刘步云
- 作品数：5 被引量：56H指数：2
- 供职机构：南京工业大学食品与轻工学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划江苏省“青蓝工程”基金国家自然科学基金预研项目更多>>
- 相关领域：生物学理学医药卫生化学工程更多>>
- 重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体蛋白的柱上复性被引量：1
- 2008年
- N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶(NAO)具有广泛的底物选择性,可用于多种活性氨基酸的酶法拆分,具有广阔的工业应用前景。文中采用多种洗涤剂对重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体进行洗涤去杂,并用DEAE Sepharose Fast Flow层析柱和三缓冲体系作为复性系统对重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体进行复性实验。结果表明,4mol/L尿素与0.5%Triton X-100联合洗涤可以大量去除杂质;三缓冲体系能有效地实现重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体的柱上复性。在流速为0.5 mL/min,尿素梯度为21 mL,尿素终浓度为1.8mol/L,蛋白质上样量为0.99 mg的实验条件下,蛋白回收率和复性酶比活分别达到52%和10.27 U/mg。
- 黄东健姚忠刘步云李环
- 关键词：离子交换包涵体复性
- 螯合树脂对铜离子的吸附动力学和热力学被引量：52
- 2009年
- 针对以谷氨酰胺-铜(II)配合物为供体酶法制备茶氨酸体系,研究了D401螯合树脂对Cu2+的吸附,探讨了吸附过程的热力学和动力学,通过红外光谱鉴定了树脂的配位结构.结果表明,树脂吸附量随离子浓度和温度升高而增加,当pH为5.6时吸附量最大,达1.887mmol/g.不同温度下Langmuir方程均呈现很好的拟合度.热力学平衡方程计算得ΔG<0,ΔH=21.5kJ/mol,ΔS>0,表明该吸附过程是自发的、吸热、熵增加的过程.动力学研究表明,该过程符合准二级动力学模型,吸附反应速率由颗粒扩散和液膜扩散共同控制.该树脂在较宽的pH范围内对Cu2+具有很好的选择吸附性,可用于酶转化茶氨酸体系中Cu2+的去除.
- 刘步云姚忠周治徐虹韦萍
- 关键词：螯合树脂铜离子吸附等温线热力学动力学茶氨酸
- 离子交换法分离S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸被引量：1
- 2009年
- 采用离子交换法对酶法合成的S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸(S-Bzl-GGC)进行了分离纯化.研究了QSephroseFF阴离子交换树脂对S-Bzl-GGC的吸附等温线,很好地符合Sips吸附等温线模型.考察了pH值、洗脱梯度、流速和进样量等条件对纯化效果的影响,建立了一套基于QSephroseFF阴离子交换树脂的纯化方案.结果表明,在pH8.2、洗脱梯度0～30%B(Tris-HCl缓冲液+1mol/LNaCl)12mL、流速2mL/min、进样量500μL的优化条件下,经一步分离,产物纯度可达98.5%,经1H-NMR鉴定产物结构正确.
- 刘步云周治姚忠吴明刚宋希文佘维娜肖彦羚韦萍
- 关键词：吸附等温线离子交换纯化
- 重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体的稀释复性被引量：1
- 2008年
- N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶(N-Acetylornithine deacetylase,NAO)是一种重要的用于手性拆分的酶,具有广泛的底物选择性,常用于多种活性氨基酸的酶法拆分。采用稀释复性法研究了重组NAO包涵体的复性条件,如蛋白浓度、复性液中尿素浓度、pH、GSH浓度及c(GSH)/c(GSSG)比例,同时对稀释操作方式进行了考察,得到了较为适宜的复性条件。结果表明,尿素能有效抑制复性过程中蛋白质的聚集,随着蛋白质浓度的增加,复性效果变差。当复性缓冲液中尿素浓度为2 mol/L,GSH浓度为5 mmol/L,c(GSH)/c(GSSG)为2.5,pH为8.5,在4℃下进行分批稀释复性操作,复性后重组NAO的活性为1.077 U/mL,比酶活达到14.943 U/mg,与可溶性表达的NAO比较,复性率达到21.48%。
- 黄东健姚忠刘步云吴明刚邓海霞
- 关键词：包涵体复性
- WRK对枯草芽孢杆菌NX-2产出的γ-谷氨酰转肽酶的不可逆抑制动力学被引量：2
- 2010年
- γ-谷氨酰转肽酶(GGT;EC2.3.2.2)催化的酰基转移反应可用于制备各种具有生理活性的谷氨酰化合物,对其开展酶活力不可逆抑制动力学研究对于阐明GGT的作用机制具有重要意义。今以化学抑制剂Woodward's Reagent K(WRK)与枯草芽孢杆菌NX-2产出的GGT进行不可逆抑制反应,根据邹氏理论测得WRK对GGT不可逆抑制反应的微观速率常数ki为0.03015s-1,WRK与酶结合常数KI为1.352mmol·L-1。有抑制剂存在下GGT与供体γ-谷氨酰对硝基苯胺的亲和力常数Km*=3.245mmol·L-1,GGT酰基化最大反应速度Vmax*=0.3771mmol·(L·s)-1。通过对GGT的失活动力学分析得到,失活反应级数为1.313,说明在GGT活性部位至少有一个谷氨酸(或天冬氨酸)残基参与催化反应。
- 肖彦羚周治姚忠宋希文佘维娜刘步云徐虹韦萍
- 关键词：动力学
