高体琪
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 供职机构：集美大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程更多>>
- 人内皮抑素基因的定点突变及其在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的对人内皮抑素(hES)基因进行定点突变,提高其在大肠杆菌中的可溶性表达量。方法根据Internet网站提供的关于hES的结构信息及其结构与功能方面的研究文献,设计突变位点;利用生物信息学的相关网站,对hES突变体进行结构预测,验证突变位点设计的合理性;采用重叠延伸PCR方法进行hES基因的定点突变,并将突变基因和未突变基因分别亚克隆至表达载体pGEX-4T-3,在大肠杆菌中进行融合表达,比较突变前后目的蛋白的可溶性表达量。结果三级结构预测结果表明突变位点设计合理,序列分析结果表明实现了hES基因的定点突变。突变基因的表达产物中,可溶性部分约占总表达量的40%,而未突变基因的表达产物几乎全部为包涵体。结论已成功对hES基因进行了定点突变,突变后的hES可溶性表达量得到了提高。
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- 关键词：人内皮抑素定点突变可溶性表达重叠延伸PCR
- 偶氮染料脱色菌株AZR偶氮还原酶基因的克隆及其序列分析被引量：2
- 2009年
- 利用16SrRNA鉴定偶氮染料脱色菌株AZR属于葡萄球菌属(Staphylococcus)中的科氏葡萄球菌(Staphylococcus cohnii),根据GenBank上登录的葡萄球菌属的3个偶氮还原酶基因序列设计扩增引物,从菌株AZR的基因组中扩增出偶氮还原酶基因,其大小为567bp,编码188个氨基酸。GenBank搜索表明其为新基因,递交GenBank数据库,获得登录号为EU849488。通过互联网数据库及生物信息学分析工具进行初步分析表明,该基因编码的蛋白属于黄素蛋白家族,是一种依赖NADPH的FMN还原酶;是一种等电点为5.75的稳定蛋白,定位于细胞质中;由α螺旋、延伸带和随机卷曲3种形式组成;具有蛋白激酶C磷酸化等多个位点,并具有一个强跨膜疏水区。
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- 关键词：偶氮还原酶基因克隆生物信息学
