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登革病毒大片段NS3基因扩增的方法探讨被引量：4: 1999年; 目的：探索一种快速、实用的扩增登革病毒大片段基因的方法。方法：用登革２型新几内亚Ｃ株（ＤＶ２，ＮＧＣ株）的核酸（ＲＮＡ）为模板，研究了在不同条件下（病毒和其变性液的量以及ｃＤＮＡ的浓度等）通过逆转录聚合酶链式反应技术扩增大片段ＮＳ３基因，并对扩增的目的基因用巢式ＰＣＲ进行了鉴定。结果：用大量的或小量的登革病毒培养上清中提取ＲＮＡ的方法在一定条件下均可扩增出大片段ＮＳ３基因。结论：小量登革病毒提取ＲＮＡ扩增大片段ＮＳ３基因法较大量登革病毒提取ＲＮＡ扩增大片段ＮＳ３基因快速、实用。; 晏辉钧江丽芳潘文彤李向群方丹云陈元郭辉玉; 关键词：登革病毒遗传学聚合酶链反应基因扩增

两种不同来源的EBVLMP1基因在Balb/c3T3细胞中的表达被引量：1: 2000年; 【目的】研究来源于鼻咽癌细胞株SUNE1及EBV标准株B95 - 8细胞中两种EBVLMP1基因在真核细胞Balb/c3T3中的表达 ,为进一步研究EBVLMP1基因的核酸疫苗打基础。【方法】将两种不同来源EBVLMP1基因的真核表达质粒 ,经脂质体法转染Balb/c 3T3细胞后 ,用Westernblot、免疫组化及PCR的方法检测不同转染细胞中EBVLMP1蛋白的表达及核酸片段。【结果】PCR结果表明在两种不同来源LMP1转染细胞中均有EBVLMP1基因序列 ,并均能表达 6 3ku的蛋白质 ,经Westernblot和免疫组化结果证实均为EBVLMP1蛋白。【结论】来源于B95 8细胞及鼻咽癌细胞SUNE1的两种EBVLMP1基因均能在真核细胞Balb/c 3T3中表达。; 陈元郭辉玉方丹云晏辉钧; 关键词：鼻咽肿瘤 E-B病毒

鼻咽癌细胞株SUNE1中EB病毒LMP1全基因克隆及部分序列的测定被引量：9: 1999年; 目的　研究广东地区鼻咽癌（ＮＰＣ）细胞株ＳＵＮＥ１中ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因的结构特征。方法　利用聚合酶链反应从ＳＵＮＥ１细胞基因组中扩增ＬＭＰ１全长ＤＮＡ，并克隆到ｐｃＤＮＡ３载体中，采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧末端终止法测定ＳＵＮＥ１ＬＭＰ１３个外显子及２个内含子覆盖的序列，并与病毒原型Ｂ９５８ＬＭＰ１进行比较分析。结果　克隆到ｐｃＤＮＡ３中的ＳＵＮＥ１ＬＭＰ１全基因长度为２－６ｋｂ，测序长度为１３１２ｂｐ，与Ｂ９５８ＬＭＰ１比较，核苷酸与氨基酸的同源性分别为９８－５％和９６％，核苷酸及氨基酸变异主要在第３外显子，但无Ｃ端３４３～３５２密码子３０个碱基的缺失，第１外显子上有ＸｈｏⅠ酶切位点的丢失。结论　广东地区ＮＰＣ细胞株ＳＵＮＥ１中，病毒ＬＭＰ１基因与原型株之间尽管致瘤性存在差异，但仍具有较高的同源性。提示ＮＰＣ细胞中ＬＭＰ１的致瘤特征可能并非由于ＬＭＰ１; 陈元郭辉玉曹虹曹虹; 关键词：鼻咽癌 DNA测序 EB病毒

登革病毒Ⅱ型NS1基因在小鼠体内诱导的DNA免疫: 2005年; 目的　研究含有登革病毒Ⅱ型NS1基因的重组质粒肌内注射小鼠后在其体内诱导的细胞和体液免疫。方法　用含有登革病毒NS1基因的真核表达质粒pCNX2 NS1于小鼠胫前肌注射并加强免疫 2次。然后定期处死 ,采集血液标本以及小鼠脾细胞 ,检测小鼠的体液和细胞免疫。结果　在末次免疫后 4周检测到小鼠抗NS1抗体 ,并且检测到小鼠CD4+ 、CD8+ 亚群的变化。结论　含有登革病毒NS1基因的真核表达质粒pCNX2-NS1免疫小鼠后 ,可以诱导小鼠产生针对NS1的稳定特异性体液。; 杨春雨陈元晏辉钧方丹云薛耀华江丽芳; 关键词：免疫小鼠登革病毒 DNA免疫 NS1基因抗N 真核表达质粒

Epstein Barr病毒LMP1 DNA免疫小鼠免疫效果的测定: 2001年; 【目的】探讨EBV LMP1重组体DNA免疫小鼠后的免疫效果。【方法】将已构建的EBVLMP1基因 (EBVLMP1)重组质粒 pcDNA3 BLMP1肌肉注射免疫Balb/c小鼠 ,在免疫后的不同时间分别用ELISA、流式细胞仪及LDH法检测免疫小鼠体内特异性EBVLMP1抗体滴度、CD4+ /CD8+ T淋巴细胞亚群的数量变化以及EBVLMP1特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的活性。用 pcDNA3质粒及PBS作为阴性对照及空白对照。【结果】重组质粒免疫Balb/c小鼠后 ,可在外周血液血清中检测到特异性的EBVLMP1抗体 ;其脾细胞中CD4+ /CD8+ T淋巴细胞亚群数量明显高于阴性对照及空白对照 ,且可检测到EBVLMP1特异性的CTL存在。以上结果在免疫 16周之内无明显改变。【结论】EBV LMP1质粒重组体可刺激小鼠产生特异性的体液和细胞免疫 ,并且可维持一定的时间 ,具有较好的免疫原性 ,是一种有效、制备方便的EBV候选疫苗。; 陈元晏辉钧郭辉玉方丹云; 关键词：疱疹病毒 T淋巴细胞 T淋巴细胞亚群免疫效果

提纯CVB1的方法学改进和CVB1的灭活: 1999年; 目的：研究聚乙二醇沉淀和蔗糖梯度离心法提纯柯萨奇病毒Ｂ１（ＣＶＢ１）的效率，并采用β丙内酯（ＢＰＬ）将其灭活，观察ＢＰＬ的灭活效果。方法：①聚乙二醇沉淀法将病毒悬液初步浓缩；②在１０％～５０％（ｍ／Ｖ）蔗糖梯度中上样，低温超速离心；③电镜观察并做病毒活性测定；④ＢＰＬ对病毒进行灭活，测定残存毒力。结果：①病毒在５０％（ｍ／Ｖ）蔗糖处有一吸收峰，并被电镜证实；②ＢＰＬ灭活病毒彻底，灭活后病毒稀释１０２～１０１０倍接种细胞未见病变。结论：ＣＶＢ１经聚乙二醇沉淀和蔗糖梯度超速离心后收获率高，ＢＰＬ灭活彻底，保证了进一步实验的成功。; 陈国俊刘焯霖张成陈元方丹云吴金浪; 关键词：病毒灭活

2型登革病毒核酸疫苗诱导的体液免疫研究: 1999年; 为研究以２型登革病毒ＮＳ３基因构建的核酸疫苗能否诱导体液免疫，用表达２型登革病毒ＮＳ３的重组真核表达质粒ＰＳＶ·ＮＳ３直接接种Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。结果发现在接种后２周即可检测到ＩｇＭ抗体，该抗体在加强接种后滴度显著升高，６周达最高水平至少维持２个月；ＩｇＧ抗体在接种后４周可检测到，８周达最高水平至少维持２个月。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实了接种小鼠血清中有ＮＳ３特异性的ＩｇＧ抗体。这些结果表明我们接种的ＰＳＶ·ＮＳ３能诱导Ｂａｌｂ／ｃ小鼠的体液免疫。; 李向群江丽芳江丽芳方彤云陈元郭辉玉; 关键词：登革病毒核酸疫苗体液免疫

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陈元