毒复制能力分析表明,单靶向腺病毒在正常细胞中的复制倍数是双靶向腺病毒的3～5倍。TD55和TD55-TRAIL均能引起SW620细胞的凋亡,后者是前者的3.3倍。结论:双靶向腺病毒TD55-TRAIL对正常细胞的安全性比以往所构建的单靶向腺病毒ZD55-TRAIL更好,说明双靶向载体TD55比单靶向载体ZD55靶向性更高,如做为治疗药物可增加安全性,在治疗中可大大增加药物的安全性。携带的TRAIL基因能引起肿瘤细胞的凋亡,杀伤力较TD55增加数倍。
- 王娟顾锦法杨水云肖田齐荣孙兰英刘新垣
- 关键词：肿瘤生物疗法溶瘤腺病毒HTERT启动子
