梁志慧
- 作品数：8 被引量：38H指数：3
- 供职机构：中山大学肿瘤防治中心更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Ad-14-3-3σ对不同辐射抗拒的鼻咽癌细胞微小RNA表达的影响被引量：5
- 2008年
- 目的:在明确Ad-14-3-3σ对不同辐射抗拒鼻咽癌(nasopharygycarcinoma,NPC)细胞CNE-1和CNE-2治疗作用的基础上,检测Ad-14-3-3σ对CNE-1和CNE-2细胞中差异表达的微小RNA(microR-NA,miRNA)的影响,探索CNE-1和CNE-2细胞中miRNA差异表达与NPC放射敏感性差异的关系。方法:用Ad-14-3-3σ转染CNE-1和CNE-2细胞;采用Paraflo microfluidic microRNA芯片检测,用激光扫描器收集杂交的图像,经LOWESS滤器规范信号后分析数据差异,根据Targetscan3.1数据库资料(http://www.targetscan.org)探索Ad-14-3-3σ对CNE-1和CNE-2中的miRNA差异表达的影响,预测其差异表达与NPC放射敏感性差异的关系。结果:Ad-14-3-3σ处理细胞以后,CNE-1与CNE-2相比较,有37个microRNA有明显差异,CNE-1中有17个上调,20个下调。其中倍数变化在3倍以上且2者检测量数量差异达到1000以上的有6个:hsa-miR-152、hsa-miR-205、hsa-miR-203、hsa-miR-7、hsa-miR-636和hsa-miR-100。结论:Ad-14-3-3σ能够改变微小RNA(microRNA,miRNA)在CNE-1和CNE-2中的表达模式,缩小CNE-1和CNE-2之间miRNA的表达差异,而这些miRNA可能跟肿瘤的发生和放疗敏感性有关。
- 王旭丹梁志慧杨惠玲唐兵赵睿颖郭禹标郑诚郑芹
- 关键词：鼻咽肿瘤MIRNA辐射耐受性
- 腺病毒载体SARS疫苗及其制备方法，冠状病毒S基因的应用
- 本发明属于生物基因工程领域，具体涉及腺病毒载体SARS疫苗，其制备方法以及相关冠状病毒S基因在制备预防非典型肺炎(SARS)疫苗方面的应用。通过生物工程手段，将相关冠状病毒S基因与缺陷型腺病毒重组结合，使保护性免疫原蛋白...
- 黄文林曾益新汪健刘然义黄嘉凌黄必军赖坤吴立志梁志慧柯妙拉吴秀菊
- 文献传递
- 腺病毒载体SARS疫苗及其制备方法，冠状病毒S基因的应用
- 本发明属于生物基因工程领域，具体涉及腺病毒载体SARS疫苗，其制备方法以及相关冠状病毒S基因在制备预防非典型肺炎(SARS)疫苗方面的应用。通过生物工程手段，将相关冠状病毒S基因与缺陷型腺病毒重组结合，使保护性免疫原蛋白...
- 黄文林曾益新汪健刘然义黄嘉凌黄必军赖坤吴立志梁志慧柯妙拉吴秀菊
- 文献传递
- T-bet对小鼠巨噬细胞(Raw264.7)生物学功能的影响
- 2006年
- 背景与目的:T-bet(TboxexpressedinTcells)是一种特异性调控Th1淋巴细胞的核转录因子,它广泛调控多种免疫细胞(如Th1、NK、CD8+、DC、B细胞等)的生物学活性。本研究观察转染小鼠T-bet基因(pcDNA3.0-mT-bet)对小鼠巨噬细胞Raw264.7生物学功能的影响。方法:构建含T-bet的真核表达载体pcDNA3.0-mT-bet,通过双酶切鉴定及测序、PCR鉴定其准确性,RT-PCR及Westernblot检测其在Raw264.7细胞中的表达。以PBS、pcDNA3.0空载体作为对照,将其瞬时转染入Raw264.7细胞,48h后观察其对细胞周期、细胞表面分子MHCⅠ/Ⅱ表达的影响,以及对FITC-右旋糖酐(FITC-dextran)的吞噬能力、一氧化氮(nitricoxide,NO)分泌水平及T-bet对小鼠白血病细胞L1210的杀伤活性。结果:载体pcDNA3.0-mT-bet构建成功并在Raw264.7细胞中表达;T-bet对Raw264.7细胞周期没有影响(P>0.05);经T-bet修饰后,细胞表面MHCⅠ类分子的表达(24.8±0.6)高于空载体组(20.8±0.7),有统计学意义(P<0.05);但两组间MHCⅡ类分子的表达无显著性差异(P>0.05)。T-bet修饰组吞噬Dextran的平均荧光强度(32.8±0.8)高于空载体组(28.2±0.4),有统计学意义(P<0.05)。在无脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激时,T-bet组NO的产生量[(1.7±0.6)pmol]高于空载体组,两组相比差异有显著性(P<0.05);经10μg/mlLPS持续刺激20h后,T-bet组NO的产生量[(15.6±1.6)pmol]显著高于空载体组[(10.5±1.3)pmol](P<0.05)。pcDNA3.0-mT-bet对L1210细胞的体外杀伤活性[(51.9±3.5)%]明显高于空载体组[(35.6±2.1)%],差异有显著性(P<0.05)。结论:T-bet可诱导Raw264.7细胞表达MHCⅠ类分子,增强其对Dextran的吞噬能力,促进其分泌NO,增加其对L1210细胞的杀伤活性,但对其细胞周期及MHCⅡ类分子的表达无影响。
- 肖林檀卫平肖霞梁志慧吴江雪李鸿立刘然义黄必军黄文林
- 关键词：小鼠巨噬细胞杀伤活性
- 不同辐射抗拒鼻咽癌细胞微小RNA差异表达的研究被引量：26
- 2007年
- 目的:在验证鼻咽癌(nasopharygycarcinoma,NPC)细胞CNE-1和CNE-2不同辐射抗拒性的基础上,探索微小RNA(miRNA)在CNE-1和CNE-2中的表达差异。方法:通过观察X线照射对CNE-1和CNE-2细胞克隆形成数目的影响,利用SigmaPlot软件进行分析及线性二次模型拟合存活曲线,比较CNE-1和CNE-2细胞剂量存活曲线及其生物学参数;采用Paraflo microfluidic microRNA芯片检测,用激光扫描器收集杂交的图像,经LOWESS滤器规范信号后分析数据差异,根据Targetscan3·1数据库资料(http:∥www·targetscan·org),预测CNE-1和CNE-2细胞microRNA差异表达与NPC放射敏感性差异的关系。结果:发现在CNE-1和CNE-2细胞中miRNA的差异表达,即与CNE-2细胞比,在检测的326个microRNA中,CNE-1细胞中有20个miRNA上调,13个miRNA下调,其中检测量的绝对值在2000以上且两者相差在3倍以上的miRNA有hsa-miR-152、hsa-miR-7、hsa-miR-205和hsa-miR-572;分析结果提示明显差异表达的miRNA与放疗敏感性密切相关。结论:不同辐射抗拒NPC细胞株CNE-1和CNE-2细胞的microRNA的表达有差异;差异表达的miRNA与放疗敏感有关。
- 王旭丹杨惠玲郭禹标梁志慧赵睿颖夏云飞苏勇Mong-Hong Lee王瑾郑芹
- 关键词：鼻咽肿瘤CNE-2细胞MICRORNA
- 人内皮抑素蛋白与人内皮抑素腺病毒抗肿瘤作用比较及作用机理研究
- 肿瘤血管生成是实体瘤生长和转移的必备条件。因此阻断肿瘤新生血管的生成，可以阻止肿瘤的发展，为实体瘤治疗提供了新的策略。而且抗血管生成治疗针对基因组结构相对正常的血管内皮细胞，不产生耐药性，也无明显毒副作用。本研究通过体内...
- 梁志慧
- 关键词：肿瘤治疗学腺病毒内皮抑素血管生成抗肿瘤作用
- 文献传递
- 相同遗传背景不同辐射抗拒鼻咽癌细胞miRNA差异表达的研究被引量：9
- 2009年
- 目的:在验证相同遗传背景鼻咽癌(NPC)细胞CNE-2R和CNE-2不同辐射抗拒性的基础上,探索微小RNA(miRNA)在CNE-2R和CNE-2中的表达差异与肿瘤辐射抗拒的关系。方法:通过观察X线照射对CNE-2R和CNE-2细胞克隆形成数目的影响,利用SigmaPlot软件进行分析及线性二次模型拟合存活曲线,比较CNE-2R和CNE-2细胞剂量存活曲线及其生物学参数;采用μParafloTM微流体芯片检测,用激光扫描仪(GenePix4000B,Molecular Device)采集杂交图像,经LOWESS滤器规范信号后分析数据差异,根据Targetscan311数据库资料(http://www.targetscan.org),预测CNE-2R和CNE-2细胞miRNA差异表达与NPC不同辐射抗拒的关系。结果:发现在CNE-2R和CNE-2细胞中存在miRNA的差异表达,即与CNE-2细胞比,在检测到的719个miRNA中,CNE-2R细胞中有37个上调,29个下调,其中检测量的绝对值≥2000且两者相差≥2倍的miRNA共12个:hsa-miR-200b、hsa-miR-224、hsa-miR-26b、hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-205、hsa-let-7e、hsa-let-7g、hsa-miR-19b、hsa-miR-24、hsa-miR-103、hsa-miR-106b和hsa-miR-93。分析结果表明显著差异表达的miRNA与辐射抗拒密切相关。结论:相同遗传背景不同辐射抗拒NPC细胞株CNE-2R和CNE-2细胞的miRNA表达存在差异;差异表达的miRNA与辐射抗拒相关。
- 曲昌菊王旭丹杨惠玲郭禹标梁志慧赵睿颖夏云飞Lee Mong-hong郑芹
- 关键词：鼻咽肿瘤CNE-2细胞MICRORNA辐射抗拒
- 小鼠T-bet基因重组腺病毒载体的构建被引量：3
- 2004年
- 【目的】构建小鼠T-bet基因重组腺病毒载体,为T-bet基因在支气管哮喘治疗中的作用研究提供有效的T-bet生物表达系统。【方法】采用内切酶从质粒T-bet/GFP-RV中切获约1.7kb的小鼠T-betcDNA片段,与穿梭质粒pShuttle连接,再通过稀有酶切位点将含T-betcDNA的表达盒与Adeno-X腺病毒载体骨架连接,构建重组载体pAdeno-T-bet,测序鉴定无错配及插入移位等DNA顺序改变,并转染HEK293细胞,出现CPE后取含病毒上清的细胞培养液抽提病毒DNA行PCR鉴定。【结果】PCR及酶切证实:T-betcDNA正确克隆到穿梭质粒pShuttle中,带T-betcDNA的表达盒成功重组到腺病毒载体基因组E1A缺失区,并在HEK293细胞中成功包装出具有感染活性的重组腺病毒pAdeno-T-bet。【结论】本实验成功构建了小鼠T-bet基因重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中成功包装出重组腺病毒。
- 檀卫平黄嘉凌刘然义梁志慧黄必军麦贤弟黄绍良黄文林
- 关键词：T-BET腺病毒载体HEK293细胞重组腺病毒酶切位点细胞培养液
