高丽美
- 作品数：31 被引量：50H指数：5
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- 柯萨奇病毒A16型衣壳蛋白VP1～VP3的B淋巴细胞线性抗原表位预测与确定被引量：7
- 2015年
- 目的 确定柯萨奇病毒A16型（CVA16）YY157株衣壳蛋白VP1～VP3的优势B淋巴细胞线性抗原表位。方法用生物信息学软件Lasergene分析CVA16YY157株衣壳蛋白VP1-VP3氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可及性，预测出包含潜在B淋巴细胞线性抗原表位的区段，并用BepiPred1．0Server进行评估。人工合成相应的多肽片段，用多肽-酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其与明确感染CVA16的患儿血清的阳性反应与否和程度，并以健康人血清作比较。结果根据抗原性强、亲水性强和表面性好的要求，共预测出21个可能的B淋巴细胞线性抗原表位。相应的人工合成多肽与感染CVA16的患儿血清均呈现阳性反应，但程度不同。结论成功预测并用实验证实了CVA16YY157株衣壳蛋白VP1～VP3的优势线性B淋巴细胞线性抗原表位。
- 高孟倪红霞朱莲李剑波高丽美罗永能
- 关键词：柯萨奇病毒感染酶联免疫吸附测定
- 肠道病毒71型H3-TY株衣壳蛋白VP1~VP3的优势线性B细胞抗原决定簇预测与确定被引量：6
- 2014年
- 目的确定肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）H3-TY株衣壳蛋白VP1-VP3的优势线性B细胞抗原决定簇位点。方法用生物信息学软件DNAStar中的Protean程序分析EV71 H3-TY株衣壳蛋白VP1-VP3氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可能性,预测出包含潜在线性B细胞抗原决定簇位点的区段,并计算各区段上述指数的加权平均值。人工合成相应的多肽片段,用多肽-酶联免疫吸附检测（多肽-ELISA）检测其与明确感染EV71的临床病患儿童血清的阳性反应与否和程度。结果根据抗原性强、亲水性强和表面性好的要求,共预测出15个可能的线性B细胞抗原决定簇位点。相应的人工合成多肽与感染EV71的临床病患儿童血清均呈现为阳性反应但程度不同,其中免疫显性最高的肽段为包含VP1氨基酸残基208-222位的VP1D。结论成功预测并用实验证实了EV71 H3-TY株衣壳蛋白VP1-VP3的优势线性B细胞抗原决定簇位点,有助于揭示EV71衣壳蛋白抗原特异性的分子基础。
- 高丽美高孟王静华唐彩华罗永能
- 关键词：肠道病毒71型
- 牛血清蛋白含量的高低对细胞生长的影响被引量：7
- 2005年
- 许多生物技术科学研究和产品的生产都离不开细胞培养。培养液是进行细胞培养的关键，而培养液的主要成分新生牛血清在细胞生产中使用最为广泛，是目前细胞培养中用量最大的天然培养基，它主要提供维持细胞生长的激素、结合蛋白、粘附蛋白、细胞贴壁因子、蛋白酶抑制剂，对细胞的生长繁殖发挥着至关重要的作用。
- 宋红英高丽美顾春燕吴洁
- 关键词：细胞生长蛋白含量细胞培养蛋白酶抑制剂结合蛋白
- 重组4-1BB配体对治疗性重组人乳头瘤病毒16型蛋白疫苗的佐剂作用
- 2017年
- 目的研究重组4-1BB配体（recombinant 4-1BB ligand，r4—1BBL）作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型（humanpapillomavirus16，HPVl6）蛋白疫苗（HPVl6蛋白疫苗）免疫效果的影响。方法对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化，并通过NdeI和XhoI酶切位点定向插入pET28a表达载体。将获得的重组表达载体转化至大肠埃希菌BL21（DE3），并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达。用蛋白质印迹法对重组蛋白进行鉴定，并用非还原性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电子显微镜分析重组蛋白结构。用CCK-8试剂盒检测纯化r4-IBBL对小鼠T细胞体外增殖的影响。同时将r4-1BBL与HPV16蛋白疫苗联合免疫C57BL／6小鼠，用酶联免疫斑点试验检测小鼠的细胞免疫应答水平，观察r4-1BBL对HPV16蛋白疫苗抑制肿瘤生长的影响。结果密码子优化的4-1BBL胞外功能区能在重组表达载体中表达，且表达产物同时以包涵体和可溶性形式存在。可溶性产物的结构主要为二聚体，电子显微镜下可以观察到类似亚单位的结构。纯化r4-1BBL可促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖。与单纯HPV16蛋白疫苗相比，r4—1BBL联合HPV16蛋白疫苗能诱导更强的特异性细胞免疫应答（t=3．525，P=0．024）和产生更明显的肿瘤生长抑制作用（t=2．534，P=0．021）。结论r4-1BBLL在小鼠中提高HPV16蛋白疫苗的免疫效果，具有作为HPV16蛋白疫苗佐剂的潜力。
- 高孟高丽美朱赟陈刚吴洁许玲敏罗永能庄昉成
- 关键词：佐剂免疫人乳头瘤病毒16
- 含有稳定剂的甲型肝炎减毒活疫苗及制备方法
- 一种含有稳定剂的甲型肝炎减毒活疫苗及制备方法,其疫苗包含有高浓度的氯化镁和硫酸镁,以及明胶、乳糖组成的甲型肝炎病毒稳定剂。将甲肝病毒浓缩液按每人份接种病毒量比例加入到上述含有甲型肝炎病毒稳定剂的基础氨基酸培养基(MEM)...
- 毛江森陈念良柴少爱张峰王平谢汝瑛高丽美余哲黄海鹰毛子安吴海光陈卓黄伟新钱汶刘春江
- 文献传递
- 柯萨奇病毒A16型感染性模型的建立及其相关免疫学指标和应用的评价被引量：5
- 2017年
- 目的建立简便和可靠的对柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CVA16)敏感的小型啮齿类实验动物模型。方法选取不同日龄长爪沙鼠,腹腔接种CVA16后连续观察14 d,筛选出对病毒敏感的最适接种日龄段;然后比较接种剂量与效应关系,测定其50%致死剂量(LD50);并测定感染3 d后其血液和主要组织器官中CVA16病毒滴度;最后用CVA16灭活疫苗在1日龄和11日龄免疫2针沙鼠后,在14日龄时用LD50剂量病毒攻毒,观察并记录沙鼠体重、症状及死亡率,2周后眼球采血,应用微量中和试验和ELISA分别检测中和抗体效价和总抗体水平。结果长爪沙鼠感染CVA16后出现活动减少、后肢无力、麻痹瘫痪、死亡等临床症状,不同日龄沙鼠对CVA16感染的易感能力和感染后发病程度不同,7日龄和14日龄沙鼠易感,28日龄沙鼠不易感染,最敏感和最合适接种日龄为14日龄,其LD50为1×104.5 CCID50,感染3 d后其血液和主要组织器官中均可检测到高滴度的CVA16病毒,免疫两针灭活疫苗的14日龄沙鼠用LD50剂量攻毒,存活率87.5%,疫苗免疫诱导沙鼠产生的CVA16中和抗体几何平均值(GMT)为28.14,抗体阳性率为87.5%。结论长爪沙鼠对CVA16敏感并且病毒能在其体内进行有效的复制和繁殖,可作为CVA16致病机制研究、疫苗研发及药物评价的可靠小动物模型。
- 张锋高孟高丽美罗永能
- 关键词：柯萨奇病毒A16型长爪沙鼠动物模型
- 柯萨奇病毒A16型YY157株在Vero细胞中培养与增殖特性的研究被引量：5
- 2014年
- 目的 探索柯萨奇病毒A16型（CVA16） YY157株在非洲绿猴肾（Vero）细胞中培养与增殖的合适条件.方法 把CVA16 YY157株接种于Vero细胞适应性传代,挑斑纯化后,在不同条件下培养并比较其对病毒滴度的影响.结果 CVA16 YY157株在Vero细胞中培养能导致细胞病变（CPE）,可形成蚀斑.将此CVA16病毒以0.01 ～0.1MOI接种于Vero细胞,并在低于2％牛血清浓度的培养基,35℃培养60 h,CPE可达90％以上;此条件下收获培养液上清,可得到较高滴度的病毒.结论 初步建立了CVA16 YY157株在Vero细胞中培养与增殖的方法,为其下一步的大规模培养及疫苗制备奠定了基础.
- 张锋朱莲陈军高孟唐彩华周康凤高丽美罗永能
- 关键词：病毒培养
- 冻干甲型肝炎减毒活疫苗(H_2株)诱导的人体特异性细胞免疫应答被引量：2
- 2008年
- 目的了解接种冻干甲型肝炎（甲肝）减毒活疫苗[Hepatitis A（Live）Vaccine，Freezedried；Hep A]后，机体能否产生特异性细胞免疫应答。方法研究对象经HepA（H2株）1剂次免疫，流式法检测淋巴细胞亚群CD2^＋、CD4^＋、CD8^＋的百分率及表达干扰素（IFN）-γ及白细胞介素（IL）-4的阳性细胞百分率；T淋巴细胞的特异性增殖试验（MTT法）检测T淋巴细胞增殖反应；酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测淋巴细胞的IFNγ分泌能力。结果接种后2周，CD^＋上升，以4周上升为显著，与接种前相比，差异有显著的统计学意义（t=2．571，P〈0．05）；接种后4周～3个月，淋巴细胞对特异性刺激物甲肝病毒的反应都有明显增强，与接种前相比，差异均有非常显著的统计学意义（t=3．215～3．959，P均〈0．01）；接种后2周，表达IL-4和IFN-γ的阳性细胞百分率上升，以IL-4为明显，与接种前相比，差异有显著的统计学意义（t=2．197，P〈0．05）；接种后3年，用ELISPOT法检测IFN-γ，阳性率为57．1％（8／14）。结论接种HepA（H2株）后，机体能有效地产生特异性细朐免疫席答。
- 忻亚娟贺义惠庄昉成高丽美钱汶唐彩华陈悦青柴少爱毛江森
- 关键词：细胞免疫
- Vero细胞肠道病毒71型灭活疫苗的纯化及鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的建立Vero细胞肠道病毒71型(EV71)灭活疫苗的纯化工艺。方法病毒收获液经离心澄清、福尔马林灭活和超滤浓缩后,采用Sephacryl S-400 HR凝胶过滤层析和Source 30Q离子交换层析2步层析法纯化EV71,进行各项检定及分析后除菌过滤。结果经纯化的疫苗各项纯化指标均符合中国药典2010年版的要求,杂蛋白去除率>99.9%;病毒纯化液在电镜下观察到典型的EV71病毒颗粒,经SDS-PAGE及Western blot分析,检测到与文献报道大小相符的EV71 VP1、VP2、VP3及特异性免疫反应;制备成疫苗后免疫大鼠能产生特异性中和抗体。结论本实验建立了Vero细胞的EV71灭活疫苗的纯化工艺,纯化后制备的EV71灭活疫苗具有较好的免疫原性。
- 姜云水高孟周康凤陈科达高丽美唐彩华朱莲毛江森
- 关键词：VERO细胞纯化
- 甲醛和β-丙内酯灭活柯萨奇病毒A组16型效果比较被引量：2
- 2015年
- 柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）是人手足口病的主要病原体，尽管多数病毒引起的临床症状较轻，但最近一些研究表明CoxA16也像EV71一样能引发严重的疾病，
- 朱莲朱赟高丽美倪红霞姜云水唐彩华周康凤
- 关键词：甲醛柯萨奇病毒A组16型灭活
