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谷氨酰胺转氨酶对荞麦分离蛋白凝胶特性的影响被引量：1: 2022年; 以荞麦(Fagopyrum esculentum Moench.)为原料,通过碱溶酸沉法提取荞麦分离蛋白(BPI),分别采用真空冷冻干燥与喷雾干燥制备蛋白粉,研究谷氨酰胺转氨酶(TGase)及不同干燥方式对荞麦分离蛋白理化性质和凝胶特性的影响。结果表明,冷冻干燥荞麦分离蛋白(FBPI)的蛋白组成与BPI类似,而喷雾干燥荞麦分离蛋白(SBPI)的13S球蛋白发生降解。FBPI和SBPI的α-螺旋含量分别为22.10%和20.00%,β-转角含量为19.40%和19.80%,表明喷雾干燥会使蛋白结构更加无序化。SBPI的表面疏水性指数显著(P<0.05)高于FBPI与BPI。与BPI相比,SBPI具有更高的表面疏水性和更均匀的粒径,但溶解度和持水能力较低,而FBPI具有与BPI相似的物理化学性质。加入TGase后,FBPI和SBPI的平均粒径分别由213.01与192.55 nm增加至2289.01与1439.67 nm,表明发生了交联反应。BPI、FBPI和SBPI的电位分别为−15.93、−29.43、−29.35 mV,表明干燥处理能进一步提高蛋白的溶液稳定性。相比于SBPI,BPI和FBPI在升温过程中G'持续下降,表明热处理会破坏BPI和FBPI的蛋白凝胶结构。经加热处理再进行冷却,FBPI的G'显著(P<0.05)高于SBPI与BPI,具有更好的凝胶性。TGase能显著(P<0.05)提高FBPI的储能模量与热稳定性,但对SBPI作用不明显。化学作用力结果显示,疏水相互作用和二硫键是凝胶主要作用力;TGase能有效促进凝胶结构中疏水相互作用和二硫键形成,但会导致蛋白分子间氢键断裂。由此可见,通过冷冻干燥制备的荞麦蛋白能在TGase的作用下形成凝胶性与稳定性较好的凝胶。本研究的结果为荞麦分离蛋白凝胶特性研究及其凝胶类食品的开发与应用提供理论参考。; 孙乐常王瑜翁凌翁凌缪松刘光明曹敏杰; 关键词：荞麦分离蛋白冷冻干燥凝胶特性

鲢骨骼肌过敏原小清蛋白的分离纯化及多克隆抗体制备与应用被引量：9: 2010年; 小清蛋白是鱼类的主要过敏原,对该蛋白的研究不仅有利于过敏原检测方法的建立也可为低致敏性水产品的开发提供理论依据。通过组织捣碎、冷冻离心、热处理、Superdex75凝胶过滤等方法从鲢白色肉中纯化得到过敏原小清蛋白。Tricine-SDS-PAGE显示,在非还原条件下,该蛋白呈分子量分别为12ku、14ku、24ku的3个条带。而在还原条件下,仅有分子量为12ku的条带。Western-blotting分析表明,分子量为12ku、14ku和24ku的这3个条带都与小鼠抗蛙小清蛋白单克隆抗体(PARV-19)发生特异性反应,提示它们均为小清蛋白的不同形态。用纯化的小清蛋白制备多克隆抗体,经Protein A Sepharose亲和层析纯化得到高纯度的免疫球蛋白G(IgG)。Dot-blot检测发现,抗体稀释至1/51200时仍能与纯化的小清蛋白有显色反应。用制备的多克隆抗体进行Western-blotting分析,能特异地检测4种鱼(鲤、鲢、鲫、黄鳍鲷)中的小清蛋白。; 汪宁蔡秋凤刘光明陈昭华王锡昌苏文金曹敏杰; 关键词：小清蛋白纯化多克隆抗体

鱼皮明胶蛋白膜的制备及其性质改良被引量：20: 2012年; 利用罗非鱼鱼皮提取明胶制备蛋白膜,考察了浸提条件和戊二醛的添加对明胶蛋白膜性质的影响.结果表明,利用罗非鱼鱼皮可以制备成无色透明的明胶蛋白膜.在80℃水浴条件下,伴随着明胶浸提时间的延长,膜的抗拉伸强度(TS)出现先上升后下降的趋势,在浸提时间为1.0 h时达到最大值.而膜的断裂延伸率(EAB)和水蒸气透过率(WVP)则随着浸提时间的增加而下降.然而,浸提时间对膜的透光率没有显著影响.另一方面,当利用质量分数为1%～4%(相对明胶蛋白)的戊二醛对蛋白膜进行改性时,膜的TS、EAB、WVP和溶解性均明显下降,而蛋白膜的色泽变黄,紫外线阻隔能力增强.利用SDS-PAGE分析发现,戊二醛的添加会使明胶分子发生交联反应,且反应更易在高分子成分之间发生.; 陈书霖陶忠吴菲菲曹敏杰翁武银; 关键词：罗非鱼鱼皮明胶蛋白膜戊二醛理化性质

一种检测鱼糜制品中谷氨酰胺转氨酶的方法: 本发明涉及食品添加剂的检测方法，具体是指一种检测鱼糜制品中谷氨酰胺转氨酶的方法，包括谷氨酰胺转氨酶食品添加剂的分离纯化、谷氨酰胺转氨酶浓度的测定、Western‑blotting灵敏度的检测分析、采取建立的Western...; 张凌晶曹敏杰刘光明孙乐常章骞靳小莹; 文献传递

一种茶味鸭翅的加工方法: 一种茶味鸭翅的加工方法，涉及禽类食品加工。1)将冷冻鸭翅放于解冻池中解冻，清洗后沥水；2)将步骤1）沥水后的鸭翅放入预煮液中煮沸；3)将步骤2）得到的鸭翅放入盐茶水腌制液中腌制；4)将腌制后的鸭翅放入卤汤中卤制；5)将步...; 刘光明刘加聪张其标曹敏杰卢浩; 文献传递

猪血激肽原的分离纯化及其对白鲢鱼鱼糜的凝胶作用被引量：5: 2012年; 以猪血为原材料,通过硫酸铵盐析和柱层析等方法,分离纯化出2种半胱氨酸蛋白抑制剂激肽原(kininogen).激肽原Ⅰ的得率为0.7%,纯化倍数为613.7;激肽原Ⅱ的得率为24.1%,纯化倍数为295.7.SDS-PAGE结果表明,激肽原Ⅰ和激肽原Ⅱ的分子质量分别为58 ku和116 ku.激肽原Ⅰ和激肽原Ⅱ对白鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)鱼浆中肌原纤维蛋白降解都有一定的抑制作用,当激肽原Ⅱ添加量为鱼浆质量的0.03%时,可以使鱼糜凝胶强度提高24%.因此,激肽原可作为添加剂有效提高鱼糜制品的凝胶强度.; 钟婵江韬玲翁武银蔡秋凤翁凌曹敏杰; 关键词：组织蛋白酶猪血白鲢鱼

小龙虾粗提物体外降解小鼠肌肉的研究: 本研究旨在明确小龙虾致横纹肌肉溶解综合征的危害物的存在部位。本研究分别用不同提取液(PBS、盐溶液、正己烷)提取熟小龙虾的不同部位(肌肉、鳃肠、腺体)，得到粗提物；通过SDS-PAGE分析不同浓度粗提物在体外降解小鼠肌肉...; 林江伟曹敏杰蔡秋凤翁武银刘光明; 关键词：小龙虾降解

重组鲫鱼MBSP表达菌株的构建方法: 本发明提供一种重组鲫鱼MBSP表达菌株的构建方法，所述表达菌株以巴斯德毕赤酵母GS115为宿主菌，并含有重组酵母表达载体pPIC9K-MBSP；且该重组酵母表达载体pPIC9K-MBSP通过将鲫鱼MBSP基因插入酵母表达...; 杜翠红曹敏杰韩龙; 文献传递

蓝圆鲹肝脏酯酶的分离纯化与性质分析: 2022年; 以蓝圆鲹肝脏为对象,通过硫酸铵盐析、Q-Sepharose阴离子交换柱层析、Q-HP阴离子交换柱层析、Phenyl Fast Flow疏水柱层析和Superdex G75凝胶过滤柱层析技术分离纯化得到一种酯酶。该酶的回收率为0.69%,纯化倍数为1150倍。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳与Superdex G75凝胶过滤柱层析结果显示纯化得到的酯酶分子质量为61.18 kDa。肽指纹图谱显示其肽段与红鳍东方鲀假定脂酰辅酶A水解酶一致。该酶的最适条件为pH 8.0、50℃;在pH 6.0~10.0、温度4~40℃条件下稳定性较高;金属离子K^(+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)、Al^(3+)和Fe^(2+)会使酯酶活性显著下降,而Ba^(2+)、Ca^(2+)、Mn^(2+)、Co^(2+)和Mg^(2+)则会促进酶活性;该酶对甲醇、乙醇、丙酮和异丙醇等有机溶剂与盐具有较强的耐受性。底物特异性表明该酶在水溶液中偏向于水解中短链酯,对长链酯无水解活性,而在乳化体系中对长链酯也有较高的水解活性,显示出其具有酯酶与脂肪酶的双重活性。; 孙乐常文嘉欣杜瀚林怡晨刘光明刘光明; 关键词：蓝圆鲹肝脏酯酶纯化性质分析

鲢小清蛋白的cDNA克隆及在大肠杆菌中的原核表达被引量：1: 2014年; 以鲢(Hypophthalmichthys molitrix)肌肉cDNA为模板,利用小清蛋白特异性引物进行PCR扩增,克隆得到β小清蛋白两种不同亚型,即Ⅰ型、Ⅱ型编码区基因。将目的基因片段连接到pET28a(+)表达载体,并在大肠杆菌[E.coli BL21(DE3)]中诱导表达。结果表明,经诱导的小清蛋白重组质粒菌株有特异的蛋白表达。SDS-PAGE分析显示,目的蛋白的分子量约为13 kD,与预期大小一致。菌体超声破碎后发现2种亚型的小清蛋白均为可溶表达。利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,得到高纯度的重组小清蛋白PVⅠ和PVⅡ。经Western Blot鉴定,重组小清蛋白PVⅠ和PVⅡ均能与抗鲢小清蛋白单克隆抗体反应。本研究为进一步分析小清蛋白的结构与致敏性的关系提供了重要的基础。; 王慈曹敏杰郑晓江詹春兰刘光明蔡秋凤; 关键词：小清蛋白 CDNA克隆原核表达

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曹敏杰

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