闾宏伟
- 作品数：46 被引量：144H指数：7
- 供职机构：中南大学湘雅三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HPLC-MS法同时测定人血浆中依那普利及其代谢物依那普利拉的浓度被引量：5
- 2008年
- 目的建立一种可同时检测人血浆中依那普利及其代谢物依那普利拉的浓度HPLC-MS方法。方法采用HPLC-MS法，色谱柱为Thermo Hypersil-HyPURITY C18 （150mm×2．1mm，5μm），流动相为20mmol·L^-1醋酸铵（pH3．0，0．15％TFA）-甲醇＝47：53（v／v），流速为0．25mL·min^-1；正离子检测，电喷雾电离，喷雾电压4．5kV，选择性离子监测，分别监测m／z377（依那普利）、m／z349（依那普利拉）和m/z425（贝那普利）。结果依那普利和依那普利拉的定量下限均为1．56ng·mL^-1；线性范围均为1．6～400ng·mL^-1（n＝9，r1＝0．9997，r2＝O．9998）；提取回收率均〉80％，日内、日间变异均〈8．5％。结论该方法灵敏、快速、重现性好，可用于依那普利人体生物利用度和药物动力学研究。
- 肖遐袁洪谭鸿毅欧阳冬生裴奇闾宏伟黄志军阳国平
- 关键词：依那普利依那普利拉高效液相色谱-质谱法
- S1P2受体shRNA腺病毒载体的构建及筛选被引量：2
- 2009年
- 目的为探讨S1P2受体介导血管内皮细胞衰老的机制,构建和筛选特异性S1P2受体shRNA腺病毒载体。方法设计并合成4对靶向S1P2受体的单链寡核苷酸(ssoligo),经变性退火为双链寡核苷酸(dsoligo)插入穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle载体,测序正确后经脂质体介导转染人肺动脉内皮细胞(HPAEC),通过RT-PCR方法筛选对S1P2受体基因沉默效果最佳的穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA,提取质粒DNA,经双酶切,回收S1P2受体基因沉默效果最佳的shRNA片段,亚克隆到腺病毒表达载体(pAdeno-X),筛选出正确重组子,转染HEK293A细胞,收集重组的腺病毒,测定病毒滴度,通过Westernblot方法检测S1P2受体沉默效果。结果测序结果证实所构建的pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA质粒正确,并从4对dsoligos筛选出对S1P2受体沉默效果最佳的穿梭质粒pRNAT-H1.1/Shuttle-shRNA,经亚克隆到腺病毒表达载体。转染人肺动脉内皮细胞后,Western印迹检测显示构建的腺病毒载体pAdeno-shRNA对S1P2受体蛋白的沉默有明显效果。结论成功地构建和筛选出介导特异性shRNA-S1P2的重组腺病毒。
- 闾宏伟陈淑华阳国平朱晒红邓昊邢晓为
- 关键词：重组腺病毒短发夹RNA
- 液相蛋白质芯片检测血清C反应蛋白方法的建立被引量：2
- 2007年
- 目的建立液相蛋白质芯片检测血清C反应蛋白(CRP)的方法,探讨该方法诊断冠心病的临床应用价值。方法用聚苯乙烯荧光微珠,将抗CRP单克隆抗体包被在微珠上,将另一针对CRP不同抗原表位的单克隆抗体生物素化;包被好的微珠加入到96孔板中,将待测血清分别加入各孔,用CRP标准品建立标准曲线,各孔中加入生物素化抗CRP单抗和PE荧光素标记的链霉亲合素。在Bio-Plex液相蛋白质芯片分析仪上检测296份血清样品。同一血清标本同时用免疫比浊法测定。比较两种方法对CRP检测的敏感性和特异性。结果液相蛋白质芯片检测CRP方法对诊断冠心病的敏感性(78.3%)和特异性(87.1%)较免疫比浊法的敏感性(63.0%)和特异性(86.5%)高,χ2=28.94,P<0.001。结论建立了一种检测血清CRP的新方法,对诊断冠心病有临床应用价值。
- 袁洪闾宏伟桑海强阳国平黄志军林玲邢晓为
- 关键词：C反应蛋白
- 氧化修饰低密度脂蛋白诱导U937细胞泡沫化过程中Ubiquitin、apoB的表达研究
- 目的:单核/巨噬细胞吞噬蓄积氧化修饰的低密度脂蛋白(ox-LDL)形成泡沫细胞(foam cells)。单核细胞泡沫化过程中释放的细胞炎性因子,动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)斑块中泡沫细胞和平滑肌细...
- 杨向东闾宏伟万载阳何淑雅杨永宗
- 文献传递
- 结直肠癌外周血和腹膜腔微转移影响因素分析被引量：1
- 2009年
- 目的探讨结直肠癌患者外周血和腹膜腔微转移及其影响因素。方法收集施行手术治疗的90例结直肠癌患者和25例结直肠良性疾病患者外周血及腹腔灌洗液,RT-PCR方法检测CK-20mRNA和CEAmRNA表达;手术切除标本常规病理学分析。结果(1)结直肠癌患者外周血CK-20mRNA和CEAmRNA表达率分别为45.6%(41/90)和54.4%(49/90),两者联合检测表达的阳性率为64.4%(58/90);腹膜腔CK-20mRNA和CEAmRNA表达阳性率分别为51.1%(46/90)和58.9%(53/90),两者联合检测表达的阳性率为68.9%(62/90);上述指标均随肿瘤的浸润深度、PS因素的递进,以及淋巴结及肝脏转移而增高(P<0.05);在结直肠良性疾病患者外周血及腹腔灌洗液标本中均未检出CK-20mRNA和CEAmRNA的表达。(2)腹腔灌洗液中CK-20mRNA和(或)CEAmRNA表达的阳性率与同一指标在外周血中的表达相比无差异;外周血及腹腔灌洗液中CEAmRNA的表达与CK-20mRNA表达相比也无差异。结论采用RT-PCR方法检测结直肠癌患者外周血和腹膜腔CK-20mRNA和CEAmRNA的表达,有助于筛选亚临床转移和预测病理分期;两者的联合检测更有意义。
- 王红鲜陈道瑾向红闾宏伟杨开焰胡桂
- 关键词：逆转录聚合酶链反应腹水液
- 1-磷酸鞘氨醇2型受体调控衰老内皮细胞的功能变化被引量：1
- 2012年
- 目的:通过上调和沉默1-磷酸鞘氨醇2型受体(S1P2)的表达,探讨其对体外培养的脐静脉内皮细胞的功能影响。方法:采用转染外源S1P2受体质粒上调年轻脐静脉内皮细胞S1P2受体表达;应用RT-PCR和Western印迹检测空白对照组、空载体组和过表达组细胞的S1P2受体表达;同时采用Matrigel胶种植法,观察3组脐静脉内皮细胞的体外管状样结构生成能力;划痕实验分析内皮细胞的损伤愈合能力;迁移实验分析内皮细胞的化学趋化能力。以及通过RNA干扰沉默衰老脐静脉内皮细胞S1P2受体的表达,观察细胞的功能改变。结果:上调年轻脐静脉内皮细胞S1P2受体表达后,过表达组内皮细胞的成管能力、损伤愈合能力和细胞迁移率均明显低于空白对照组和空载体组(P<0.05)。RNA干扰沉默衰老脐静脉内皮细胞S1P2受体后,干扰组内皮细胞的管状样结构生成能力、损伤愈合能力和趋化能力均明显恢复,显著高于衰老内皮细胞组和干扰对照组(P<0.05)。结论:S1P2受体调控体外衰老内皮细胞的趋化、形态发生和损伤愈合反应的功能变化。
- 陈淑华向红阳国平邓昊袁洪闾宏伟
- 关键词：内皮细胞衰老RNA干扰
- 人单核细胞泡沫化过程中两个差异基因的表达及功能研究
- 第一部分外源性Rb基因导入对U937细胞清道夫受体CD36和细胞内apoB的影响;动脉粥样硬化是由多种因素作用,发病机制复杂的多基因病.研究调控和防治动脉粥样硬化的中心环节和关键步骤——As发病相关基因,对了解动脉粥样硬...
- 闾宏伟
- 关键词：单核细胞视网膜母细胞瘤基因清道夫受体BI载脂蛋白B表达序列标签全长CDNA
- 文献传递
- 线粒体钙单向转运体和线粒体应激关系的研究进展被引量：7
- 2016年
- 钙离子(calcium ion,Ca^(2+))在线粒体功能障碍及细胞损伤凋亡过程中发挥重要的细胞信号作用。近些年来关于Ca^(2+)通道以及其调控蛋白的研究越来越多,其中,线粒体单向转运体(uniporter)复合物的结构组成及其相关蛋白的分布特点成为主要研究热点。作为uniporter复合物中关键的通道蛋白,线粒体钙单向转运蛋白(mitochondrial calcium uniporter,MCU)可顺电化学梯度摄入Ca^(2+),将Ca^(2+)从胞质转运到线粒体基质并控制转运速率,其在胞内Ca^(2+)信号转导、Ca^(2+)稳态、线粒体能量代谢以及细胞凋亡方面具有重要意义。识别调控线粒体内Ca^(2+)信号的MCU及其相关蛋白可深入阐明线粒体应激在相关疾病中的发生发展,并为进一步的疾病治疗提供理论依据。
- 杨洁闾宏伟
- 关键词：氧化应激线粒体钙离子
- 外源性Rb基因对U937细胞泡沫化过程中载脂蛋白B的影响被引量：1
- 2005年
- 目的:研究Rb基因在U937细胞泡沫化过程中对细胞内载脂蛋白B含量的影响,初步探讨Rb基因 在泡沫细胞形成过程中的作用。方法:采用氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)孵育U937细胞,以及Ox-LDL孵育同时 导入外源性Rb基因转染U937细胞,分别于处理0 h、12 h、24 h收集细胞,半定量RT-PER与流式细胞术检测Rb mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞内载脂蛋白B的含量。平行实验重复3次,进行统计学方差分析。结果:氧 化型低密度脂蛋白孵育U937细胞泡沫化过程中,12 h、24 h Rb基因的表达显著低于对照组0 h(P<0．05);细胞内载 脂蛋白B含量则显著高于对照组0 h(P<0．05)。而U937细胞在导人外源性Rh基因后,12 h、24 h细胞内的Rb基因 的表达显著高于对照组0 h(P<0．05);细胞内载脂蛋白B含量则显著低于对照组0 h(P<0．05)。结论:外源性Rb 基因的导入可以下调细胞内载脂蛋白B的含量,表明Rb基因可能与单核细胞源性泡沫细胞形成有关,可能是影响 泡沫细胞形成的相关基因的敏感候选基因之一。
- 闾宏伟袁洪阳国平陈淑华杨向东
- 关键词：U937细胞载脂蛋白B类
- 炮制及提取方法对关木通中马兜铃酸A含量的影响被引量：6
- 2005年
- 阳国平袁洪闾宏伟黄志军谭鸿毅吴海华
- 关键词：关木通马兜铃酸A
