张旦旦
- 作品数：11 被引量：17H指数：2
- 供职机构：江南大学药学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程文化科学更多>>
- 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶介导的草酰乙酸回补途径对谷氨酸棒杆菌V1氨基酸代谢的影响被引量：2
- 2017年
- 【目的】谷氨酸棒杆菌是工业生产氨基酸的主要菌株,以缬氨酸高产菌株谷氨酸棒杆菌V1为研究对象,探讨磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)介导的草酰乙酸回补途径对菌株生理特性以及主要氨基酸代谢流量的影响。【方法】通过基因工程手段,在谷氨酸棒杆菌V1中过表达pepc(编码PEPC)和pck(编码PCK),比较重组菌与出发菌关键酶活性、发酵特性以及主要氨基酸积累量变化。【结果】构建两株重组菌V1-pepc(强化草酰乙酸回补途径)和V1-pck(弱化草酰乙酸回补途径),重组菌生长均较出发菌延缓,总生物量、葡萄糖和硫酸铵消耗基本不变;过表达pck,PCK活性提高22.8%,丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸、精氨酸积累量分别提高了11.8%、17.2%、27.8%和19.5%;过表达pepc,PEPC活性提高27.5%,同时PC活性降低12.9%,天冬氨酸族和谷氨酸族氨基酸的整体流量变化不大,丙氨酸族氨基酸的整体流量降低了14.7%。【结论】丙氨酸族氨基酸受此回补途径影响较大,天冬氨酸族氨基酸受此影响较小。
- 张旦旦仇爱梅鲍勇窦文芳许正宏
- 关键词：磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶
- 枯草芽孢杆菌突变株XLG-51产中温α-淀粉酶发酵条件优化
- 2015年
- 通过单因素实验和响应面分析对枯草芽孢杆菌XLG-51产中温α-淀粉酶的发酵产酶条件进行优化,实验结果表明:(1)种子最佳接种时间为对数后期(种龄20 h);(2)玉米粉和豆饼粉为发酵培养的最佳碳氮源;(3)通过对C/N(玉米粉:豆饼粉)、接种量和发酵液初始p H值这3个关键因素进行三因素三水平的响应面实验设计,优化得枯草芽孢杆菌XLG-51产中温α-淀粉酶的最优发酵条件为:C/N为3.76∶1,接种量为10.46%,初始发酵p H为6.54。经过三批次发酵实验验证,最优条件下产酶活性提高至6 897 U/m L,发酵周期缩短至66 h,生产强度达到104.5 U/(m L·h),较优化前提高27.3%。
- 张旦旦李文秀史劲松许正宏
- 关键词：枯草芽孢杆菌Α-淀粉酶
- 提高重组表达体系相对活性促进外源蛋白表达:人干扰素毕赤酵母表达体系研究被引量：1
- 2011年
- 以毕赤酵母KM71/IH的hIFNβ-HAS表达体系为研究对象,较为系统地研究了不同因素引起的细胞相对活性变化与毕赤酵母外源蛋白表达的相关性。结果表明:(1)细胞相对活性变化与外源蛋白的表达成正相关;(2)处在对数生长中后期的细胞相对活性最高,更适合用于外源蛋白的表达;(3)诱导阶段的环境因素直接影响诱导期细胞相对活性,合适的甲醇浓度、诱导pH及温度是维持细胞高活性,促进外源蛋白高表达的关键。对于hIFNβ-HAS表达体系最佳诱导条件为:以培养21～24h的细胞为诱导种子,初始甲醇浓度为2%(V/V),pH6.0,25℃,细胞活性维持在98%以上,hIFNβ-HSA表达量高达45.6mg/L,较优化前提高了62.3%。
- 窦文芳张旦旦许泓瑜金坚许正宏史劲松陆震鸣
- 关键词：毕赤酵母
- 一株产蛋白酶不动杆菌的分离与酶学性质被引量：3
- 2017年
- 以脱脂奶粉或羊毛粉为唯一碳氮源,从环境样品中筛选蛋白酶产生菌,首次获得一株高产蛋白酶的醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)E9,初步发酵优化显示,该菌株的最适发酵产酶温度35℃,培养基初始p H 6.0,接种量为质量分数4%,培养时间30 h;发酵培养基:蔗糖10 g/L,牛肉膏15 g/L,K_2HPO_4·3H_2O 7 g/L,KH_2PO_4 3 g/L,MgCl_2·6H_2O 1 g/L。酶学性质初步研究表明,不动杆菌E9所产的蛋白酶属于中性蛋白酶,最适作用温度50℃,最适pH 8.0,在p H5.0~8.0及40℃以下时具有良好的稳定性,酶反应动力学参数Km为7.067 mg/m L,Vmax为966.7μg/(m L·min)。
- 李伟龚劲松李恒张旦旦陆震鸣许正宏史劲松
- 关键词：蛋白酶醋酸钙不动杆菌酶学性质
- 光滑球拟酵母中α-酮戊二酸脱氢酶系生理作用解析被引量：1
- 2009年
- 【目的】研究α-酮戊二酸脱氢酶系在光滑球拟酵母碳代谢流、能量代谢和氨基酸代谢中的生理作用。【方法】通过敲除光滑球拟酵母中编码α-酮戊二酸脱氢酶系中E1酶的基因kgd1,构建α-酮戊二酸脱氢酶活性缺失菌株T.glabratakgd1::kan,并考察KGDH缺失引起TCA循环关键酶活性,碳代谢流量以及胞内氨基酸和能荷水平等方面的变化。【结果】光滑球拟酵母中α-酮戊二酸脱氢酶活性的缺失导致:(1)细胞启动乙醛酸途径,通过形成TCA-乙醛酸循环实现TCA循环的正常代谢;(2)胞内NADH/NAD+水平下降33.7%,ATP/ADP水平下降31.8%,而与NADH代谢相关的丙酮酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶的活性分别提高58.1%、33.3%和32.5%;(3)胞内丙酮酸含量下降50.1%,而胞内琥珀酸、苹果酸和α-酮戊二酸含量则分别增加了172.7%、66.1%和41.1%;(4)丙酮酸族氨基酸含量下降29.3%,而胞内谷氨酸族氨基酸和天冬氨酸族氨基酸含量则提高了34.7%和26.8%。【结论】上述研究结果表明,α-酮戊二酸脱氢酶系在微生物细胞中心碳代谢、能量代谢和氨基酸代谢中发挥着重要作用。
- 张旦旦刘立明堵国成陈坚
- 关键词：光滑球拟酵母Α-酮戊二酸丙酮酸
- 圆酵母B84512单倍体的制备及其产赤藓糖醇特性分析被引量：1
- 2013年
- 圆酵母B84512为工业用赤藓糖醇生产菌株,为获得其遗传育种单倍体亲本,以Mcclary产孢培养基进行该菌株子囊孢子萌发,萌发条件为:30℃,培养7 d,菌株产孢率为45%;以蜗牛酶裂解子囊孢子细胞壁150 min,共筛选出10株单倍体菌株,其中3株在发酵培养基中合成赤藓糖醇的能力相对较高,分别命名为Torula sp.B84512-7,Torula sp.B84512-8及Torula sp.B84512-9。经PCR验证,前两者为α型,后者为a型。将3株单倍体两两杂合,发现杂合子Torula sp.B84512-79的发酵性能最佳,赤藓糖醇产量高达97 g/L,约为出发菌株的56%。赤藓糖醇产量较高的单倍体亲本Torula sp.B84512-7及Torula sp.B84512-9可用于基因工程育种。
- 窦文芳高慧张旦旦张六六许正宏陆茂林
- 关键词：单倍体子囊孢子赤藓糖醇
- 细胞生物学实验的多媒体互动教学模式探索被引量：1
- 2017年
- 近年来,随着教学改革的持续深化和创新教育的不断推进,实践教学已成为培养高素质创新型人才的重要环节。细胞生物学实验是一门实践性很强的学科,随着信息技术和现代教育技术的发展,针对细胞生物学实验教学存在的问题,不断开展改革和创新。多媒体互动教学系统作为现代实验室教学的一种新手段,已逐渐被应用至细胞生物学的实验教学中。本文探讨了多媒体互动教学实验室的架构以及多媒体互动教学模式在细胞生物学实验教学过程中应用的优势,这对理工科实践教学具有一定的借鉴意义。
- 张旦旦蔡燕飞李会史劲松
- 关键词：细胞生物学实验
- 产角蛋白酶菌种的筛选及产酶条件的优化被引量：2
- 2014年
- 以传统的菌种选育方法,从7个土壤样品中筛选到1株产角蛋白酶活性较高的菌株金色链霉菌(Streptomyces aureus)K13,该菌株所产角蛋白酶为中温碱性角蛋白酶,最适温度为55℃,最适p H为8.5,分子质量约为46 k Da;该菌株产酶属于生长偶联型,摇瓶发酵周期为64 h;以羊毛角蛋白为底物发酵产角蛋白酶时添加合适的碳源(葡萄糖)或氮源(蛋白胨或Na NO3)对产酶有明显的促进作用;通过4因素3水平的正交实验设计,在最佳发酵培养基下,该菌株产酶活力达到44.2 U/m L,较优化前提高了10.3倍。
- 张旦旦余园张晓梅李恒许正宏史劲松
- 关键词：角蛋白酶金色链霉菌正交试验设计
- 碳氮源对Bacillus pumilus K9产角蛋白酶的影响被引量：2
- 2014年
- 对Bacillus pumilus K9以羊毛粉为底物产角蛋白酶的培养条件及培养基成分进行了单因素优化和正交试验,其中重点考察了碳氮源对K9产角蛋白酶的影响。实验结果表明,添加适量外加碳氮源比使用羊毛粉为唯一碳氮源更利于K9产角蛋白酶;葡萄糖、蔗糖和无机氮源等对产酶具有抑制作用,而适量的麦芽糖和酵母粉则对产酶具有促进作用。B.pumilus K9最适产酶条件为:麦芽糖15 g/L,酵母粉10 g/L,羊毛粉25 g/L,磷酸氢二钾0.4 g/L,氯化钠0.5 g/L;接种量6%,初始p H值为8.5,装液量为25 m L(250 m L),温度35℃,转速220 r/min,培养时间48 h,上述条件下最高酶活达到1 270 U/m L,较优化前提高了2.54倍。
- 王月张荣先张旦旦龚劲松李恒张晓梅许正宏史劲松
- 关键词：羊毛角蛋白角蛋白酶正交试验
- 中温α-淀粉酶高产菌株的选育及其粗酶性质被引量：4
- 2011年
- 以从自然界中筛选的野生芽孢杆菌XLG-1为出发菌株,通过紫外线诱变及紫外线-氯化锂复合诱变筛选出高产中温α-淀粉酶的优异菌株XLG-51,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。初步研究了其所产的α-淀粉酶的酶学性质:通过SDS-starch-PAGE电泳与酶谱分析得该酶分子质量为60 ku左右,最适作用温度为60℃,最适作用pH范围为5.0～6.5,且在最适条件下具有较强的稳定性。以该菌株为生产菌进行5 L罐发酵实验,产酶达5298 U/mL。
- 李文秀张旦旦窦文芳许泓瑜许正宏史劲松陆震鸣
- 关键词：枯草芽孢杆菌Α-淀粉酶诱变
