俞海燕
- 作品数：9 被引量：42H指数：3
- 供职机构：北京大学第三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科委基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 探讨干细胞疗法在我国临床应用的管理现状被引量：1
- 2016年
- 干细胞的自我更新与多向分化的生物学特性使干细胞疗法在许多疑难性疾病的治疗中获得较好的临床疗效，甚至在某些被认定为“绝症”的疾病治疗中，也展现出良好的治疗前景，给临床医生和患者在绝望中带来了信心与希望。本文介绍了国内外干细胞治疗的政策、管理制度及现状，指出我国干细胞治疗行业主要问题，并对我国干细胞疗法在科研管理和临床应用的争议进行探讨。
- 刘慧俞海燕吴文涛张纯
- 关键词：干细胞治疗
- 成人骨髓间充质干细胞体外向视网膜细胞的诱导分化被引量：3
- 2014年
- 目的研究取材于成人骨髓的间充质干细胞在一定诱导条件下向视网膜神经细胞的分化。方法成人骨髓经密度梯度离心得到的细胞,根据其高黏附特性体外培养获得间充质干细胞。利用流式细胞仪分析其细胞表型,在体外诱导使其向视网膜神经细胞分化并用免疫荧光法进行鉴定。结果从骨髓中分离培养的细胞具有成纤维细胞样形态,贴壁生长,表型相对均一,表面标志为CD90、CD44、CD147阳性;而CD34、CD38、CD45、CD14、HLA-DR阴性。体外诱导后可以得到表达nestin(神经干细胞标志物)、GFAP(神经胶质细胞标志物)和Rhodopsin(视网膜光感受器细胞标志物)阳性的细胞。结论从人骨髓中分离培养得到的间充质干细胞具有向视网膜神经细胞分化的潜能。
- 俞海燕吴文涛王薇张纯
- 关键词：间充质干细胞视网膜体外诱导分化免疫荧光染色RHODOPSIN
- 一种利用脐带来源间充质干细胞培养人胚胎干细胞的方法
- 本发明公开了脐带来源间充质干细胞的应用和人胚胎干细胞的培养方法。本发明所提供的增殖培养人胚胎干细胞的方法，包括如下步骤：用离体的人脐带间充质干细胞作为饲养层，对离体的人胚胎干细胞进行增殖培养，得到增殖的人胚胎干细胞。本发...
- 张纯徐永胜王薇张绍敏俞海燕刘峰
- 文献传递
- 永生化胚胎视网膜干细胞的体外诱导分化被引量：1
- 2005年
- 目的 :研究R718B2永生化视网膜干细胞系细胞的体外诱导分化。方法 :对R718B2细胞系细胞进行体外培养扩增 ,利用含有表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor,EGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)及白血病抑制因子 (leukemiainhibitoryfactor,LIF)等生长因子的DMEM/F12培养液对第 4 3代细胞进行体外诱导分化 ,免疫荧光细胞化学鉴定诱导后细胞的抗原表达。结果 :诱导后的R718B2细胞系细胞增殖速度减慢 ,细胞表达微管相关蛋白 2 (micro tubule associatedprotein 2 ,MAP2 )、胶质源性纤维酸性蛋白 (glialfibrillaryacidprotein ,GFAP)、蛋白激酶C α(proteinkinaseC α ,PKC α)、Thy1 1及Calretinin ,同时部分细胞仍表达巢蛋白 (Nestin) ,但未见视紫红质 (Rhodopsin)表达。结论 :R718B2细胞是一种多能视网膜干细胞。在EGF及bFGF等多种生长因子的共同作用下 ,该细胞系中部分细胞仍能表达未分化细胞标记物Nestin ,部分细胞开始向神经元、神经胶质细胞及双极细胞、神经节细胞和无长突细胞等视网膜终末细胞方向分化。
- 由德勃俞海燕王薇
- 关键词：视网膜干细胞分化细胞培养
- 人胚胎视网膜来源神经干细胞体外培养尝试被引量：3
- 2005年
- 目的从人胚胎视网膜中分离、培养神经干细胞。方法人16～20周胚胎视网膜制备的单细胞悬液,分别在无血清和有血清条件下进行体外培养,采用免疫荧光法检测培养的细胞对nestin和视网膜终末细胞抗原的表达,采用RTPCR方法和实时荧光定量PCR法检测诱导前后细胞nestin基因在mRNA水平的表达差异。结果可从人胚胎视网膜神经感觉层中培养出神经干细胞。该细胞具有自我复制能力,表达nestin,经不同条件诱导后细胞表达视网膜视杆细胞、无长突细胞、双极细胞、节细胞和米勒细胞等标志。诱导后细胞nestin基因表达量较诱导前细胞明显降低。结论人胚胎视网膜神经感觉层中存在具有自我更新能力和多分化潜能的神经干细胞。
- 俞海燕沈丽王薇
- 关键词：神经干细胞体外培养细胞分化
- 大鼠视网膜光损伤前、后视觉介导的行为变化被引量：5
- 2005年
- 目的通过观察大鼠视细胞光损伤模型的视觉运动行为,评价光感受器细胞的损伤、死亡和视功能的对应关系,以期建立评估动物视功能的方法。方法21只SD大鼠分为3组,暗适应24h后选用(950±50)流明绿色光分别照射3、12、24h,光照后暗适应24h,暗适应完成48h后摘除眼球,冷冻切片分别行HE、rhodopsin免疫荧光染色;以大鼠视觉意识障碍反应、前置刺激反应作为视功能的判断指标,分别于光损伤前、后2d测定大鼠的视觉运动行为,对SD大鼠光损伤前、后的平均运动速度作统计学分析。对照组为7只双眼球摘除术后的大鼠。结果视觉意识障碍反应、前置刺激反应结果表明,随着光照时间的延长,动物的视觉意识障碍反应逐渐丧失,前置刺激反应逐渐增强。统计学结果显示,SD大鼠的视觉运动行为变化是与视功能相关的。随着损伤程度的加重,SD大鼠视觉运动的平均运动速度出现渐进性下降的变化。结论随着视细胞损伤程度的加重,SD大鼠的视功能呈现渐进性的下降,其视觉运动的平均运动速度亦出现相应的变化。视觉运动行为测试可以用于对SD大鼠的视功能进行定量的评估。
- 李学民陈晓勇沈丽张纯由德勃陈雪俞海燕王薇
- 关键词：光感受器视觉障碍
- 人脐带间充质干细胞作为维持人胚胎干细胞生长饲养层细胞的研究被引量：10
- 2011年
- 目的寻找可以维持人胚胎干细胞未分化生长的人源性细胞作为饲养层细胞,从而解决使用鼠源性细胞作为饲养层带来的安全问题。方法尝试以人脐带间充质干细胞作为饲养层细胞来培养人胚胎干细胞,检验其是否可以维持人胚胎干细胞的未分化生长状态。用胶原酶消化法分离人脐带间充质干细胞,光镜下观察细胞形态;流式细胞仪检测其表面标志;诱导人脐带间充质干细胞向成骨细胞和脂肪细胞进行分化。将人胚胎干细胞系H1接种于丝裂霉素C灭活后的人脐带间充质干细胞上,每隔5d进行一次传代。培养20代后,对人胚胎干细胞特性进行相关检测,包括细胞形态、碱性磷酸酶染色、相关多能性基因的表达、分化能力。结果从人脐带中分离出的间充质干细胞为梭形,呈平行排列生长或漩涡状生长;细胞高表达CD44、CD29、CD73、CD105、CD90、CD86、CD147、CD117,不表达CD14、CD38、CD133、CD34、CD45、HLA-DR;具有分化成脂肪细胞和成骨细胞的潜能。人胚胎干细胞在人脐带间充质干细胞饲养层上培养20代后,继续保持人胚胎干细胞的典型形态,碱性磷酸酶染色为阳性,免疫荧光染色显示OCT4、Nanog、SSEA4、TRA-1-81、TRA-1-60的表达为阳性,SSEA1表达为阴性,体外悬浮培养可以形成拟胚体。结论人脐带间充质干细胞可以作为人胚胎干细胞的饲养层细胞,支持其生长,并维持其未分化生长状态。
- 刘峰徐永胜俞海燕王薇张纯
- 关键词：人胚胎干细胞小鼠胚胎成纤维细胞人脐带间充质干细胞饲养层细胞
- 体外培养人胚胎来源视网膜干细胞的诱导分化被引量：17
- 2004年
- 目的探讨培养的人胚胎来源视网膜干细胞向视网膜终末细胞分化的可能性。方法来自16-20周人胚胎的视网膜干细胞进行无血清体外培养,并分别进行有血清条件下体外诱导和用含视网膜色素上皮的眼杯模拟体内条件诱导的观察,采用免疫荧光法检测干细胞和视网膜终末细胞表面抗原的表达,采用实时荧光定量PCR法检测诱导前后细胞nestin基因在mRNA水平的表达差异。结果从人胚胎视网膜神经感觉层分离出的视网膜干细胞,在体外诱导的条件下,可表达视网膜终末细胞标记PKCα、GFAP、Thy1,少数细胞表达nestin和MAP2;在模拟体内环境诱导后,则不仅表达上述细胞标记,而且rhodopsin和syntaxin表达阳性。实时荧光定量PCR法检测显示:诱导后细胞nestin基因表达量较诱导前细胞明显降低。结论RPE可以促进体外培养的视网膜干细胞向视杆细胞和无长突细胞分化。(中华眼科杂志,2004,40:448-452)
- 俞海燕沈丽陈雪由德博陈晓勇王薇
- 关键词：体外培养胚胎视网膜干细胞细胞分化视网膜疾病
- 大鼠视网膜光损伤模型的行为观察被引量：3
- 2005年
- 目的 进行可见光照射所致大鼠视网膜光性损伤后的行为测试 ,探讨动物视功能与行为的关系。方法 2 1只SD大鼠在 (95 0± 5 0 )lx绿色光损伤仪光照 3、12、2 4h ,实验前及实验后暗适应 2 4h ,光损伤前 2d及光损伤后 2d测定大鼠的头部视动跟踪反应、前置刺激反应。光损伤后 72h摘除眼球 ,冰冻切片后行HE、Rhodopsin免疫荧光染色 ,光镜观察。实验对照组为 7只双眼球摘除术后的大鼠。结果 随着光照时间的延长 ,动物的头部视动跟踪反应逐渐丧失 ,对照组反应最弱 ,前置刺激反应逐渐增强 ,对照组反应最强。结论 不同程度的视细胞损伤后的动物行为是不同的 ,随着损伤程度的加重 。
- 陈晓勇沈丽张纯由德勃陈雪俞海燕王薇
- 关键词：视网膜光损伤免疫荧光染色动物光照时间摘除
