张锋
- 作品数：9 被引量：39H指数：5
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- 相关领域：医药卫生化学工程文化科学更多>>
- 大鼠抗肠道病毒71型衣壳蛋白VP1特异性中和单克隆抗体的研制与应用被引量：6
- 2013年
- 目的研制大鼠抗肠道病毒71型（EV71）衣壳蛋白VPl特异性中和单克隆抗体（单抗），并用Westem印迹、ELISA和免疫荧光检测（IFA）等方法验证其特异性。方法采用单克隆杂交瘤技术人工合成包含EV71 VP1中和抗原决定簇位点SPT0的多肽偶联载体蛋白KLH，腹腔内注射免疫大鼠数次后，取有预期免疫应答的脾细胞与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞融合，用间接ELISA法筛选和有限稀释法亚克隆获得稳定的阳性单克隆杂交瘤细胞株并鉴定其IgG亚型。选取其中1株单克隆杂交瘤细胞系BC6，体外培养后注射于SCID裸鼠腹腔制备腹水以产生大量抗体，用ProteinA层析柱亲合纯化后获得纯化抗体。细胞培养微量中和试验测定该单抗中和EV71的滴度，并将其用于多种方法检测EV71特异性抗原。结果共获得8株稳定的单克隆杂交瘤细胞系，分别有6株属于IgGl亚型，2株为IgG2a亚型。通过制备腹水大量产生抗EV7l大鼠单抗BC6并纯化，其对EV71的中和滴度为1：32。BC6用于Western免疫印迹可特异检测大肠埃希菌表达的EV71VPl重组蛋白和EV71样品中的VPl，用于ELISA可灵敏特异地定性或定量检测EV71抗原含量，用于IFA可特异识别被感染Vero细胞内的EV71颗粒，而对柯萨奇病毒A16型无交叉反应。结论成功制备获得了大鼠抗EV71VPl的特异性中和单抗，可应用于Western免疫印迹、ELISA、IFA等方法，成为灵敏特异地检测EV71VPl或全病毒颗粒的有效工具。
- 张锋高丽美朱赟高孟潘海桦陈卓吴海光罗永能
- 关键词：肠道病毒71型单克隆抗体ELISA免疫荧光检测
- 中国大陆地区2004——2012年甲型肝炎的流行特征分析被引量：19
- 2014年
- 目的分析中国大陆地区2004—2012年甲型肝炎（甲肝）疫情的流行病学特征，为预防控制提供建议。方法用Excel2007软件对全国甲肝疫情数据资料进行整理，采用描述流行病学方法，对中国大陆地区甲肝流行情况和分布特征进行分析。结果2004—2012年甲肝发病数和发病率均大致呈逐年下降趋势，共报告甲型肝炎病例503817例，其中死亡202例，占0．04％。年度发病率波动在1．78／10万一7．34／10万之间，年平均发病率4．00／10万；报告病例未见明显的季节分布，冬季略低于其他季节，病例数和死亡数分别占全年20．78％和18．87％。甲肝病例主要集中在西南地区和西北地区，分别占总病例数的30．06％和20.31％，四川、河南、云南、新疆、甘肃、贵州等6省区占总病例数的48．87％。甲肝在各个年龄组均有发病，发病最多的是0～9岁年龄组（20．88％），发病最少的是80岁以上年龄组（0．89％）。结论中国大陆地区由甲肝的高发区向中、低发区过渡，但仍应加强西部地区和低年龄人群的免疫监测力度。
- 张锋姜立民朱赟
- 关键词：肝炎甲型流行病学特征
- 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核衣壳蛋白优势线性B细胞抗原决定簇的预测与确定被引量：5
- 2016年
- 为了确定发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)核衣壳蛋白(N蛋白)的优势线性B细胞抗原决定簇位点,本文根据线性B细胞抗原表位拥有较强的抗原性、亲水性以及表面性等特点,运用生物信息学软件分析SFTSV N蛋白的氨基酸序列,预测潜在的线性B细胞抗原决定簇位点。根据已解析的SFTSV N蛋白晶体结构,使用PyMOL软件分析预测出的线性B细胞抗原决定簇位点的柔性及其在整个SFTSV N蛋白中的分布情况。人工合成相应多肽片段并以其为抗原,与SFTSV临床感染者的血清反应,采用多肽-酶联免疫吸附检测法检验多肽片段的免疫原性。结果共预测出六个可能的线性B细胞抗原决定簇位点,即A(40-KKLKETGGDDWVKDTK-55)、B(71-ASGKMSNSGSKRL-83)、C(94-ERAETRL-100)、D(135-LKVENYPP-142)、E(157-GVSEATT-163)和F(184-KMRGASKTEVYNSFRDP-200),均位于N蛋白表面且含有柔性较大的loop区。相应的六段人工合成多肽都与SFTSV临床病例血清呈阳性反应,确定它们均为优势线性B细胞抗原决定簇位点,其各自检测结果与商品化N蛋白抗体检测试剂盒相应检测结果进行线性回归分析表明呈正相关。综合运用上述多种方法,本研究成功地预测并确定了SFTSV N蛋白的线性B细胞抗原决定簇位点,为该病毒抗原特异性的分子基础研究以及相关疾病的诊断和治疗奠定了基础。
- 陈军孙培蓓张锋顾春燕高孟倪红霞罗永能
- 柯萨奇病毒A16型感染性模型的建立及其相关免疫学指标和应用的评价被引量：5
- 2017年
- 目的建立简便和可靠的对柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CVA16)敏感的小型啮齿类实验动物模型。方法选取不同日龄长爪沙鼠,腹腔接种CVA16后连续观察14 d,筛选出对病毒敏感的最适接种日龄段;然后比较接种剂量与效应关系,测定其50%致死剂量(LD50);并测定感染3 d后其血液和主要组织器官中CVA16病毒滴度;最后用CVA16灭活疫苗在1日龄和11日龄免疫2针沙鼠后,在14日龄时用LD50剂量病毒攻毒,观察并记录沙鼠体重、症状及死亡率,2周后眼球采血,应用微量中和试验和ELISA分别检测中和抗体效价和总抗体水平。结果长爪沙鼠感染CVA16后出现活动减少、后肢无力、麻痹瘫痪、死亡等临床症状,不同日龄沙鼠对CVA16感染的易感能力和感染后发病程度不同,7日龄和14日龄沙鼠易感,28日龄沙鼠不易感染,最敏感和最合适接种日龄为14日龄,其LD50为1×104.5 CCID50,感染3 d后其血液和主要组织器官中均可检测到高滴度的CVA16病毒,免疫两针灭活疫苗的14日龄沙鼠用LD50剂量攻毒,存活率87.5%,疫苗免疫诱导沙鼠产生的CVA16中和抗体几何平均值(GMT)为28.14,抗体阳性率为87.5%。结论长爪沙鼠对CVA16敏感并且病毒能在其体内进行有效的复制和繁殖,可作为CVA16致病机制研究、疫苗研发及药物评价的可靠小动物模型。
- 张锋高孟高丽美罗永能
- 关键词：柯萨奇病毒A16型长爪沙鼠动物模型
- 柯萨奇病毒A16型YY157株在Vero细胞中培养与增殖特性的研究被引量：5
- 2014年
- 目的 探索柯萨奇病毒A16型（CVA16） YY157株在非洲绿猴肾（Vero）细胞中培养与增殖的合适条件.方法 把CVA16 YY157株接种于Vero细胞适应性传代,挑斑纯化后,在不同条件下培养并比较其对病毒滴度的影响.结果 CVA16 YY157株在Vero细胞中培养能导致细胞病变（CPE）,可形成蚀斑.将此CVA16病毒以0.01 ～0.1MOI接种于Vero细胞,并在低于2％牛血清浓度的培养基,35℃培养60 h,CPE可达90％以上;此条件下收获培养液上清,可得到较高滴度的病毒.结论 初步建立了CVA16 YY157株在Vero细胞中培养与增殖的方法,为其下一步的大规模培养及疫苗制备奠定了基础.
- 张锋朱莲陈军高孟唐彩华周康凤高丽美罗永能
- 关键词：病毒培养
- 不同进箱温度对冻干甲肝疫苗的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:评价冻干进箱板层温度-20℃与5℃对冻干甲肝减毒活疫苗的CCID50、外观的影响。方法:选择同一批号,采用两种不同进箱温度,其余冻干工艺均相同的的冻干甲肝疫苗,分别比较CCID50、外观、废品率。结果:两种进箱温度的冻干甲肝疫苗的感染性滴度CCID50没有明显差异,5℃进箱外观要好于-20℃进箱,5℃进箱废品率更低。结论:5℃进箱冻干甲肝疫苗外观更饱满,废品率更低,利于大规模生产。
- 黄卫新朱莲吴海光蒋秀梅张锋沈立军陈念良
- 中性硼硅西林瓶在甲型肝炎疫苗生产中的应用被引量：2
- 2013年
- 目前，国内已普遍采用西林瓶替代安瓿瓶分装冻干粉针剂。西林瓶直接接触制品，其质量与疫苗质量直接相关。该生产工艺的优点是灌装过程可以实现机械化半加塞，冻干结束后在冻干箱内自动加塞，然后出箱轧盖，解决了安瓿瓶的玻屑和在运输过程易碎的缺陷，这种工艺对保证制品质量十分有益。
- 黄卫新朱莲陈卓张锋沈立军顾春燕陈念良
- 柯萨奇病毒YY157株在不同细胞系中的增殖特性被引量：1
- 2015年
- 目的了解柯萨奇病毒A16型（CoxA16）YY157株在多种细胞系中培养的增殖特性，为疫苗研制提供参考。方法把YY157株接种于非洲猴肾细胞（Vero）、人胚肺二倍体成纤维细胞MRC-5或KMBl7进行适应性传代培养，观察细胞病变情况，检测病毒感染性滴度，绘制增殖曲线。结果CoxA16YY157株在3种细胞中培养均产生细胞病变，在Vero细胞中病变早，增殖快，滴度达8．5lgCCIDs/mL；在MRC-5细胞中，此毒株增殖速度比在Vero细胞中慢，滴度达7．5lgCCID50/mL；在KMB17细胞中，此毒株增殖最慢，滴度只有7．0lgCCID如L。结论CoxA16型YY157株均可感染Vero、MRC-5和KMB17细胞并增殖，但敏感性和增殖速度有差异。
- 陈军朱莲张锋袁建国倪红霞高丽美罗永能
- 关键词：细胞培养技术柯萨奇病毒A16型细胞病变
- 针对肠道病毒71型的新型重组融合蛋白类病毒颗粒疫苗研制及其免疫效果评价
- 2017年
- 目的 研制针对肠道病毒71型（EV71）的新型重组类病毒颗粒疫苗,并评价其免疫效果.方法 利用诺如病毒（NoV）衣壳蛋白（VP1）P区（NoVP）可呈现外源抗原并形成类病毒颗粒的特点,构建获得只包含NoVP或在其表面环位点串联插入EV71衣壳蛋白的三个特异性抗原位点（VP1的SP55和SP70,VP2的VP2-28）基因片段,克隆至质粒pET-28a（＋）后分别转化大肠杆菌后诱导表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、免疫印迹和透射电镜鉴定和观察表达的重组融合蛋白（NoVP＋ EV71-SP55-SP70-VP2-28）和NoVP蛋白.同时,采用随机分组法将BALB/C小鼠分成A、B和C三组,每组10只,分别用重组融合蛋白（NoVP＋ EV71-SP55-SP70-VP2-28）、NoVP和透析液免疫获得抗血清,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中特异性抗体;将小鼠血清与EV71 H3-TY株混合,加入Vero细胞,通过微量中和实验检测特异性抗体效价.采用方差分析和Bonferroni检验对数据进行分析.结果 重组表达产物在大肠杆菌中以包涵体形式存在,SDS-PAGE显示重组融合蛋白和NoVP相对分子质量约为43×10^3和36×10^3;免疫印迹显示重组融合蛋白在相对分子质量约为43×10^3处有特异性条带,透射电镜观察显示重组融合蛋白呈现类病毒颗粒.ELISA显示与SP70多肽反应的小鼠血清吸光度（A490）值A组明显大于B组和C组（F=13.860,P＜0.05）;微量中和实验显示A组小鼠血清针对EV71 H3-TY株的几何平均中和滴度为1∶38.结论 本研究初步获得了针对EV71的一种新型重组融合蛋白类病毒颗粒疫苗,其具有良好的抗原性和特异性,能诱导小鼠产生较高中和滴度的特异性抗体.
- 蔡静顾春燕张锋高孟高丽美罗永能
- 关键词：肠道病毒属肠道病毒71型ENTEROVIRUS
