张稚兰
- 作品数：7 被引量：22H指数：3
- 供职机构：集美大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程更多>>
- 富硒海洋球石藻(Emiliania huxleyi)的培养及其硒蛋白的初步分离纯化被引量：7
- 2010年
- 在不同浓度亚硒酸钠(Na2SeO3)条件下培养海洋球石藻,分析其生长和富集硒情况,并采用(NH4)2SO4分级盐析、DEAE-Sepharose离子交换柱层析和SephacrylS-200凝胶过滤层析方法,对球石藻硒蛋白进行了初步分离纯化。结果表明,在本实验条件下,不添加外源硒的f/2培养基本底硒浓度(约3.2nmol/L)为海洋球石藻最佳生长和富硒的硒浓度,其细胞内硒含量可达到6475?g/g干重。离子交换和凝胶层析分离的含硒蛋白结合的最高硒含量分别达到392.3ng/mg和663.5ng/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定显示,在分子量分别约为41.3kDa和30.1kDa处各有单一电泳条带。结果提示,海洋球石藻能在环境硒浓度极低的条件下大量吸收硒并将大部分无机硒转化为硒蛋白。富硒能力较强的海洋球石藻有望作为一种新的有机硒资源,对开发含硒安全性食品具有很大的应用潜力。
- 刘静雯张稚兰杜翠红黄志勇
- 海洋球石藻Emiliania huxleyi(Prymnesiophyceae)病毒主要外壳蛋白基因的克隆与序列分析被引量：4
- 2009年
- 在实验室纯培养条件下,用过滤的海洋球石藻特异性病毒(Emiliania huxleyi virus,EhV)EhV-99B1株感染球石藻(E. huxleyi,Eh),建立病毒与宿主之间稳定的感染体系,病毒裂解滤液经卷式切向流超滤和PEG8000浓缩、CsCl密度梯度离心,获得足量高纯度的病毒颗粒。根据已报道的其它EhV株系主要外壳蛋白(MCP)基因内保守片段设计合成一对特异引物,从EhV-99B1病毒基因组中克隆到了长度约为300bp的病毒外壳蛋白基因保守片段。该片段与pBS-T载体连接后转化Escherichia coli DH5α,对筛选到的阳性克隆进行序列测定与分析。结果表明,该克隆片段与GenBank中EhV163(AF453851)分离株的同源性最高,该区域内的核苷酸与对应推导的氨基酸序列同源性均为100%,证实获得的DNA片段是EhV-99B1的外壳蛋白基因;与EhV203(AF453855)分离株的核苷酸及氨基酸序列的同源性较低,分别为93%和100%。表明该病毒在自然海域中分布广泛并具有一定的多态性,同时在进化上也存在相当的复杂性。因此,MCP基因可以作为一种新的分子遗传标记以区分自然群落中EhV的不同基因型,对于理解海洋球石藻类病毒与宿主之间复杂的相互作用关系将是一个十分有价值的工具。
- 张稚兰刘静雯董双林苏国成张彦锋
- 关键词：基因克隆与序列分析
- 海洋球石藻(Emiliania huxleyi)病毒两种功能基因的克隆表达及其初步应用研究
- 病毒是海洋环境中丰度最高的一种生物体，平均密度高达106～109VLPs/ml，高丰度的病毒形成了地球上潜在的基因多样性库。海洋病毒基因组携带了大量功能基因，但超过50%的病毒基因（CDS）功能尚末确定。海洋球石藻（Em...
- 张稚兰
- 关键词：硫氧还蛋白抗体制备克隆表达
- 微藻类病毒与宿主之间微生态关系被引量：3
- 2009年
- 病毒感染、杀死和裂解微藻是海洋生态系统中的普遍现象,在自然海洋环境中,有多种因素可以导致浮游植物细胞的损失,其中微藻的自然死亡(即细胞裂解)率是导致微藻损失的一个重要因素。由病毒介导的宿主死亡不仅可影响藻类物种的种间演替,也可能会影响种内演替、藻类群落的丰度及多样性等。越来越多的证据表明,病毒可以通过减少宿主种群数量或防止藻类宿主种群数量达到高峰的方式来控制浮游植物动力学指标。因此,藻类病毒与宿主之间的相互作用在赤潮动力学和感染的传播中发挥了重要作用。同时,病毒具有高度特异性宿主范围的发现拓展了我们对微藻种群动力学过程的认识。本文从病毒-微藻稳定感染系统模型、病毒对微藻种群动力学的调节、病毒介导的微藻死亡、宿主对病毒侵染的防御以及影响病毒与宿主相互作用的环境因素等方面综述微藻类病毒与宿主的相互作用关系。
- 刘静雯董双林张稚兰张彦锋
- 关键词：海洋病毒
- 海洋球石藻病毒(Coccolithovirus)硫氧还蛋白(Trx)在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达及其活性分析被引量：1
- 2012年
- 从实验室保存的pBS-Trx重组质粒中克隆球石藻病毒EhV-Trx基因,构建毕赤酵母重组表达载体pPIC9K-EhV-Trx,将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,诱导分泌表达并对重组蛋白进行二硫键还原酶活性分析。结果表明,EhV-Trx基因开放阅读框为591bp,编码197个氨基酸;在毕赤酵母GS115中成功诱导表达重组EhV-Trx,经SDS-PAGE分析目的蛋白分子量约为27.8kDa;重组EhV-Trx具有二硫键还原酶的活性,能有效打开胰岛素A、B两条链的二硫键,有望开发成一种新型的硫氧还蛋白脱敏制剂应用于食品安全领域。
- 蔡艺钦张稚兰罗邦彬刘静雯
- 关键词：硫氧还蛋白毕赤酵母活性分析
- 偶氮染料脱色菌株AZR偶氮还原酶基因的克隆及其序列分析被引量：2
- 2009年
- 利用16SrRNA鉴定偶氮染料脱色菌株AZR属于葡萄球菌属(Staphylococcus)中的科氏葡萄球菌(Staphylococcus cohnii),根据GenBank上登录的葡萄球菌属的3个偶氮还原酶基因序列设计扩增引物,从菌株AZR的基因组中扩增出偶氮还原酶基因,其大小为567bp,编码188个氨基酸。GenBank搜索表明其为新基因,递交GenBank数据库,获得登录号为EU849488。通过互联网数据库及生物信息学分析工具进行初步分析表明,该基因编码的蛋白属于黄素蛋白家族,是一种依赖NADPH的FMN还原酶;是一种等电点为5.75的稳定蛋白,定位于细胞质中;由α螺旋、延伸带和随机卷曲3种形式组成;具有蛋白激酶C磷酸化等多个位点,并具有一个强跨膜疏水区。
- 杜翠红高体琪张稚兰周集体
- 关键词：偶氮还原酶基因克隆生物信息学
- 海洋球石藻(Emiliania huxleyi)病毒硫氧还蛋白(TRX)基因的克隆及生物信息学分析被引量：6
- 2010年
- 首次从海洋球石藻病毒(Emiliania huxleyi virus-EhV99B1)中克隆了硫氧还蛋白(Trx)基因(该序列已提交GenBank,登录号:GU109280)。系统进化关系分析表明:EhV99B1-Trx与GenBank中已报道的EhV86-Trx(NC_007346)有很高的同源性,核酸及其推导的氨基酸序列的同源性分别为98%和100%,而与其它物种的Trx序列同源性仅为9.8%-18.8%。采用生物信息学方法和工具分析了EhV99B1-Trx的生化参数,预测了该蛋白的高级结构。结果表明:(1)EhV99B1-Trx基因的开放阅读框全长591bp,编码196个氨基酸,蛋白的相对分子量为22.1kDa,理论等电点为5.27;(2)EhV-99B1-Trx N端蛋白结构域具有保守的Cys-Gly-Pro-Cys(CGPC)硫氧还蛋白氧化还原活性位点氨基酸基序;(3)对该蛋白二、三级结构分析预测结果进一步证实EhV99B1-Trx基因编码的为一种新型的硫氧还蛋白家族成员。
- 张彦锋刘静雯张稚兰董双林
